银染mRNA差异显示法的建立及其应用

以银染mRNA差异显示方法对原发及转移灶胃癌标本总RNA为研究对象进行银染差示分析和回收差异条带,从中获得系列差异表达片段。随机选取5个从原发性胃癌样品回收的表达条带,以取自体外培养胃癌细胞株的RNA进行点杂交验证,均被证实为真实带。对2个差异表达片段进行分析、测序和GenBank同源比较结果表明：MGD1片段与肿瘤转移相关基因MTA1完全同源,属胃癌转移相关基因;PGD2与胃癌转移抑制相关,并与细胞周期抑制蛋白p27／Kip1具99％的同源性。结果表明,银染差异显示法具有快速、直观、假阳性率低等优点,同时也为进一步研究胃癌转移的相关基因提供了新线索。     

Mutations analysis of STK11 ene in Chinese families with Peutz-Jeghers syndrome

Peutz-Jeghers syndrome (PJS) is an autosomal dominantly inherited disease characterized by multiple gastrointestinal hamartomatous polyps and melanin spots on lips and buccal mucosa, with an increased risk for various cancers. ThePJS gene, a potential tumour suppressor gene, encoding a serine/ threonie kinase (STK11), was mapped to chromosome 19p13.3. To investigate the mutations of STK11 gene in Chinese with PJS, we analyzed its coding sequence in fifteen patientsand twenty unaffected members of six families, including three multigenerational families with PJS and three sporadic families with PJS, by PCR, PCR-DHPLC and DNA sequencing techniques. Ten point mutations were found in the six families, including five missense mutations, one acceptor-splice site mutation, a nonsense mutation and three silent mutations. Our data showed that five missense mutations occurrd at codon 123 (CAG to CAT) in exon 2, codon 161 (ATT to AGT) in exon 4,codon 194 (GAC to GAG) in exon 4, codon 245 (CTC to TTC) in exon 5 and codon 354 (TTC to TTG) in exon 8. One kind of nonsense mutation was detected at codon 37(CAG to TAG) in exon 1. Furthermore, we found an intronic mutation at a splice-acceptor site: a one base substitution from AG to AA in intron 4. These mutations were not detected in 20 normal DNA samples. In three sporadic families, only in one patient, we detected a missense mutation in exon 5. In addition, we found three silent mutations, which may cause polymorphisms of STK11 gene in introns 1(+36), 3(-51) and 5(+27). These results indicated that the point mutation in STK11 might be involved in PJS pathogenesis. Mutation frequency is higher in the families suffering PJS in three or more generations than that of the sporadic cases.     

Mutations analysis of STK_(11) gene in Chinese families with Peutz-Jeghers syndrome

Peutz-Jeghers syndrome (PJS) is an autosomal dominant disease that is characterized by multiple gastrointestinal hamartomatous polyps and melanin spots on lips and buccal mucosa at young age[1,2]. Previous studies have demonstrated that PJS predisposes carriers to cancers of gastrointestinal tract, uterus, ovary, testis, breast and other extragastrointestinal organs[3—5]. The STK11 gene, encoding a serine/threonine kinase at chro-mosome 19p13.3, was identified in 1998 as the main causativ…     

中国人结直肠癌患者碱基切割修复基因胚系突变及与腺瘤样息肉基因体细胞突变的关系研究

取42例经过病理确认的结直肠癌患者癌组织及癌旁正常组织,抽提基因组DNA,应用单链构象多态性分析(SSCP)、变性高效液相色谱(DHPLC)分析,结合DNA直接测序,在全基因分析humanmutY homologue(MYH)基因胚系突变的同时,探讨其对结直肠癌细胞adenomatous polyposis coli(APC)基因体细胞突变的影响.结果42例患者中检出6例(14.29%)携带MYH基因的胚系突变,其中3例(7.14%)为MYH基因第2外显子单体型突变c.53C>T/c.74G>A(p.Pro18Leu/p.Gly25 Asp),3例(7.14%)为第12外显子的单碱基替换导致的错义突变c.972G>C(p.Gln324His).初步分析显示,这两种突变在正常对照组的检出较低,仅为3/213(1.41%)和0/59(0%).另一方面4/6例携带MYH基因胚系突变患者的癌组织样本中检出5个APC基因体细胞突变.本文结果提示,散发性结直肠癌患者中频繁检出MYH基因的胚系突变,其存在可能导致细胞DNA氧化损伤修复功能减弱,并使机体细胞APC基因发生突变的风险增高,从而可能参与部分结直肠癌的发生.     

PTEN抑癌基因与胃癌关系的研究进展

PTEN基因是近年发现的新抑癌基因,目前已经证实其与多种肿瘤的发生发展有密切的关系。在许多肿瘤中都有PTEN基因表达异常,且其表达异常与肿瘤发生发展的生物学行为有一定相关性。胃癌是我国常见的多发性的恶性肿瘤之一,在胃癌组织中PTEN通过多种途径表达降低。PTEN的突变和异常表达与胃癌的发生、发展、浸润、转移显著相关,可能成为检测胃癌的有效指标之一。     

PD-L1基因在正常胃和胃癌组织中的表达及其可变剪接变异体的鉴定

目的:检测PD-L1基因的常规和可变剪接变异体mRNA在胃癌组织和正常胃组织中的表达。方法:以RT-PCR方法从胃癌和正常胃组织的总RNA中扩增PD-L1的cDNA,并将扩增产物通过测序鉴定。结果:4例胃癌标本中,从病例2中扩增到常规和可变剪接变异体,但以常规剪接体为主,病例3仅扩增到常规剪接体PD-L1Ⅰ,病例4扩增到其可变剪接变异体PD-L1Ⅱ,而病例1两种剪接形式均未扩增到。在2例正常胃组织中均只扩增到可变剪接变异体PD-L1Ⅱ。结论:PD-L1基因在大多数胃癌组织中表达,正常与胃癌组织中还表达可变剪接变异体PD-L1Ⅱ,提示表达产物的剪接方式具有多样性。     

应用PCR－SSCP银染技术检测消化系统肿瘤的P53基因突变

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术，初步研究了肝细胞癌、胃癌和大肠癌中Ｐ５３基因的第６和第７外显子的分子结构改变。对来自癌组织ＤＮＡ和正常组织ＤＮＡ的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳带迁移作对比分析，发现３０例肝癌病人中，６例肝癌样品电泳带迁移异常；２６例胃癌病人中，４例胃癌样品电泳带迁移异常；２９例大肠癌病人中，６例大肠癌样品电泳带迁移异常。依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，研究结果表明：该三组病人中，Ｐ５３基因第６、７外显子的突变率分别为２０．０％，１５．４％和２５．０％。同时，也间接提示了Ｐ５３基因突变可能是肝细胞癌、胃癌和大肠癌中一种较多见的分子结构改变。     

慢性粒细胞性白血病不同病期bcr-abl基因 P53基因突变研究

探讨 bcr- abl融合基因、P53 基因对 CML不同病期演变的作用 .采取 CML2 6例不同分期共30份标本 ,应用逆转录—聚合酶链反应 (RT- PCR)技术检测 bcr- abl融合基因 ,应用多聚酶变 .结果显示 2 4例 CML慢性期中 2 2例 bcr- abl基因 ( ) ,6例急变期中 5例 bcr- abl基因 ( ) ;CML慢性期未发现 P53 基因突变 (0 / 2 4 ) ,急变期发现 2例突变 (2 / 6 ) .2例 P53 基因突变中 ,1例 bcr- abl基因( ) ,1例 bcr- abl基因 (- ) .由此可得 P53 基因突变在 CML慢性期少见 ;P53 基因突变对部分 CML急变有一定作用     

中国人P型铜转运ATP酶基因突变的初步研究

应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）及测序等方法分析了１４１便ＷＤ患者ＡＴＰ７Ｂ基因第７、９及１４外显子的部分ＤＮＡ序列改变，通过对患者ＤＮＡＴ下沉人ＤＮＡＲＰＣＲ－ＳＳＣＰ电泳带迁移作对比分析，发现在１４１例患者中第７、９及１４外显子ＰＣＲ扩增产物迁移异常才分别为４例、６例和４０例，依据ＤＮＡ物单链构聚与分子电泳迁移的关系，提示该组病人中ＡＴＰ７Ｂ基因第７、９和１４外显子的突变率     

High frequency of p53 intronic point mutations in laryngeal squamous cell carcinoma

Intronic point mutations are rare and totally unknown for human laryngeal squamous cell carcinoma (LSCC). To explore the relationship of p53 gene intronic mutation to the development of human LSCC, DNA was extracted from both tumor tissues and matched normal tissues of 55 patients with LSCC in northeast of China. Polymerase chain reaction amplification-single strand conformational polymorphism (PCR-SSCP) combined with silver staining and DNA direct sequencing were used to detect mutations in exons 7～8 (p53E7 and p53E8) and introns 7～8 (p53I7 and p53I8) of p53 gene. The p53E7 mutation was detected in 17 out of 55 patients, and the p53I7 mutation in 21 patients. No mutation was found at p53E8 or p53I8 site. The difference between tumor group and paired normal group on the rates of both p53E7 and p53I7 mutations was statistically significant. The rate of p53I7 mutations in tumor tissue was higher than that of normal tissue, and so was that of p53E7. Sequence analysis revealed that most p53I7 mutations were at the nucleotides in the branch point sequence or the polypyrimidine tract in the 3′-splice acceptor site of the intron 7. The high incidence of p53 gene intronic mutation in LSCC indicates that genetic changes within the noncoding region of the p53 gene may serve as an alternative mechanism of activating the pathogenesis of human laryngeal squamous cell carcinoma. Mutations in the noncoding region of this gene should be further studied.     

影响胃癌根治术后复发转移的因素

目的探讨影响胃癌根治术后复发转移的因素。方法回顾性分析302例胃癌患者根治术后肿瘤复发转移的情况,并采用Logistlc进行单因素和多因素回归分析。结果本组患者根治术后复发转移率为45．4％,术后2年内复发转移率73．7％,2-5年复发转移率21．％,5年后复发转移率4．4％;单一复发转移占83．2％,多部位复发转移占16．8％。单因素分析显示胃癌根治术后复发转移与肿瘤大小、原发灶部位、癌细胞分化程度、大体分型、癌细胞浸润深度、辅助化疗、术后病理、TNM分期有关,经过多因素回归分析后显示肿瘤大小、辅助化疗、TNN分期为胃癌根治术后复发转移的独立因素。结论胃癌根治术后复发转移大部分在术后2年内,以单一复发转移为主;肿瘤大小、1NM分期及辅助化疗为胃癌根治术后复发转移的独立影响因素。     

替吉奥联合奥沙利铂治疗晚期胃癌的近期疗效观察

目的观察替吉奥联合奥沙利铂治疗晚期胃癌的近期疗效和不良反应。方法选取36例晚期胃癌患者,替吉奥胶囊80mg/m^2,分2次在早晚饭后半小时用水吞服,连续服用14天停7天,21天为1疗程。第1天奥沙利铂注射液130mg／m^2避光缓慢滴注2h-4h。连续治疗2个疗程后评价疗效。结果总有效率为52．8％（19／36）,临床收益率为81．6％（29／36）;主要不良反应为消化道反应、骨髓抑制,且多绝大多数为I-Ⅱ度。结论替吉奥联合奥沙利铂治疗晚期胃癌近期疗效较好,不良反应可以耐受。     

甘肃武威市胃癌危险因素病例对照研究

选取甘肃省武威市494例胃癌病人并按性别、年龄等为配比条件，选取该市988名健康人群进行1：2配对的病例对照研究。Logistic条件回归分析表明，长期饮用地表水、食用腌菜、肿瘤家族史、胃慢性疾病史等与胃癌发生存在显著正关联．胃慢性疾病史、不良饮食习惯及肿瘤家族史可能是胃癌的危险因素．     

胃癌中p53基因失活及其蛋白产物的免疫组化分析

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂我及免疫组化等方法同步研究２５例胃癌标本的ｐ５３基因突变，杂合性丢失及蛋白持表达，在２２例胃癌中同时获得有关ｐ５３基因突变和杂合性丢失的检测结果，被检出ｐ５３基因突变的５例胃癌中，２例伴有杂合性丢失，３例仅有ｐ５３基因突变。     

EXO1基因单核苷酸多态性与云南汉族人群胃癌的相关性研究

胃癌是一种由基因和环境因素相互作用、在世界范围内最常见的恶性肿瘤之一.该研究用PCR-RFLP的方法,在270名健康对照个体和239名胃癌患者共509人的云南汉族人群中,对核酸外切酶1(exonuclease 1,EXO1)基因rs1635517、rs1776177、rs851797、rs1635498和rs1776148五个单核苷酸多态(single nucleotide polymorphisms,SNPs)位点进行多态检测.结果采用SPSS16.0、PHASE、HaploView4.2软件进行数据统计分析,用Logistic模型在95%置信区间内进行相关性风险度测算.结果显示,位于EXO1基因5UTR的位点rs1635517的CC基因型携带者和C等位基因携带者患胃癌的相对风险度显著升高(p＜0.05),提示该多态位点可能与胃癌发生相关.其余4个位点虽检测到多态,但它们的基因型和等位基因频率在病例和对照中无显著差异,提示这4个位点可能与云南汉族人群的胃癌发生不相关.     

替吉奥联合多西他赛方案治疗进展期胃癌的临床观察

目的观察替吉奥联合多西他赛治疗进展期胃癌的近期疗效和毒副反应。方法44例进展期胃癌患者采用以下方法化疗：替吉奥胶囊每天80mg／m^2,分2次,餐后口服,第1-14天;多西他赛75mg／m^2,第1天,静脉滴注2-3h,21d为1个周期,至少完成2个周期。评价客观疗效和不良反应。结果44例均可以评价疗效。CR3例（6．8％）,PR18例（40．9％）,SD14例（31．8％）,PD9例（20．5％）,RR47．7％,DCR79．5％。中位疾病进展时间为7．2月,中位生存期为11．3月。不良反应主要是骨髓抑制、胃肠道反应、脱发及口腔黏膜炎。结论替吉奥联合多西他赛方案治疗进展期胃癌的疗效较好,不良反应可以耐受,值得进一步研究应用。     

乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞内钠、磷浓度的影响

采用OlympusAu640生化分析仪,检测了乙酰胆碱作用后培养的人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞内钠和磷的含量,以探讨乙酰胆碱对人胃粘膜上皮细胞和胃腺癌细胞内钠、磷浓度的影响。结果发现:与正常胃粘膜上皮细胞比较,胃腺癌细胞内钠浓度偏高(P<0 001),而磷浓度降低(P<0 01)。在乙酰胆碱作用下,胃腺癌细胞内钠和磷浓度均升高(P<0 05);正常胃粘膜细胞仅有钠浓度升高(P<0 001),磷浓度无变化。阿托品能阻断乙酰胆碱对磷浓度的升高作用(P<0 05),但对钠浓度无影响。     

莪术油对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

研究莪术油影响人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的机制。采用台盼蓝拒染法检测不同剂量莪术油对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制率;光学显微镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA片段化情况;流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的改变、细胞凋亡率以及细胞周期分布。实验结果表明：作用48h时,最佳浓度为110μg／mL,IC50值为104．958μg／mL。DNA电泳可见有梯状条带出现,流式细胞术法显示有凋亡峰出现。莪术油可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

免疫基因和代谢基因 在胃癌患者预后分析中的比较研究

胃癌是1种预后效果较差且预后分析涉及许多因素的恶性肿瘤,其中免疫基因和代谢基因都与胃癌的预后密切相关.首先利用LASSO回归构建预后风险评分模型,经过一系列的图表对比研究后发现利用免疫基因能更好的分析胃癌患者的生存状况,有较高的准确性(AUC=0.799).另外,通过寻找ROC曲线中的最佳截断值(cutoff=-0.0...     

RhoE促进胃癌转移及其分子机制

摘要：目的 探讨RhoE对胃癌转移的影响及可能的机制。方法 Western Blot(WB)和免疫组织化学检测RhoE蛋白在胃癌组织中的表达;WB,半定量PCR检测RhoE 蛋白和mRNA在转移潜能不同的胃癌细胞系中的表达;利用RhoE的正义表达载体稳定转染胃癌细胞系SGC7901,通过迁移实验、侵袭实验检测其对胃癌细胞体外迁移、侵袭能力的影响。WB检测改变胃癌细胞中RhoE表达后基质金属蛋白酶（MMP）表达变化。结果 RhoE蛋白在胃癌组织和细胞系中的表达与胃癌转移相关联;上调RhoE表达能促进胃癌细胞的体外迁移能力和侵袭能力MMP9表达也随之上调。结论 本实验率先证实RhoE能够促进胃癌转移,这一作用可能是通过上调MMP9实现的。