猕猴桃蛋白酶在胍中“慢构象快活力变化”现象

比较了猕猴桃蛋白酶(Actinidin)在盐酸胍中变性时的荧光变化与活力变化的关系。当胍浓度为0.1 mol/l时,酶的最大荧光发射波长λ_(max)不变,荧光强度上升。此时酶被激活,活力提高25％,激活速度比变性速度快5.0倍。胍浓度逐渐增大,酶λ_(max)略红移,4.0 mol/l时达336 nm。但荧光强度降低,酶表现为快相和慢相失活的二个一级反应,失活速度常数比变性速度常数快 1～3个数量级。Actinidin 的激活与失活现象显示这可能与活性部位相关的 Trp 微环境的构象变化有关。胍变性结果指出 Actinidin 构象变化速度小于活力变化速度,这代表酶变性反应时慢构象变化快活力变化的一种模式。     

酶活性不可逆改变的底物保护动力学

根据邹氏的酶活性不可逆改变动力学理论,我们创建一种测定微观动力学参数方法判断底物对酶活力是否有保护作用,这对阐明酶的空间结构与功能、酶构象变化与活力变化的关系具有重要的科学意义,应用此法判断猕猴桃蛋白酶(Actinidin)在4mol/l盐酸胍和8mol/l脲的失活底物保护是否存在,实验结果表明:1)Actinidin在4mol/l盐酸胍失活过程受到底物一定程度的保护,2)Actindin在8mol/l脲失活过程底物对它完全保护.以上结果也提示了胍、脲作用机制不尽相同。     

文昌鱼碱性磷酸酶的脲变性作用的动力学研究

本文对文昌鱼碱性磷酸酶(ALPase)的脲变性作用进行研究,结果表明:浓度低于5M的脲对酶的失活是可逆的,而高浓度脲的失活作用是不可逆的,8M脲对酶的失活过程可以分为二个阶段,快速反应及慢速反应,其一级失活速度常数分别为0.242(min~(-1))和0.039(min~(-1)),酶在8M脲中的半寿期为8min.低浓度脲对酶活力的影响表现为混合型的抑制机理.在含6M脲的反应体系中,文昌鱼ALPase的表观失活速度常数为0.057(min~(-1))而牛肠ALPase的表观失活速度常数为0.747(min~(-1)),即前者对脲的作用较稳定.     

脲对果菠萝蛋白酶的变性与失活动力学

以脲为变性剂,以荧光光谱为监测手段,对果菠萝蛋白酶(Fruit bromelain)的分子构象变化进行研究,酶的荧光强度随脲浓度增大而递增,发射峰出现红移。荧光偏振在 230～240 nm及 260～290 nm 出现二个负峰,后者较为显著,并随脲浓度增大而加剧。脲对酶水解N-苄氧羰酰 L-赖氨酸对硝基酚酯(CBZ-Lys·pNP)活力的影响,表现为非竞争性抑制类型;比较脲对游离酶(E)及结合酶(ES)的失活速度常数。结果二者相等,底物不表现保护作用。测定酶在不同浓度脲中的变性速度常数和失活速度常数,比较了酶的构象变化及催化活力的关系,酶的失活速度常数比变性速度约大6～16倍。说明酶活性中心对脲的敏感性,酶活力的表现很大程度上依赖于酶构象的稳定性和完整性。     

文昌鱼酸性磷酸酶在变性剂变性时的构象及活力变化的研究

十二烷基硫酸锂(LDS),脲(Urea)等变性剂作用于ACPase,以荧光法跟踪该酶的构象变化,随着LDS浓度提高荧光强度下降但发射峰没有位移,而在Urea中,荧光强度随着变性剂浓度上升而下降,发射峰明星红移,由330～350nm,分别测定其变性及失活的动力学常数,比较酶构象及催化活力的关系,结果表明:变性与失活为快相和慢相的一级反应,在LDS作用下,失活速度大于变性速度,属于快活力慢构象变化的模式,Urea的作用为变性速度大于失活速度,属于快构象慢活力变化的另一种模式,Urea作用后的变性酶,在测定其活力的10min内,没有观察到底物对变性酶的修复作用,以及稀释对变性酶的复活效应。     

文昌鱼酸性磷酸酶在变性剂变性时的构象及活力变…

十二烷基硫酸锂（ＬＤＳ），脲（Ｕｒｅａ）等变性剂作用于ＡＣＰａｓｅ，以荧光法跟踪该酶的构象变化，随着ＬＤＳ浓度提高荧光强度下降但发射峰没有位移，而在Ｕｒｅａ中，荧光强度随着变性剂浓度上升而下降，发射峰明显红移，由３３０－３５０ｎｍ。分别测定其变性及失活的动力学常数，比较酶构象及催化活力的关系，结果表明：变性与失活为快相和慢相的一级反应，在ＬＤＳ作用下，失活速度大于变性速度，属于快活力慢构象变化的…     

缢蛏碱性磷酸酶胍变性中构象与活力变化的研究

缢蛏(Sinonovacula constricta)是一种海产重要经济贝类。本文报告从缢蛏中提取了分子量为420,000和130,000二种不同形式的碱性磷酸酶(简称APKⅠ和AKPⅡ),经不同浓度盐酸胍处理时酶的变性与失活的动力学过程。以荧光光谱为监测手段,测得AKPⅠ和AKPⅡ在0.5M、2.0、M、4.0M胍中的变性速度常数分别为0.0030秒~(-1)、0.0064秒~(-1)、0.0100秒~(-1)和0.0050秒~(-1)、0.0065秒~(-1)、0.0092秒~(-1);在0.5M胍中,AKPⅠ和AKPⅡ均保持100％的剩余活力;在2.0M胍中,AKPⅠ和AKPⅡ的失活均为快和慢二个一级的的过程,其失活速度常数分别为0.0025秒~(-1)(快)、0.00068秒~(-1)(慢)和0.0021秒~(-1)(快)、0.00041秒~(-1)(慢)。在4.0M胍中,AKPⅠ和AKPⅡ的活力完全丧失。本文中就这些结果进行了讨论。     

长毛对虾酸性磷酸酶不可逆失活过程中的底物保护研究

根据酶活性不可逆改变的动力学方法，研究了长毛对虾（Ｐｅｎａｅｕｓｐｅｎｉｃｉｌａｔｕｓ）酸性磷酸酶在变性剂胍，脲作用下的不可逆失活．结果表明，酶在不同变性剂中的失活行为不尽相同．测得该酶在１．２ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍，３ｍｏｌ／Ｌ脲中的ｋ０／ｋ０′分别为５．０和４．３．ｋ０＞ｋ０′的事实说明游离酶比酶底物复合物具有更大的失活速度常数，底物的结合对酶的失活有明显的保护作用．酶底物复合物较大的抗失活能力也从一侧面证实了活性中心的柔曲性理论．     

α-淀粉酶碳酸胍变性中CO_3~(2-)作用的光谱学证据

以α-淀粉酶盐酸胍变性作用为对照,利用紫外差光谱、荧光光谱和圆二色谱法研究了α-淀粉酶、脱钙α-淀粉酶和牛血清白蛋白碳酸胍及碳酸钠的变性作用。光谱数据所反映的酶分子构象变化和酶活性的变化表明,碳酸胍阴离子CO_3~(2-)与酶蛋白间存在着复杂的作用,可能是碳酸胍强变性作用的重要原因之一。     

十二烷基硫酸钠对猕猴桃蛋白酶的变性作用

应用光谱法观测酶的结构变化,紫外差光谱显示在233nm有一较明显的差吸收负峰,在286nm、300nm左右有不大的负峰和在265nm的正峰;荧光谱显示327nm的相对荧光强度随SDS浓度的增高而递减;发射峰位置红移,酶受SDS>4.1mmol/1作用1h,可引起310nm新荧光发射肩。动力学资料表明,SDS对酶的变性过程为一级反应;酶的失活分快慢相,呈现二个一级反应,同时测定在SDS作用下actinidin的变性与失活速度,表明酶的失活速度大于变性速度,似可认为低浓度SDS能使结构域相错开,从而敏感地改变活性部位的微区结构,导致酶快速失活,提高SDS浓度则使酶的结构域发生构象变化,引起光谱法所显示的特征。     

金属离子和脲对背角无齿蚌碱性磷酸酶的影响

研究了多种金属离子对背角无齿蚌碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性的影响，结果表明：Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋和Ｌｉ＾＋等一价金属离子没有影响：Ｍｇ＾２＋，Ｃａ＾２＋，Ｂａ＾２＋，Ｎｉ＾２＋，Ｍｎ＾２＋和Ｃｏ＾２＋有激活作用；而Ｃｕ＾２＋，Ｚｎ＾２＋，Ｈｇ＾２＋，Ｃｄ＾２＋及Ａｇ＾＋有抑制作用，脲对ＡＫＰ的变性失活作用，按脲浓度可为低于２ｍｏｌ／Ｌ和高于２ｍｏｌ／Ｌ两种类型，低浓度脲对背角无齿蚌ＡＫＰ活性抑制的动力学表     

在胍溶液中文昌鱼酸性磷酸酶活性部位的构象变化与活力变化的关系

盐酸胍中酸性磷酸酶活性部位构象变化与活力变化的关系，酶于０．６ｍｏｌ／ＬＧｕ－ＨＣｌ中，其相对活力提高２０％，当ＧＵ－ＨＣｌ浓度增加到１．２～２．４ｍｏｌ／Ｌ时，酶的相对活力，其活性部位紫外－可见光谱５００ｍｍ处吸收峰及荧光发射光谱５１５ｍｍ处的发射峰值下降，同时测定了酶的变性与失活常数，也研究了酶的重折叠与复性的关系     

h—SOD在脲、胍变性剂中的光谱学特征

研究了人血超氧化物歧化酶（h-SOD)在脲、胍及不同温度下变性的分子构象与活力之间的关系。酶的吸收光谱与酶活力的变化表明：当用不同的变性剂处理后,酶蛋白的空间结构发生了改变,紫外吸收表现出明显的增色效应;酶的荧光强度随脲浓度的增加有所增加随胍浓度的增加明显下降,在4mol/L胍变性条件下,h-SOD的发射峰自337nm红移到353nm,且酶活力明显下降。据此结果推测：酶活力的下降与构象的改变是同步发生的。     

Effect of Urea on Activity and Conformation of a Glycoprotein

Introduction In some enzymes, inactivation occurs before noticeable conformational change can be detected during denaturation by guanidinium chloride or urea[1-6]. Tsou[7] suggested that enzyme active sites are formed by relatively weak molecular interact…     

Inactivation of Lactate Dehydrogenase from Pig Heart by o—Phthalaldehyde

IntroductionLactate dehydrogenase( EC1 .1 .1 .2 7,LDH) playsa vital role in the energy flow of higher organisms.It is a tetrameric enzyme that catalyzes thereversible dehydrogenation of lactate,converting itto pyruvate.The enzyme exists in five isozymicforms which are not usually found all together inone tissue or organ.At least three different typesof LDH subunits( M,H and X) are known invertebrates,butthe X subunits are usually presentin only one or at mosta few tissues[1,2 ] .　Variou…     

Comparison of Inactivation and Unfolding of Calf Intestinal Alkaline Phosphatase in Guanidinium Chloride Solution

IntroductionCalf intestinal alkaline phosphatase(CIP,EC3 .1 .3 .1 ) is a metalloenzyme which catalyzes thenonspecific hydrolysis of phosphate monoesters[1 ] .The X-ray crystal structure of bacterial alkalinephosphatase has been reported to0 .2 nm resolutionin the presence of inorganic phosphate[2 ] . Theactive site is a pocket containing a tight cluster oftwo zinc ions (0 .3 9nm separation) and onemagnesium ion (0 . 5 and 0 .7nm from two zincions) .CIP also contains zinc and magnesium ions…     

果菠萝蛋白酶在有机溶剂中的变性与失活动力学的研究

测得果菠萝蛋白酶是由单亚基组成,分子量约为30k,pl为4.6,每个酶分子含一个游离疏基和二个硫硫键,甲醇、乙醇、乙二醇对酶活力有明显的抑制作用,甲醇、乙醇表现为非竞争性,乙二醇为竞争性,其抑制常数分别为:20％、16.5％和11％。在有机溶剂作用下,监测荧光(332nm)强度随时间的变化过程,作为变性的指标,测定酶在不同浓度有机溶剂中的变性动力学,并按邹氏法测定酶的失活动力学,对酶构象及催化活力关系进行比较,酶的失活速度大于变性速度,说明酶活性中心处于对有机溶剂较敏感的区域,酶的变性与失活过程均可分为快、慢两相的一级反应,这意味着可能存在着部分活力的中间态。     

荧光法检测根际土壤胞外酶活性的优化

为准确测定土壤胞外酶活性,对β-葡萄糖苷酶(βG)、纤维二糖水解酶(CBH)、β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(NAG)和亮氨酸氨基肽酶(LAP)、碱性磷酸酶(AKP)5种有关C、N、P循环的关键酶的荧光法测定进行了优化.结果发现,使用Cytation5等高灵敏度的酶标仪测定时水土比值应高于300∶1(mL∶g).5种胞外酶活性的最佳测定参数为:AKP、βG用超纯水作缓冲溶液,XH-C漩涡混匀器(60 W)混匀土壤5 min,25 ℃培养4 h;CBH用乙酸钠(0.2 mol/L,pH 5.8)作缓冲溶液,XH-C漩涡混匀器(60 W)混匀土壤5 min,25 ℃培养2 h;NAG用乙酸钠(0.2 mol/L,pH 5.8)作缓冲溶液,摇床(150 r/min)混匀60 min,25 ℃培养3 h;LAP用超纯水作缓冲溶液,摇床(150 r/min)混匀60 min,25 ℃培养1 h.本研究结论可为提高荧光法准确测定土壤胞外酶活性提供依据.     

Cause of Irreversible Inactivation of Aminoacylase in Urea Solution

ＩｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎＡｍｉｎｏａｃｙｌａｓｅ (Ｎ ａｃｙｌａｍｉｎｏａｃｉｄａｍｉｄｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ .ＥＣ 3.5.1.14 ) ,ｗｈｉｃｈｅｘｉｓｔｓｉｎｍａｍｍａｌｉａｎｋｉｄｎｅｙｓａｎｄｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ,ｃａｔａｌｙｚｅｓｔｈｅｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓｏｆＬ ａｃｙｌａｍｉｎｏａｃｉｄｓ[1] .Ｔｈｅｅｎｚｙｍｅｉｓｄｉｍｅｒｉｃｗｉｔｈａｒｅｌａｔｉｖｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗａｓｓｏｆ86 0 0 0 ,ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｏｎｅＺｎ2 ｉｏｎｐｅｒｓｕｂｕｎｉｔｗｈｉｃｈｉｓ…