农杆菌介导的杜氏盐藻Dscbr基因转化紫花苜蓿的初步研究

利用农杆菌介导法进行紫花苜蓿遗传转化研究．将从盐生杜氏藻(Dunaliella samlina)中克隆到的抗逆基因Dscbr(编码一种早期光诱导蛋白)导入紫花苜蓿栽培种“中苜一号”,获得52个转化株系．经过卡那霉素抗性鉴定和PCR分子检测,获得6株阳性苗,PCR阳性率为11．54％．结果表明Dscbr基因已整合到苜蓿的基因组中．     

苜蓿花叶病毒复制酶基因全长cDNA植物表达载体的构建和对烟草的转化

将苜蓿花叶病毒中国分离株(Alfalfa mosaic virus Chinese isolate，A1MV-Ch)的复制酶P2亚基(90 kD蛋白)基因的全长cDNA构建到植物表达载体pROKⅡ中，得到重组植物表达载体pAIMV-FL．用三亲融合法导入农杆菌LBA4404，并转化烟草，经PCR检测，获得了含全长cDNA的转基因烟草植抹．     

根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化小麦

利用根癌农杆菌对 3种基因型小麦进行了转化研究 .发现基因型对转化有明显影响 .将小麦品种烟优 36 1、烟 10 3、核生 3号的胚性愈伤组织用含报告基因NPTⅡ和抗盐基因Na H 反向转运AtNHX1的农杆菌菌株pROK2AT GV310 1感染和共培养后 ,用巴龙霉素 5 0 - 15 0mg L筛选抗性愈伤组织及转化植株 .对抗性植株的总DNA用AtNHX1基因的特异引物进行PCR检测 ,目的基因的PCR阳性频率为 1.3(烟 10 3)和 2 .9% (核生 3号 ) .Southern杂交证实外源基因已经整合到小麦的基因组中     

胰蛋白酶抑制剂抗虫基因转化烟草的研究

实验用携带质粒pAM194/TI的根癌农杆菌LBA4404转化烟草,通过筛选,共获得35株卡那霉素抗性苗.GUS组织染色、PCR检测及抗虫试验表明胰蛋白酶抑制剂抗虫基因已经成功地整合进再生植株染色体基因组中,有些已正确表达.     

农杆菌介导的大豆反义fad2-1基因转化烟草研究

以烟草无菌苗叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导法,将大豆反义油酸脱饱和酶基因导入烟草中,经梯度卡那霉素筛选,获得可在含75mg/L卡那霉素选择生根培养基上再生的抗性植株75株,其中67株抗卡那霉素植株的PCR分析扩增出目的片段;RT-PCR分析表明该基因在烟草中表达.结果表明大豆反义油酸脱饱和酶基因在烟草基因组中整合和表达.这为大豆反义油酸脱饱和酶基因转入大豆和表达奠定基础,也为烟草基因工程育种提供了依据.     

根癌农杆菌法转化烟草的条件探索

 利用含有四环素阻遏蛋白,具有卡娜霉素抗性的烟草种子为实验材料,采用根癌农杆菌介导转化中的叶圆盘法,将外源基因导入烟草愈伤组织,建成可诱导表达细胞质和细胞核CaM/CaM结合多肽的转基因烟草体系.在获得转基因植物的过程中,通过比较影响根癌农杆菌转化频率的各种因素,表明植物材料的选择和培养,农杆菌的培养和稀释,植物材料与农杆菌共培养的程度及转基因植株的筛选条件是影响农杆菌转化效率的重要因素.     

绿色荧光蛋白基因在烟草植株中的表达

用冻融法将含有绿色荧光蛋白基因的质粒ｐＧＬ２－ＧＳ导入农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４（ｐＴＯＫ２３３），两个质粒发生同源重组，形成一个元载体ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ，农杆菌菌株ＬＢＡ４４０２４（ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ）经叶盘法转化烟草，筛选具有卡霉素抗性的愈伤组织，诱导成苗、ＰＣＲ扩增发现，绿色荧光蛋白基因在９０％的再生存在，在荧光显微镜下，使用蓝色激发光观察再生植株的徒手切片和压片发现，８０％以上的再生植株     

由TMV54103蛋白基因构建的转基因番茄及其对TMV的抗性

通过土壤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的介导,将烟草花叶病毒(TMV)的54103蛋白cDNA转入番茄植物中,得到了转基因植株.这些植株抗卡那霉素,具有胭脂碱合成酶的活性.DNA的PCR扩增及Northernblot分析表明,54103蛋白基因已整合到番茄基因组上.攻毒实验表明,未转基因的对照组接种病毒2周后即出现花叶,并且随着时间的推移,花叶症状更加典型.而转基因的植物接种病毒后一直到开花结果都未见发病,即没有花叶出现.     

绿色荧光蛋白基因在烟草植株中的表达

用冻融法将含有绿色荧光蛋白基因的质粒ｐＧＬ２－ＧＳ导入农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４ （ｐＴＯＫ２３３），两个质粒发生同源重组，形成一个新的二元载体ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ．农杆菌菌株ＬＢＡ４４０４ （ｐＴＯＫ２３３－ＧＳ） 经叶盘法转化烟草，筛选具有卡那霉素抗性的愈伤组织，诱导成苗．ＰＣＲ 扩增发现，绿色荧光蛋白基因在９０％ 的再生植株中存在．在荧光显微镜下，使用蓝色激发光观察再生植株的徒手切片和压片发现，８０ ％ 以上的再生植株都能不同程度地发出绿色荧光．多数植株的根尖和叶脉都发光，一些植株的气孔、叶表皮或叶绒毛也发光     

利用农杆菌介导法将抗虫基因导入油菜的研究

以油菜的子叶柄作为转化的受体材料,经农杆菌感染和共培养,在含卡那霉素的筛选培养上诱导产了大量的不定芽,经生根培养,获得了再生植株,通过PCR扩增和基因组Southern杂交分析,证明其中5株为转基因植株,对转基因植株进行抗虫性检测,有2株表现出较好的抗虫性。     

根癌农杆菌介导大麦Mlo反义基因转化小麦

应用含有大麦Mlo反义基因表达载体的根癌农杆菌菌株Agl Ⅰ，对3种基因型小麦(核生3号、烟优361、扬麦158)的愈伤组织进行了转化．从其中2种基因型获得23株转基因植株，有2株是白化苗，转化频率分别为1．9％(核生3号)和2．8％(扬麦158)．PCR及Southem分析表明，外源基因已整合进植物基因组．实验结果表明，筛选压力的存在对转基因植株的获得至关重要，在无筛选压力下未获得转基因植株．7棵转基因植株移栽至大田后正常结实．     

泛素启动子在转基因植物中的应用

启动子是基因表达调控的重要元件,在转基因植物中,选择高效率的启动子是高效率表达外源基因的关键.泛素启动子以其启动效率高、甲基化程度相对较低、遗传性状稳定等特点而成为目前研究较多的启动子之一.综述了泛素启动子研究现状,包括泛素基因的结构特点、泛素启动子的高效机制及在转基因植物中的应用和存在的问题.     

论转基因植物的研究进展

随着植物基因工程技术的发展,转基因植物的研究和开发取得了令人瞩目的成绩,转基因植物的产业化前景越受到公众的关注．本文介绍转基因植物的研究进展并分析转基因植物在农业和医疗的应用及发展前景。     

核酶转基因载体的构建及在烟草原生质体中对TMV感染的抑制作用

设计切割烟草花叶病毒RNA的锤头型核酸Rz－2，分别以pKyLx7和pBin19为载体，构建含Rz－2基因及核酸和底物连接的RzSb－2基因的重组质粒，通过三亲交配将目的基因转入土壤农杆菌中的Ti质粒．重组Ti质粒通过PEG法转化烟草原生质体，同时对转化的原生质体接种TMVc一定时间后以半叶法检测原生质体中病毒的侵染性．结果表明转基因原生质体中TMV侵染性明显低于未转基因的对照，推测病毒在转基因的原生质体中复制受到干扰；且核酸Rz－2（正向）表达后作用最为明显，核酸连底物RzSb－2（正向）与RzSb～2（反向）之间有明显差别．     

由TMV 54×10~3蛋白基因构建的转基因番茄及其对TMV的抗性

通过土壤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）的介导,将烟草花叶病毒（ＴＭＶ）的５４×１０３蛋白ｃＤＮＡ转入番茄植物中,得到了转基因植株．这些植株抗卡那霉素,具有胭脂碱合成酶的活性．ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　ｂｌｏｔ分析表明,５４×１０３蛋白基因已整合到番茄基因组上．攻毒实验表明,未转基因的对照组接种病毒２周后即出现花叶,并且随着时间的推移,花叶症状更加典型．而转基因的植物接种病毒后一直到开花结果都未见发病,即没有花叶出现．     

野苋菜凝集素基因的克隆及抗蚜性

通过PCR从苋科植物野苋菜Amaranthus viridis L.基因组DNA中扩增出野苋菜凝集素的核基因片段AVA。序列分析结果表明该基因为1831 bp,含有一个922 bp的内含子和两个分别为212 bp和697 bp的外显子。采用反向PCR技术获得了该基因的编码区克隆。分别构建含有内含子和不含内含子的AVA基因植物表达载体pBI121AVA-GUS和pBI121AVAc-GUS,通过根癌农杆菌介导法转化烟草。PCR、GUS检测结果均表明AVA基因不仅已整合到烟草基因组DNA中,而且初步表明转基因烟草有AVA蛋白表达。抗蚜实验表明含内含子和无内含子的AVA基因在转基因烟草中的抗蚜能力不同,转AVA和AVAc烟草对蚜虫的抑制率分别为60.81%和50.63%,有的植株高达97%。实验结果表明所克隆的AVA基因是具有抗蚜能力的苋菜凝集素基因家族中的新成员。     

害虫对转基因植物抗性进化的计算机模拟

采用人工生命的方法，定量模拟了不同条件下害虫对转基因植物抗性性的进化速度。结果显示只转入植物一个毒性基因常使害虫在短时间内产生抗性，若转３－４个不会产生交互抗性的毒性基因则可大大推迟到或阻止抗性的产生。