利用转座子Tn917构建杀虫Bt工程菌

利用链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）的转座子Ｔｎ９１７衍生载体ｐＴＶ１Ｔｓ将苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ,Ｂｔ）的２个杀虫晶体蛋白（ＩＣＰｓ）基因整合进Ｂｔ染色体上,转座频率达５９×１０－５．将对双翅目昆虫有毒效的ＩＣＰｓ基因ｃｒｙ１１Ａ和广谱溶细胞且对蚊子等有毒效的ｃｙｔ１Ａ基因分别克隆到ｐＴＶ１Ｔｓ上,用高压电激法转入对鳞翅目昆虫有毒效的库斯塔克亚种（Ｂｔｓｕｂｓｐｋｕｒｓｔａｋｉ）ＨＤ１菌株,分别筛选到在染色体基因组上整合进这２个基因的突变株ＨＴ２６和ＨＴ４５,整合基因均能在这２株工程菌中获得表达并形成正常的伴孢晶体．生物测定结果显示,表达的Ｃｒｙ１１Ａ和Ｃｙｔ１Ａ晶体蛋白有很高的杀虫活性,对库蚊三龄幼虫的ＬＣ５０分别为８３ｎｇ／ｍＬ和６４ｎｇ／ｍＬ,同时Ｃｙｔ１Ａ晶体蛋白对培养的昆虫细胞有较强的溶解作用．其结果为创造新型基因工程苏云金杆菌杀虫剂提供了新的重要途径     

提高苏云金芽孢杆菌制剂杀虫效果的策略

苏云金芽孢杆菌制剂是一种主要的生物杀虫剂 ,本文从培育高效菌株、增加昆虫对 Bt的摄入量、化学杀虫剂促进 Bt的杀虫作用、植物次生物质的增效作用、Bt与其杀虫微生物及其代谢产物的协同作用、简单化合物提高 Bt的毒力以及保护 Bt免受紫外光的损伤等方面提高 Bt制剂的杀虫活性进行了论述。     

转Bt杀虫蛋白基因植物及其抗虫性研究进展

利用遗传工程技术将苏云金杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ Ｂｅｒｌｉｎｅｒ简称Ｂｔ）杀虫蛋白基因导入植物是近年来的研究热点,本文就Ｂｔ基因的转化及其在植物中的表达与抗虫效果、转Ｂｔ基因植物的产量及品质以及存在的风险与安全性等方面的研究进展作一综述．     

对棉铃虫高效的2个Bt新菌株及其特性的研究

本文对从浙江者土壤中分离并经初筛的２个苏云金芽孢杆菌菌株进行了生物测定、晶体特性及生化特征的研究。生测结果表明，２个Ｂｔ菌株对棉铃虫具有很高的毒效，４８ｈ的校正死亡率高达９６－９８％，ＬＤ５０（半致死剂量（范围约为６．０－７．０μｇ晶体蛋白。扫描电镜观察表明，２个菌均有萎形和方形２处伴孢晶体。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱显示它们均有１３５ＫＤａ和６５ＫＤａ２条主带。生化测定结果推断９５０８和９５１１菌株分     

Bt的活化时间对发酵周期的影响

通过对苏云金芽孢杆菌生长曲线的研究,将处于不同生长阶段的菌体分别作为菌种,进行发酵实验,对610 nm和278 nm波长处的吸光度变化曲线、溶氧变化曲线和pH值变化曲线进行比较,得出了菌种最佳的活化时间为8 h,把处于对数生长期的菌体作为"种子",与未活化的菌种发酵相比,可以使发酵周期由32 h缩短为28 h。     

质粒消除选育苏云金杆菌杀虫菌株

利用 4 2℃高温及其与 SDS复合消除质粒法处理本室分离保存的 80 10、WB2、WB3、WB6 4菌株 ,利用小菜蛾对突变株进行生测筛选 ,获得一高毒力菌株 TS16 ,其小于 2 Kb的质粒带丢失 ,6 .6 Kb的质粒带明显变淡 ,毒力比原菌株提高 50 %左右。室内摇瓶培养基的筛选表明 ,其发酵产孢量主要受 C、N源影响 ,无机盐影响较小     

枯草芽孢杆菌质粒pGB38复制子的分离及其稳定…

质粒ｐＧＢ３８是从中国戈壁滩沙土的枯草芽孢杆菌中分离得到的天然质粒。该质粒基因组总长为５．８ｋｂ，相对于细胞染色体的考贝数是４个，最小复制子们于１．５ｋｂ的ＨｉｎｄＩＩＩＤＮＡ片段，在没有任何选择压的条件下能够稳定持久地存在于细胞内，显然有着优良的质粒特性，利用质粒ｐＧＢ３８的复制子构建了穿梭质粒ｐＧＢ２０和ｐＧＢ１５，重组穿梭质粒的分离稳定性好，可以作为理想的枯草芽杆菌的基因工程载体。     

ABAMECTIN与Bt制剂复配的杀虫增效作用

以菜青虫为试虫测定abamectin与Bt8010复配的毒力。结果表明abamectin—Bt8010的5种不同配比均有不同程度的增效作用,其中以5000IUBt8010+0.1％abamectin的增效作用最为显著,其共毒系数为289.4.室内药效测定结果,用该配比制成的可湿性粉剂对花椰菜、白菜、番茄、豌豆、蚕豆、茶树、柑桔、马尾松8种植物上分属鳞翅目、同翅目、鞘翅目、双翅目和蜱螨目的23种害虫有较好的杀灭效果。混配制剂对鳞翅目幼虫仅能提高用药24h后的杀灭率,并不能提高24h内的杀灭速度。     

细菌（Bt）杀虫剂火箭抛撒剂型生物活性的研究

以微型弹道火箭筒为发射器,将细菌（Bt )杀虫剂装入弹头,然后发射到指定的空间,瞬间破,安全防火,并定向、定点地抛撒到防治目标上,以达到防治害虫的目的。从抛撒前后对Bt的活芽孢进行测试,其结果表明前后芽孢存活率未见变化;对火箭抛撒前后Bt菌粉生物活性的研究证明,细菌（Bt )杀虫剂采用火箭抛撒剂型是可行的,实验证明经改良后的Bt菌粉用火箭抛撒,对其生物活性不但不产生不良影响,而且还具有保护和提高作用的效果。     

苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白基因的克隆、表达及杀虫活性分析

选择本实验室分离的野生型苏云金芽孢杆菌菌株WY-197为出发菌株，用全长PCR方法从此菌株中克隆了2．3kb大小的vip3A基因,DNA序列比较发现所克隆的基因vip3A-197与已知的营养期杀虫蛋白基因存在很高的同源性．将基因vip3A-197亚克隆至原核表达载体pET33b构建了原核表达质粒pEVip，转化大肠杆菌BL21，转化子经IPTG诱导后可表达88kD大小的蛋白．该蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)棉铃虫(Helicoverpa armigera)的初孵幼虫进行生物测定，结果表明，营养期杀虫蛋白vip3A-197对夜蛾科害虫具有一定的杀虫活性。     

枯草杆菌—大肠杆菌多功能穿梭载体的构建

本文简要地报道了由枯草杆菌运载体pUB_(110)和大肠杆菌运载体pGEM_3构建的一个多功能穿梭载体pBE_2.该载体能在枯草杆菌和大肠杆菌中复制和表达,并具有一个强启动子和一个多酶切位点区可供广泛利用,是一个比较理想的运载体.     

污水处理芽孢杆菌的抗盐诱变育种技术研究

污染海水的处理是沿海城市生态环境治理中迫切需要解决的问题,培育耐盐污水处理菌种具有重要实践意义.对处理污水的芽孢杆菌Y进行抗盐诱变育种,分别采用紫外线照射、NTG、及60Coγ等方法,选出最佳诱变方法为NTG900μg/m与60Coγ200 Gy的复合处理.     

重组巨大芽孢杆菌在小麦根际的定殖及其对植物真菌病害的防治效果

对含有外源几丁质酶编码基因的重组菌株——巨大芽孢杆菌B13011和B13012进行了小麦根际定殖能力，平板抑真菌能力和盆栽防病试验。两重组菌株均能在小麦根际及根内成功定殖；在盆栽条件下，对小麦全蚀病、小麦纹枯病、棉花立枯病、棉花枯萎病四种真菌病害的防效与受体菌B1301相比达显著性差异(P=0．05，LSR测验)，其中B13011对纹枯病的防治效果达到了81．61％。两重组菌株均能提高受试作物的生物量，其中B13011提高棉花的生物量达39．40％。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子的纯化及生物活性鉴定

目的 :探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)的纯化工艺和活性鉴定 .方法 :将rhbFGF工程菌大量扩增后通过包涵体提取、复性、阳离子交换、凝胶过滤等技术进行纯化 .结果 :纯化后的rhbFGF ,相对分子质量为 17× 10 3,蛋白纯度为 95 %以上 ,比活为 1 7× 10 6 U/mg ,对NIH3T3细胞具有明显的促分裂活性 .结论 :通过复性和两步层析的纯化方法可获得高纯度、高回收率和高生物活性的rhbFGF ,可用于实验室研究及临床试验     

环状芽孢杆菌C-2几丁酶基因在荧光假单胞菌中的表达

将已克隆到的环状芽孢杆菌（Bacillus circulans)C-2的几丁酶基因chi1片段克隆到质粒载体pUXBF5中，得到重组质粒pUXCH1，该重组质粒在大肠杆菌中可以表达产生具有生物活性的几丁酶并分泌到胞外。将pUXCH1分别利用感受态法和三亲本杂交法转化荧光假单胞菌（Psendomonas fluorescens），在含有卡拉霉素的金氏B平板上筛得转化子。但将转化子点种于几丁质平板上却不能产生水解圈，提取细胞内容物后用比色法也没有检测到有效的酶活性。该研究表明环状芽孢杆菌 的几个酶基因chi1已经被成功的整合到荧光假单胞菌的染色体上，但却没有表达或表达效率极低，这可能是由于荧光假单胞菌的表达系统不能正确有效的识别存在于该chi1几丁酶基因片段中的环状芽孢杆菌基因启动子而造成的。     

基于关联规则数据挖掘的梭式窑燃烧控制专家系统的研究

为实现梭式窑燃烧控制运行的空燃气优化配比以及温度控制科学决策,研究并设计出一种基于关联规则数据挖掘的专家系统。详细地论述了数据挖掘基础知识以及使用关联规则理论挖掘的方法。重点设计并介绍了燃烧控制专家系统的各个部分详细组成。最后还给出了基于关联规则的燃烧控制专家推理算法并进行了实际应用举例。实践表明,该专家系统模型适应性好,推理结果可靠稳定,具有比较好推广应用价值。     

Cloning and Characterization of Gene Promoters from Bacillus pumilus

DNA fragments obtained from Sau3AI partially digested total DNA of Bacillus pumilus UN31-C-42 are first inserted into BamHI site of pSUPV4, a promoter-probe vector. The recombinant DNA molecules are transformed into Escherichia coli cells and eight-three Kanr clones (named pSUBp1-pSUBp83) are obtained. The inserted fragments in pSUBp53, pSUBp57, pSUBp21, which showed high level of kanamycin- resistance, are sequenced and analyzed, respectively. These fragments contain some con-served sequences of prokaryotic gene promoters, such as TATAAT and TIGACA box. The promoter frag-ment Bp53 could efficiently promote the alkaline protease gene of B. pumilus expression not only in E.coli but also in B. subtilis cells.     

曲线同源连杆机构构成特性分析

针对同源连杆机构构成特性存在的问题,采用数学建模方法,并用Matlab编程实现,研究结果表明,至少有九个平面铰链连杆机构描绘相同的连杆曲线,包括三个四杆机构,三个齿轮五杆机构,三个六杆机构,还提出:同源机构与原始机构的对应构件有相同的角速度:在通常使用情况下,同源四杆机构与原始四杆机构具有相同的传动角。该成果对机构学应用具有一定的参考价值和指导意义     

BMP4重组蛋白在毕赤酵母中表达载体构建与纯化分析

以骨形态发生蛋白(BMP4)为研究对象,将BMP4基因与IgG-Fc基因结合,改造成为BM P4-Fc融合蛋白,经巴斯德毕赤酵母诱导表达和DEA E阴离子纯化获得目的蛋白,并利用间充质干细胞验证了其生理活性.结果表明:使用巴斯德毕赤酵母能够很好表达B M P4-Fc融合蛋白,通过提纯条件,成功分离纯化BM P4-Fc融...