滴滴涕对睾丸支持细胞的影响

有机氯农药滴滴涕(DDT)作为一种有机氯农药,被广泛应用于农业中.DDT是经雌激素受体(ER)介导的环境雌激素,对内分泌系统具有潜在的干扰性,在机体内表现出类雌激素样作用,可与雄激素受体竞争性结合,抑制雄激素的活性,干扰雄性生物体内正常内分泌物质的合成、释放、代谢和结合等过程,从而破坏其维持机体稳定和调控的作用,可能与男性精子数量减少、精子活力下降、男性不育症患者增加、睾丸癌和前列腺癌发病率增高等发生率的增加有关.因此,体内残留的DDT对人体健康的危害,特别是对生殖系统的危害日益受到人们的广泛关注.在近年来关于DDT研究问题讨论的基础上,对DDT的内分泌干扰作用、毒性及其毒理机制进行了综合评述.     

GDNF对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响

探讨胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived fieurotrphie facmr,GDNF)对小鼠睾丸支持细胞(sertoli cell)增殖的影响.对5～10 d的昆明小鼠睾丸Sertoli细胞进行分离培养,利用MTT法检测不同质量浓度GDNF(5,10,20,50μg/L)对Sertoli细胞增殖的影响,流式细胞仪测定DNA含量、分析细胞生长周期的变化.结果表明:5,10μg/LGDNF对Sertoli细胞的增殖有促进作用(p<0.05),20μg/LGDNF对Sertoli细胞增殖有明显促进作用(p<0.01);流式细胞仪检测表明GDNF促进了Sertoli细胞由Go期进入S期和G2期,细胞增殖指数(P1)增加,S期细胞指数(SPF)增加.说明GDNF对体外培养的Sertoli细胞具有促进增殖的作用.     

人参皂甙Rb1和Rg1对小鼠睾丸支持细胞增殖的影响

观察人参皂甙Rb1(ginsenodde Rb1,GRb1)和Rg1(ginsenoside Rg1,GRg1)对体外培养的小鼠睾丸支持细胞(sertoli cell)增殖的影响,探讨二者的药理作用机制.取原代培养传代一次第3天的支持细胞,加入不同浓度的GRb1和GRg1,利用MTT比色分析法和BrdU增殖细胞标记法,检测不同浓度GRb1和GRg1对体外培养支持细胞增殖的影响.结果显示,20 mg/L GRb1对支持细胞增殖有明显促进作用,而不同浓度的GRg1对支持细胞的增殖无明显影响.GRb1能维持小鼠支持细胞的存活,并在适当浓度范围内可以明显促进支持细胞的增殖,而GRg1对支持细胞的增殖无明显影响.     

基于ChIP-seq筛选睾丸支持细胞中雄激素受体靶基因初步研究

雄激素及其受体在精子发生中有重要作用.寻找并鉴定更多雄激素及其受体的靶基因,对阐明雄激素及其受体介导精子发生的分子机制,解析其调控精子发生的网络具有非常重要的科学意义.在本研究中,我们分离了睾丸支持细胞,以睾酮刺激,并以ARKO小鼠睾丸作为背景对照,进行ChIP-seq和分析验证.数据分析显示了8679个差异表达基因,其中4830个基因在睾酮处理组表达上调,3849个表达下调.我们从差异基因中筛取了43个靶基因进行验证,其中39个基因的启动子区域找到了ARE结合位点.候选靶基因介导雄激素调控精子发生的分子机制仍有待进一步研究.本项目初步鉴定的靶基因可为进一步深入系统研究雄激素及其受体调控精子发生的机制提供参考.     

松花粉对小鼠睾丸染色体的影响

用赤松粉对小白鼠精母细胞的染色体进行了致畸变的测试,表明赤松花粉在ＬＤ〉１３０００ｍｇ／ｋｇ的情况下无致染色体畸变作用。     

睾丸支持细胞功能的研究进展*

摘要: 支持细胞位于睾丸曲细精管内皮,作为与生精细胞接触的惟一体细胞,在生精过程中起着至关重要的调控作 用。支持细胞在精子发生过程中可为精子细胞提供结构支持; 他分泌的各种蛋白质参与精子发生所需物质的转 运; 同时支持细胞表达一些膜蛋白,促进局部免疫豁免形成,为精子发生提供有利的微环境; 再者,支持细胞通过发 挥粘附与吞噬作用,清除精子发生中凋亡的精子细胞。随着研究的深入,近年来对支持细胞又有了新的认识。     

禁食对小鼠下丘脑磷酸化蛋白质组的影响

本研究旨在通过干预小鼠进食,探讨对小鼠下丘脑中蛋白质磷酸化修饰和相关信号通路的影响,为完善蛋白磷酸化调控网络提供有价值的信息.将实验小鼠平均分为3组,分别为对照组(con)、禁食组(D2)和禁食后恢复组(DR),每组小鼠数量为3只.在48 h内,con组正常提供饲料,D2组不提供饲料,DR组前44 h不提供饲料、后4 h提供饲料.同时解剖3组小鼠并提取下丘脑组织,提取、纯化和酶解下丘脑组织的蛋白质,并采用二氧化钛富集分离技术富集磷酸化肽段,运用高通量液相色谱-质谱联用进行检测,以鉴定样品中的磷酸化蛋白质组.利用非标记定量方法筛选差异表达的磷酸化蛋白以及位点,对鉴定数据进行GO富集和KEGG通路分析,并探究磷酸化蛋白间的相互作用关系.结果显示,共鉴定到4 810个磷酸化蛋白质,对应于14 259个磷酸化位点发生了变化.采用数学统计方法分析,成功确认小鼠下丘脑中有681个磷酸化蛋白差异显著,观察到这些差异蛋白与蛋白结合、激酶行为、转运、轴突生成等分子活动和生物学过程有关,并富集到了MAPK、细胞内噬和环磷酸腺苷信号通路等11个主要的信号通路.这说明禁食会对小鼠下丘脑中多种蛋白质的磷酸化修饰...     

双酚A对小鼠睾丸细胞DNA损伤的研究

目的探讨双酚A的生殖遗传毒性.方法应用单细胞凝胶电泳试验(SCGE)研究了双酚A对离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤作用.结果除10-10mol/L组与对照组比较无显著性差别外,各染毒组拖尾率均明显高于对照组(P<0.05).随着双酚A染毒浓度的增加,小鼠睾丸细胞DNA损伤程度也逐渐增加(P<0.05),在10-5mol/L和10-6mol/L组均出现了Ⅳ级损伤.结论在一定浓度下,双酚A可引起离体小鼠睾丸细胞的DNA损伤,可能对雄性小鼠具有一定的生殖毒性.     

TDI对小鼠睾丸组织能量代谢的影响

研究甲苯二异氰酸酯(TDI)对雄性小鼠生殖细胞能量代谢的影响,探讨甲苯二异氰酸酯对雄性小鼠生殖损伤的机制.用分光光度法检测睾丸组织匀浆中琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)和ATPase的活性.TDI染毒两周后SDH、LDH及ATPase的活性均受到了抑制.在本实验染毒时间和染毒剂量范围内,TDI不仅干扰睾丸组织的有氧代谢及无氧代谢的供能过程,还干扰细胞对能量的利用.提示能量代谢障碍可能是TDI对雄性生殖细胞毒作用的机理之一.     

过氧化氢诱导前列腺癌PC3细胞HSP60表达和Akt蛋白磷酸化的研究

以不同浓度H_2O_2刺激PC3细胞24h,应用MTT法分析细胞活力变化,并采用蛋白印迹方法检测HSP60蛋白、Akt蛋白(总Akt蛋白)和磷酸化Akt蛋白的表达水平.结果表明,15.625μmol/L的H2O2可诱导PC3细胞内HSP60表达显著升高(p0.05),7.312μmol/L和15.625μmol/L的H_2O_2均会导致磷酸化Akt蛋白的量显著下降(p0.01),但该两种浓度的刺激对细胞内总Akt蛋白量并无显著影响(p0.05).     

切除睾丸对昆明小鼠免疫功能的影响

免疫功能障碍假说认为雄性动物表达第二性征的代价是免疫功能受到抑制,为了检验该假说,实验以雄性昆明小鼠为研究对象,通过切除睾丸,来研究其免疫功能是否会发生变化.将18只小鼠随机分为睾丸假切除组(n=9)和睾丸切除组(n=9).发现睾丸切除不影响小鼠的体重和身体成分例如胴体鲜重、皮下脂肪、肠系膜脂肪、腹膜后脂肪、性周脂肪和脂肪总重.然而,切除睾丸显著增加了小鼠脾脏和胸腺、白细胞总数,从统计学上切除睾丸虽然对天然免疫没有显著性影响,但睾丸切除组的天然免疫比假切除组增加了232.2%,这些结果支持免疫功能障碍假说.另外,切除睾丸抑制了注射PHA后12h、24h、72h的PHA反应,该结果不支持免疫功能障碍假说.脂肪总重与胸腺、脾脏、白细胞总数和PHA反应均不存在相关性,表明脂肪不是这些免疫指标变化的原因.总之,昆明小鼠不同的免疫成分对切除睾丸的反应存在差异,其免疫功能变化的原因还需后续补充睾酮实验进行深入研究.     

实验性甲肿小鼠睾丸肥大细胞对生殖的影响

研究了甲肿过程中小鼠睾丸肥大细胞（MC）的数量、分布及组织化学性质的改变.结果表明,随甲肿时间的延长,小鼠睾丸曲细精管管径较对照组显著增大（P〈0.05）,管壁厚度也较对照组显著增加（P〈0.05）;睾丸肥大细胞的数量逐渐增多,且均显著高于对照组（P〈0.01）,并有明显的脱颗粒现象.睾丸肥大细胞主要分布在睾丸被膜下、曲细精管基膜周围、睾丸间质小血管周围、间质内、附睾管周围及管壁上皮细胞之间,其红染、红蓝混染颗粒逐渐减少,蓝染颗粒逐渐增多,且临界电解质浓度（CEC）值逐渐减小.结果提示,甲肿过程中小鼠睾丸和附睾肥大细胞增多可直接或间接影响雄性生殖.     

铅对小鼠睾丸生精细胞凋亡及Caspase-3,Bcl-2和Bax基因表达的影响

为了研究铅致小鼠睾丸生精细胞凋亡及其对Caspase-3,Bax和Bcl -2基因表达的影响.25只雄性小鼠随机分成5组:0h对照组、12h染铅组、24h染铅组、36h染铅组和48h染铅组,每组5只,实验组按照100mg/kg的剂量腹腔注射醋酸铅溶液,5组小鼠分别于0h、12h、24h、36h、48h后脊柱拉断处死,取其睾丸组织,用苏木精-伊红染色及免疫组化技术检测睾丸组织细胞凋亡及凋亡相关蛋白Caspase -3,Bcl -2和Bax的表达.结果显示:细胞凋亡相关基因Caspase -3,Bcl -2和Bax的表达较对照组差异显著,Caspase -3和Bax在染铅毒后表达量一直上升,Bcl -2的表达量一直下降,差异性随染铅时间的不同而有变化.铅负荷至一定程度时可致小鼠睾丸细胞凋亡,且呈一定量效关系(P＜0.01),这种作用可能与Bcl -2基因低表达和Caspase-3与Bax基因高表达有关.     

气相色谱/质谱法检测壬基酚在大鼠睾丸支持细胞中的分布

壬基酚(NP)是一种环境内分泌干扰物,具有类雌激素作用,它的高稳定性和脂溶性的特点使其能够在有机体,特别是脂肪组织内聚集,对人类的生殖系统产生毒害作用,因其分子结构与细胞膜的磷脂分子很相似,故与磷脂分子有很高的亲和力.为了探讨NP对生殖细胞的毒理机制,了解其在细胞内的分布情况,建立大鼠睾丸支持细胞NP含量的高效气相色谱及质谱(即GC/MS)检测方法,观察NP在细胞中的分布.实验采用原代培养的大鼠睾丸支持细胞,通过带有CY3标记的抗体对其质膜上特异表达的卵泡刺激素受体(FSHR)进行免疫荧光染色,鉴定支持细胞.然后用10μmol/L和20μmol/L的NP分别作用细胞3 h6、h1、2 h2、4 h后,超声破碎,并对10μmol/L NP处理的样品用改进的三步离心法进行细胞质膜分离,GC/MS方法检测NP在细胞中的总含量,以及细胞膜中NP含量占细胞中的总含量的比例.结果显示培养的细胞均呈现绿色荧光,都表达FSHR.两步离心的质膜分离方法,膜纯度为33.22%,改进的三步离心法膜纯度为78.60%.另外,分别在10μmol/L和20μmol/L NP浓度下,随着作用时间的延长,NP在细胞中的总含量逐渐增加至12 h,在24 h时突然下降至3 h的水平.细胞膜中NP含量占细胞中的总含量的比例,随着作用时间的延长而降低.由此得出结论是:FSHR可以作为大鼠睾丸支持细胞的鉴定指标;三步离心的质膜分离方法得到的膜纯度远远高于两步离心法;虽然NP与磷脂分子有很高的亲和力,但随着作用时间的延长,NP并没有停留在细胞膜里,而是能够穿过细胞膜进入到细胞内,并主要分布在细胞内.     

小鼠睾丸发育全过程中生精细胞的自发性凋亡

 以17组出生后不同发育阶段的昆明种正常小鼠睾丸组织为材料,采用TDT原位末端标记法在其石蜡组织切片上进行凋亡细胞原位检测,探讨小鼠睾丸发育全过程中生精细胞的自发性凋亡规律.结果发现:小鼠生精细胞从生后开始就存在自发性凋亡现象,生后1~15 d,凋亡精原细胞数目不断增加;至生后第15天时达到峰值,且15 d起个别初级精母细胞也开始出现凋亡;至27 d时,极少数次级精母细胞和精子细胞出现凋亡;至30 d时凋亡细胞基本为精原细胞;而33 d时各类型生精细胞均存在凋亡现象;至36 d时凋亡细胞又重新集中于精原细胞,并延续于此后各期.上述结果表明:小鼠睾丸发育过程中凋亡细胞主要为精原细胞;自发性凋亡活跃期发生于生后1~33 d,与生精细胞的首次发育成熟过程同步.     

免疫胶体金对小鼠巨噬细胞和NK细胞活性的影响

实验设计了4种直径和3种剂量12个组合的胶体金对小白鼠进行注射处理：采用MTT法和LDH短程释放法．测定了腹腔巨嗜细胞活性和脾脏NK细胞活性．结果表明：不同直径和剂量的CG对机体有不同程度的影响。其中直径15nm．10nmCG的0．3mL和0．2mL剂量组可显著提高腹腔巨噬细胞活性及脾脏NK细胞杀伤活性,0．1mL剂量组虽有提高但不显著;直径5nm．20nm各个剂量组效果的波动较大,中、高剂量组对四项指标起促进作用但不显著．低剂量组则没有促进作用。证明了15nm和10nm中高剂量的胶体金可显著提高小鼠巨噬细胞功能和脾脏NK细胞活性。     

刺五加对小鼠睾丸作用的初步研究

昆明种健康成年雄性小鼠20只，随机分为两组：给药组和对照组。分别采取腹腔注射刺五加注射液和等量生理盐水30天。取睾丸做常规石蜡切片，组织学观察；并用体视学方法测量睾丸曲细精管直径。结果显示：刺五加使睾丸重量增加了21.7%，曲细精管直径增加了20.5%，并且光镜下生精细胞的层数及精子的数量有所增加。推测刺五加可能有促进精子发生的作用。     

蘑芋精粉对小鼠免疫器官和细胞因子水平的影响

ＡＫＰ（ＡｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｕｓｋｏｎｊａｃＫＫｏｈｎＰｏｗｄｅｒ）具有明显促进小鼠免疫功能的作用,对胸腺指数和脾指数具有增高作用．将小鼠ＭΦ用ＬＰＳ（１０μｇ／ｍＬ）孵育１８～２４ｈ后,培养上清ＩＬ１和ＴＮＦα水平均随ＡＫＰ浓度的增加而增加,表明ＬＢＰ２对ＭΦ合成和释放ＩＬ１、ＴＮＦα具明显促进作用．此外,ＡＫＰ对小鼠血清中ＴＮＦα水平也有一定的促进作用．     

视网膜母细胞瘤基因产物磷酸化水平与细胞生长状态的关系

随着无血清培养细胞时间的延长，红胞合成Ｒｂ蛋白量和磷酸化水平逐渐降低，当细胞生长停止时，Ｒｂ蛋白处于低磷外化状态．正丁酸钠可诱导ＨＬ６０终端分化为单核－巨噬细胞；视黄酸、二甲基亚砜使ＨＬ６０分化为粒细胞．尽管分化途径不同．但是终端分化的细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．结果表明当细胞处于生长停滞状态，细胞都只能合成低磷酸化的Ｒｂ蛋白．