产碱杆菌DN25降氰酶产酶条件初步优化

以实验室保藏的一株具有高效降氰活性的菌株Alcaligenes sp. DN25为研究对象,通过分析其降解产物,发现终产物中存在甲酸,初步判断此菌株降氰反应为氰水解途径。在培养基中添加KCN来考察底物对菌体产酶的诱导作用,结果发现菌体的活力没有提高,表明菌株DN25所产降氰酶应为组成型酶。在培养基中添加4种金属离子和4种含硫物质,其中微量金属离子对菌体的生长和活性均有抑制;Na2SO4和Na2S2O3对菌体生长和产酶均无明显影响;DL-半胱氨酸对菌体产酶有明显促进作用,DL-甲硫氨酸可同时提高菌体的生长量和产酶水平,从而提高发酵液比活力。研究结果为降氰酶的大量获得以及酶制剂在氰污染治理方面的应用研究奠定了基础。     

固定化E.coliBL21（pTc—gsh）细胞催化合成谷胱甘肽

分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋E.coliBL21（pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽（GSH）。从酶活收率及机械强度方面进行比较，选择卡拉胶为包埋载体，其最适PH为7.0，最适温度为40℃。相关物质对GSH的合成均有影响：半胱氨酸、甘氨酸的最达浓度为20mmol/L，谷氨酸的最适浓度为60mmol/L；Mg^2 /ATP为1-5（V/V）较合适；腺苷二磷酸（ADP）浓度为5mmol/L时对酶活的抑制为20%。优化条件下罐式反应器中GSH的产量为0.84g/L，操作稳定性较好；延迟加入甘氨酸时GSH产量可提高17.5%；与酵母生产ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应，GSH合成量达1.24g/L，收率比直接加入ATP提高24.2%。     

乳酸脱氢酶在CTAB-戊醇反胶束体系中的催化动力学研究

以十六烷基三甲基溴化铵（CATB）-异辛烷-戊醇反胶束体系对乳酸脱氢酶（LDH）了固定化,探讨了体系含水量W0（W0=n（水）/n（CTAB）、CTAB浓度、戊醇体积比对LDH固定化的影响及游离酶和固定酶的催化动力学性质.结果表明：LDH进入反胶束的最佳条件是：体系含水量为4.3,CTAB浓度为0.24 mol/L,戊醇体积比为25%.对游离酶和固定化酶的酶促反应的最适pH值均为8.8,最适反应温度分别为52℃和30℃,米氏常数Km分别为65mmol/L和48mmol/L.在25℃时,游离酶存放2 h后失活35%,而固定化酶仅失活16%,说明反胶束固定化LDH具有良好的活力稳定性.     

芽孢杆菌超氧化物歧化酶的热和pH稳定性研究

研究了从蜡质芽孢杆菌（Bacilluscereus）中提取的Fe－SOD纯酶的热和pH稳定性。结果表明,在25℃、35℃下保温20～95min酶活略出现增高,45℃保温50min和80min,其酶活分别为原酶的81．0％和70．0％;pH为6～10时酶活稳定,还讨论了该酶与其他微生物来源的Fe－SOD在这两种生化特性方面比较所表现出来的优势,显示了该酶的稳定性在生产和应用过程中将具有重要价值。     

固定化E.coli BL21(pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽

分别以卡拉胶、明胶、海藻酸钠包埋E.coli BL21 (pTrc-gsh)细胞催化合成谷胱甘肽(GSH).从酶活收率及机械强度方面进行比较,选择卡拉胶为包埋载体,其最适pH为7.0,最适温度为40°C.相关物质对GSH的合成均有影响半胱氨酸、甘氨酸的最适浓度为20mmol/L,谷氨酸的最适浓度为60mmol/L;Mg2+/ATP为1～5(V/V)较合适;腺苷二磷酸(ADP)浓度为5mmol/L时对酶活的抑制为20%.优化条件下罐式反应器中GSH的产量为0.84g/L,操作稳定性较好;延迟加入甘氨酸时GSH产量可提高17.5%;与酵母生产ATP体系相耦联的共固定化体系在填充床中反应,GSH合成量达1.24g/L,收率比直接加入ATP提高24.2%.     

固定化酶催化合成头孢克洛与产物的分离纯化

应用来源于粪产碱杆菌的青霉素G酰化酶催化合成头孢克洛,并对生物转化反应过程进行了研究.在反应条件:pH 7.0、25℃、磷酸钠缓冲体系、加酶量3 U/mL和底物浓度60 mmol/L时,转化率达到85%,表明粪产碱杆菌青霉素G酰化酶具有较高的催化活力.研究了新型分离纯化方法,经过树脂分离的产物纯度超过95%,主要杂质含量小于0.5%,可以达到药典要求,为生物法合成头孢抗生素走向产业化奠定了基础.     

高压静电场对过氧化氢酶的激活作用研究

研究了高压静电场对过氧化氢酶的作用规律,结果表明:当电场强度(E)低于10×105V/m时,过氧化氢酶活力不受影响;E在2×105～3×105V/m时,过氧化氢酶不同程度的被激活,活力最高可提高32%;高于4×105V/m,过氧化氢酶活力下降10%.2×105V/m时,与3×105V/m相比较,需要更长的时间.激活的过氧化氢酶不发生驰豫现象,活力不会下降,表明电场使过氧化氢酶达到了一个新的活力更高的稳定态.     

H-蛋白中Asp-68和Tyr-70定向突变对甘氨酸裂解酶系整体酶活的调控

还原甘氨酸途径被认为是最有前景的C1（one carbon）合成途径,其核心酶系是甘氨酸裂解酶系。在前期研究中,我们在甘氨酸裂解酶系H-蛋白“解开自保护”过程的研究中初步锁定了H-蛋白空腔内的潜在关键氨基酸残基为Ser-67、Asp-68和Tyr-70,并且证明Ser-67位点对甘氨酸酶系的整体酶活有重要影响。本文对H-蛋白的Asp-68和Tyr-70位点进行了侧链带正电突变（H-D68K、H-D68H、H-D68R和H-Y70K、H-Y70H、H-Y70R突变体）,以及侧链非极性突变（H-D68G、H-D68V、H-D68M、H-D68L和H-Y70G、H-Y70V、H-Y70M、H-Y70L突变体）,并测定了各突变体在甘氨酸裂解方向上的酶活。结果发现,Asp-68位带正电突变倾向降低甘氨酸酶系的整体酶活,Asp-68位非极性突变、Tyr-70位带正电突变及非极性突变在总体上倾向于维持或提升整体酶活。其中,相对野生型H-蛋白,H-D68R突变体的酶活下降了90.2%,H-Y70R、H-D68G和H-Y70L突变体的酶活分别提高了75.6%、53.6%和146%。硫辛酰胺与H-蛋白空腔内的氨基酸相互作用的分析结果表明,甘氨酸裂解酶系整体酶活的变化是由于H-蛋白的68和70位残基的突变阻碍或促进硫辛酰胺的释放。     

固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的制备

粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶通过共价结合在环氧型载体EupergitC上,通过对酶质量浓度、固定化反应时间、pH 值以及反应温度等条件的考察,确定了最优固定化条件：375mg比活力5000U/g的重组粪产碱杆菌青霉素G酰化酶蛋白对应1g载体,最适pH8.0,反应温度30 ℃.反应120h后制得固定化青霉素G酰化酶活力达到220U/g,固定化酶效率为10.7%.该固定化酶可在含饱和乙酸丁酯磷酸缓冲液中彻底水解青霉素G钾盐.经过15批连续水解反应,固定化酶仍保持95%的活力,展现出良好的稳定性.     

高效褐藻胶降解菌的筛选与产酶条件优化

以海藻酸钠为唯一碳源,从天然腐烂海带中筛选得到一株高效褐藻胶降解菌株53#,经形态学观察和16S r RNA鉴定,确定为类芽孢杆菌Paenibacillus agaridevorans。采用正交试验方法,以p H、温度、Na Cl浓度和海藻酸钠初始浓度为影响因素,对该菌株的产酶条件进行优化,得到53#菌的最佳产酶条件:p H=8,25℃,Na Cl浓度15 g/L,海藻酸钠初始浓度15 g/L。在最佳产酶条件下,褐藻胶裂解酶最大酶活可达390.53±17.32U/m L。筛选得到的类芽孢杆菌Paenibacillus agaridevorans 53#具有易于培养、产酶速度快和酶活力高等优点,能够实现褐藻胶的高效糖化,在褐藻生产生物乙醇领域具有潜在利用价值。     

Study on screening and cultivation conditions of xylanase-producing alkalophilic bacterial

Xylanisthemajorcomponentofplantcellwallsandthemostabundantpentosaninnature.Xylancontainsβ 1,4 linkedd xylosebackboneswitharabinose,4 O methyl d glucuronicacid,andaceticacidsubstituents[1 ] .Thexylan degradingen zymesincludeendoxylanase(1,4 β d xylanxylanohydrolase;EC3.2 .1.8)and β xylosidase (1,4 β d xylanxylanohydrolase;EC 3.2 .1.37) .xylanasedegradesthexylanbackboneintoxylo bioseandxylooligosaccharides,whileβ xylosidasereleasesxylosylresiduesfromthenonreducingendsofxylooligosaccha…     

响应面法优化醋酸钙不动杆菌菌株23的脂肪酶产酶条件

采用响应面法对醋酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)菌株23的发酵产脂肪酶培养基进行优化实验。实验首先考察该菌株产酶所需的最适碳源和氮源,然后用Plackett-Burman法设计实验确定影响产酶的主要影响因素,用最陡爬坡实验逼近最大响应区域,最后通过Box-Behnken方法进行二次回归分析得到最佳的产酶条件为:营养肉汤18.4%、蛋白胨9.18%、吐温800.52%、K2HPO40.2%,橄榄油1%,MgSO40.05%,CaCl20.05%,FeSO40.1%。在该优化条件下,发酵液的脂肪酶活力可以达到15.2U/ml,比优化前提高3倍。     

Preparation of Fe3O4@Au nano-composites by self-assembly technique for immobilization of glucose oxidase

Superparamagnetism amination nanocrystals Fe₃O₄ with 3-aminopropyltriethyloxy silane (APTES) were prepared by modified co-precipitation method. Next, 4-5 nm gold nanoparticles, prepared by classical Frens procedure, were coated on the surface of the amination Fe₃O₄ by self-assembly technology. The prepared Fe₃O₄@Au nanocomposite particles were investigated by transmission electron microscopy (TEM), UV-vis, infrared spectrum (FT-IR), and vibrating sample magnetometer (VSM) in order to elucidate the morphology, optics and magnetic properties of the nanocomposites. Their uniform distribution of particle size, which is about 15 nm, and good magnetic responsiveness were observed. In view of the fact that Fe₃O₄ owns superparamagnetism and that nano-gold can readily combine with biological molecules, glucose oxidase (GO _x ) was chosen as a model to penetrate the condition of immobilizing enzyme, and enzymatic properties of resultant immobilized enzyme were studied as well. By systematic optimization, we established that at 28°C, and pH (5.5) and when mole ratio of Fe₃O₄:HAuCl₄ was 0.5:1, the immobilization provided the best results. Finally, we are glad to find that the immobilized enzyme exhibits excellent thermostability in addition to its better stability than free enzyme. Thus, herein described immobilized enzyme could be used repeatedly with the assistance of an external magnetic field. Supported by the Science Foundation of Sichuan Province, China (Grant No. 2005A033) and Science Foundation of Sichuan Agricultural University for Distinguished Young Teachers (Grant No. 007202)     

红芪加工废弃物活性多糖对果蝇生育力和寿命及抗氧化能力的影响

研究红芪废弃物中提取的生物活性多糖对黑腹果蝇的生殖能力、寿命和抗氧化能力的影响.通过不同浓度的红芪多糖对黑腹果蝇的存活试验,研究了一代至四代(F1-F4)的生殖能力和寿命、雌雄个体数、抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)含量的变化.结果表明,与对照组相比,添加多糖可提高F1-F...     

丙酮/(NH4)2SO4双水相体系提取芦丁影响因素研究

【目的】研究丙酮/(NH4)2SO4双水相萃取体系对分离槐米中芦丁的影响因素。【方法】利用正交设计法进行优化,并把28.57%的硫酸铵溶液与等体积的70%的丙酮混合溶液,调至pH=9形成的双水相,两相的体积比(V上/V下)是1.62。【结果】萃取体系的上相中芦丁含量达到95.92%。【结论】丙酮/(NH4)2SO4双水相萃取体系分离芦丁具有良好的选择性。     

小球藻(Chlorella vulgaris)抗铵品系的紫外诱变选育

【目的】获得耐受高铵浓度的优良养殖小球藻(Chlorella vulgaris)品系,可以有效防止其在养殖过程中被轮虫,纤毛虫等污染生物吞食。【方法】首先对小球藻进行紫外线诱变,然后用高浓度NH_4HCO_3作为筛选压力对其进行筛选。【结果】筛选到具有生长优势的小球藻突变株B4和C6,培养12d,在NH_4HCO_3浓度为800mg/L、1 000mg/L、1 200mg/L条件下,B4和C6的生物量比出发藻株分别提高41.18%和9.54%,32.64%和29.41%,37.74%和22.85%;对比出发藻株,B4和C6的最大光能转化效率有显著提高。【结论】突变株B4和C6在高铵培养条件下更能显示生长优势,且它们的生长优势可能来自光合效率的提高。     

乙醇/硫酸铵双水相体系分离纯化款冬花总黄酮

以低温烘干的款冬花为原料,利用乙醇/硫酸铵双水相体系分离纯化款冬花总黄酮。首先对无水乙醇、(NH_4)_2SO_4、黄酮粗提取液、NaCl质量分数和pH值进行单因素研究,然后利用Box-Benhnken Design实验对(NH_4)_2SO_4质量分数、无水乙醇质量分数、黄酮粗提取液质量分数、pH值进行了优化;结果表明:(NH_4)_2SO_4质量分数为15.5%、无水乙醇质量分数为32.2%、黄酮粗提取液质量分数为20.4%、pH=4.1时款冬花总黄酮萃取率可达99.21%,与预测的99.44%非常接近。     

Myoglobin as Mimetic Enzyme and Its Analytical Application in Determination of H2O2

0 IntroductionSltougdiiceasl csoynstceermnsin gharveeac btieveen o txhyeg ei nm psopretcaienst ( oRbjOecSt) iinn bbiioo--medicine and analytical chemistry in recent years[1-4]. Manyi mportant life phenomena and diseases are relatedtotheinter-mediates of ROS[5-7].ROS have beeni mplicated as ani mpor-tant causative factor in cell damage,including apoptosis andnecrosis . Their proposed actions comprise lipid peroxidation,DNAdamage,the mitochondrial respiratory chain destructionand protein mo…     

拟穴青蟹形态性状与性腺重量的相关分析

选取16月龄池塘养殖雌性拟穴青蟹(Scylla paramamosain)67只,测量其头胸甲长(X1)、头胸甲宽(X2)、腹部宽(X3)、体重(X4)和性腺重(Y),利用相关分析和通径分析方法计算形态性状对性腺重的相关系数、通径系数和决定系数,明确影响拟穴青蟹性腺重的主要形态性状,为拟穴青蟹选育提供理论依据和技术支持.结果表明,形态性状与性腺重相关性极显著(P＜0.01),其中体重对性腺重的直接影响和决定程度最大(0.736,54.2％),腹部宽次之,头胸甲长最小.通过头胸甲长、腹部宽和体重估计性腺重的多元回归方程为:Y=14.467-1.556X1+1.626X3+0.245X4 (R2=0.499).     

浒苔虾丸配方的优化

【目的】将营养价值高的浒苔(Ulva prolifera)添加到虾丸中制成浒苔虾丸,丰富虾丸品种,提高其营养价值。【方法】通过单因素和正交试验,确定浒苔虾丸的最佳配方。【结果】浒苔虾丸的最佳配方为鱼糜虾糜比6∶4,浒苔粉6%,淀粉10%,蛋清蛋白6%,大豆分离蛋白3%,氯化钙0.3%。【结论】所得的浒苔虾丸产品色泽诱人、弹性良好、风味独特、营养丰富,是一种老少咸宜的方便食品。