华溪蟹主要组织蛋白质双向电泳技术体系的建立

为深入研究重金属胁迫下华溪蟹主要组织蛋白质的差异表达,对华溪蟹心脏及鳃总蛋白质的双向电泳技术体系进行了初步探讨.通过对样品处理方法、上样量大小以及双向电泳实验条件的比较选择,初步建立了适用于华溪蟹组织蛋白质组分析的双向电泳技术体系.结果表明:选取pH 3～10的24cmIPG胶条,上样量1.0mg,得到了较为理想的华溪蟹心脏及鳃双向电泳图谱;分离到的心脏蛋白质多集中于pH 5.5～9,而鳃蛋白质多集中于pH 4～7.     

聚苯乙烯为致孔剂的分子印迹膜对溶菌酶吸附性能的研究

探索聚苯乙烯微球的添加对于分子印迹膜对溶菌酶(Lysozyme, Lyz)吸附性能的影响.以溶菌酶为模板分子,丙烯酰胺、N,N'-亚甲基双丙烯酰胺为功能单体、聚苯乙烯(Polystyrene,PS)微球为致孔剂,制备聚苯乙烯为致孔剂的分子印迹聚合物膜(PS-MIP).PS-MIP的吸附平衡时间为30 min,短于未添加聚苯乙烯微球的分子印迹聚合物膜(MIP);PS-MIP与MIP对于Lyz的吸附能力均明显好于聚苯乙烯为致孔剂的非分子印迹聚合物膜(PS-NIP)与未添加聚苯乙烯微球的非分子印迹聚合物膜(NIP);PS-MIP对Lyz的选择性要好于MIP,而卵清蛋白和牛血清白蛋白在PS-MIP和MIP上的荧光信号没有差别.实验结果表明,在分子印迹膜聚合过程中添加聚苯乙烯微球,有利于缩短吸附时间,增大溶菌酶的吸附量并提升选择性.     

基于OFFGEL预分离二维液质联用技术在大鼠海马膜蛋白中的应用

以大鼠海马膜组分为研究对象,以等电聚焦OFFGEL为研究手段,结合反相液相色谱质谱联用技术,考察对酶切肽段的分离富集性能,同时结合DAVID分析工具对分离富集得到的酸性蛋白质进行的GO分析.结果表明,海马膜组分的酶切肽段经过OFFGEL分离后,得到24个不同馏分,每个馏分经过纳流液相色谱-质谱检测,发现有77% 的肽段专属于一个馏分,在酸性范围内的肽段等电点偏差较小,可以达到良好的聚焦效果;酸性蛋白的GO分析结果显示,质膜和物质的跨膜运输所占比例最大.OFFGEL作为一种预分离手段,可以应用于生物样品的大规模蛋白鉴定,在进一步蛋白质层面的生物功能研究中表现出良好的应用前景.     

毛细管电泳中的形态分析--微量元素分析新方向

元素的形态分析可为化学、环境科学、医学和生命科学提供重要的信息．作为一种新型的分离技术，毛细管电泳具有分离效率高、速度快、样品耗量少等优点．本文评述了毛细管电泳在元素形态研究中的进展，包括区带电泳、胶束电动色谱、毛细管电色谱等分离模式和紫外、电化学、电感耦合等离子体质谱及化学发光等检测手段的应用．讨论了该领域存在的问题和未来的发展趋势．引用文献56篇．     

从血清乳酸脱氨酶的分析探讨大土北鸭的杂优效应

对三种家鸭血清LDH活力测定的结果,发现其总活力和比活力的大小依次为大土北鸭>金定鸭>北京鸭。采用等电聚焦电泳,对家鸭血清中LDH同工酶进行分析,得到电泳区带分别在 18～20条之间,可以看到有2个峰簇区,同时表现出正极端的不均一性。测得等电点范围为 pH4.8～8.8,但几乎集中在pH6.0～8.0,试验表明:大土北鸭LDH生化特性明显偏向金定鸭。结果为杂优分析提供了有意义的分子学基础。     

钝顶螺旋藻中藻蓝蛋白的分离纯化及特性研究

为发展新型海洋药物,采用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００凝胶层析和羟基磷灰石柱层析对人工养殖钝顶螺旋藻中的藻蓝蛋白进行了分离和纯化,得到了藻蓝蛋白纯品。测定了藻蓝蛋白的氨基酸组成和含量。藻蓝蛋白的紫外、可见吸收光谱表明其最大特征吸收波长为２７８,３６０,６２０ｎｍ。得到的藻蓝蛋白经等电聚焦显示为一条带,其等电点为ｐＨ＝４．３。还测量了藻蓝蛋白红外吸收光谱。研究所获得的藻蓝蛋白为后续开展临床应用提供了可靠的样品。     

缓冲液成分对固相pH梯度等电聚焦的影响

分别从水质、DTT(二硫苏糖醇)含量及含盐缓冲液三个方面对等电聚焦过程进行了对比。通过电学参数变化,研究了三者对聚焦进程的影响。结果表明:高质量的水、低含量的DTT和盐可以缩短聚焦时间,从而提高聚焦质量。可以把电学参数的变化作为优化和控制等电聚焦过程的指标,为正确设计合理的双向电泳实验流程提供依据。     

百日咳毒素的等电点测定及层析分离

百日咳毒素是百日咳杆菌(Bordetellapertussis)产生的一种主要毒力因子,也是百日咳菌苗的主要成分之一.用等电聚焦法测得其等电点为pH6 8.将百日咳杆菌液体培养液在等电点盐析后,通过DEAE-Sephadex-A50阴离子交换剂进一步分离纯化了百日咳毒素.ELISA测定其比活力表明,3批样品的提纯倍数分别为1 47,1 37和1 36.     

Two-dimensional gel electrophoresis analysis of the proteomes expressed in the human hepatoma cell line BEL-7404 and normal liver cell line L-02

Proteome analysis technology has been used extensively in conducting discovery research of biology and has become one of the most essential technologies in functional genomics. The proteomes of the human hepatoma cell line BEL-7404 and the normal human liver cell line L-02 have been separated by high resolution two-dimensional gel electrophoresis (2-DE) with immobilized pH gradient isoelectric focusing (IPG-IEF) in the first dimension and sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) in the second dimension (IPG-DALT). The resulting images have been analyzed using 2-D analysis software. Quantitative analysis reveals that 7 protein spots are detected only in hepatoma BEL-7404 cells, 14 only in L-02 cells, and 78 protein spots show significant fluctuation in quantity in both cell lines (P< 0.01). These protein spots have been displayed on a proteome differential expression map. Analysis for the reproducibility of 2-DE indicates that the positional variability in the IEF dimension is 0.73 mm, while the variability in the SDS-PAGE dimension is 0.44 mm, and the quantitative variability is 17.6%–19.2%. These results suggest that the reproducibility of 2-DE has been suitable for the study of differential expression of proteomes. Proteome differential expression maps can be useful tools for disease diagnosis, drug-target validation analysis and biological process elucidation.     

绿豆几丁质酶的纯化和酶学性质分析

利用亲和色谱Affi-gel和离子交换色谱SP-Toyopearl从绿豆种子中分离纯化出几丁质酶.纯化的蛋白通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定达到电泳纯,分子质量为30.8kDa.还原和非还原状态下的几丁质酶蛋白均显示单一区带,说明该几丁质酶为单倍体蛋白.通过等点聚焦法测得pI为6.3.该酶的最适pH为5.4,最适反应温度为40～50℃.     

零价铁法处理垃圾填埋场渗滤液

为解决垃圾渗滤液尤其是回灌后渗滤液存在可生化性差的问题,研究了一种可行的渗滤液物化处理工艺。采用零价铁法工艺,利用废旧铁屑处理渗滤液。实验考察找到了处理效果随铁屑投加量,焦炭投加量、反应时间及pH值变化的规律,并通过正交实验找到了最佳的反应条件组合。实验结果表明:当pH控制在7.4左右,反应时间3 h,铁屑和焦炭投加量分别在175 g.L-1和0.3 g.L-1的时候,能达到60%的化学需氧量去除率。结果表明,零价铁法处理渗滤液效果明显,价格适中,操作简单,应用前景广阔。     

狗脑抗吗啡镇痛肽“60a”的分离纯化及部分一级结构

本实验室从正常狗脑中又分离获得一个暂称这为“６０ａ”的肽。冻干粉经ＳｅｐｈａｄｅｒＧ－５０和羧甲基纤维素ＣＭ２２柱层析，再经反相高效液相层析纯化得最后样品，经ＳＤＳ电泳和等电聚焦电泳鉴定均为一条带，分子量约８０００，等电点在ｐＨ７．８左右；Ｎ－末端氨基酸为Ｍｅｔ；自Ｎ－末端的部分氨基酸序列为：Ｈ２Ｎ－Ｎｅｔ－Ｌｅｕ－Ｓｅｒ－Ｐｒｏ－Ａｌｓ－Ａｓｐ－Ｌｅｕ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ｉｌｅ－Ｌｅｕ－Ｐｈｅ－Ｔ     

抑制off-gel分离中18O标记回标的方法研究

off-gel分离法和¹⁸O标记是蛋白质组学研究中常用的分离和标记方法,通过对大鼠纹状体蛋白酶解后的肽段进行off-gel分离,以及基于超滤后的¹⁸O标记与off-gel分离的结果表明,off-gel对复杂生物样品具有良好的聚焦和分离效果,超滤去除游离酶后,¹⁸O标记的肽段没有发现明显回标现象,¹⁶O与¹⁸O标记的肽段1:1混合后,90%以上的蛋白¹⁶O/¹⁸O比值为1.04±0.16,因此,对复杂样品的考察结果说明基于超滤的¹⁸O标记可以与off-gel分离联合使用,扩大了¹⁸O标记在分离方法中的选择范围,能够应用于定量蛋白质组学的研究中.     

基于非对称流场流分离技术的蛋白分离研究

通过对肌红蛋白和牛血清白蛋白混合蛋白样品分离,研究了非对称流场流分离技术(AF4)分离蛋白时需要优化的参数及各个参数对分离效果的影响。首先应用正交设计实验考察样品进样量、横向流速、进检测器流速、聚焦时间对分离效果的影响,得到最大影响因素为横向流速,最优分离条件为:样品进样量20μL、横向流速5mL/min、进检测器流速0.2mL/min、聚焦时间6min。经验证此最优分离条件下分离度达到2.5。随后在最优分离条件下分别考察膜材料、缓冲盐浓度、分离腔室厚度对非对称流场流分离效果的影响。结果表明,截留膜选用再生纤维素膜,流动相缓冲盐浓度为20mmol/L时,满足非对称流场流分离技术分离蛋白样品的分离要求,随着腔室厚度的提高,分离度进一步增大。     

不同缓冲体系的牛血清白蛋白插层蒙脱石效果

利用离子交换的原理,研究等电点两侧的不同pH值、不同缓冲体系对牛血清白蛋白插层蒙脱石效果的影响.结果发现,pH值对蒙脱石插层影响显著.在采用低于蛋白质等电点的pH值且利用乙酸-乙酸钠作为缓冲体系时,蛋白质的插层容易造成蒙脱石层间的剥离.等电点两侧的pH值不同,会造成蛋白质插入量的显著差异.热重分析表明,蛋白质/蒙脱石复合物的热稳定性有一定程度的提高.     

绞股蓝,菊花脑的成分分析及同功酶酶谱研究

绞股蓝在临床上可用于治疗多种癌症。菊花脑是新开发的蔬菜植物,也具有药物之效用。本文测报了绞股蓝、菊花脑中部分成分:蛋白质、总糖、脂肪、水分、维生素C;超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦显示绞股蓝、菊花脑中酯酶、过氧化物酶、细胞色素氧化酶同功酶的酶谱。     

四种鱼的主要成分及酯酶同功酶研究

鲫、鲤、鲶、乌鳢是四种常见的食用鱼类,具有重要的经济价值和科研意义。本实验对这四种鱼的肌肉和小肠的主要化学成分蛋白质、脂肪、总糖和水分的含量进行了测定。并通过超薄层聚丙烯酰胺等电聚焦对四种鱼的肌肉和小肠中酯酶同功酶进行了研究。     

基于皮尔逊系统的语音信号盲源分离

当利用传统自然梯度算法对所有语音信号都使用同一个激活函数进行分离时,对语音信号的盲源分离效果都不尽理想.针对这一问题,采用基于皮尔逊系统的分段激活函数对传统自然梯度算法进行改进.通过引入皮尔逊系统,将皮尔逊函数与传统激活函数相结合,再利用信号的矩估计方法,分段选择合适的激活函数代入分离矩阵,有效克服了传统语音分离算法的缺点和不足.仿真结果表明,在对实际的语音信号进行分离时,改进算法的性能明显优于传统自然梯度算法,并且在保持了良好收敛速度的同时大大减少了均方误差.     

基于小波变换的快速自动聚焦算法

针对图像采集系统存在噪声情况下,提出了一种基于小波变换的快速聚焦算法。该算法采用5点数据拟合方法以及较大步长来降低聚焦搜索时间。算法中的聚焦测量函数在存在较大的噪声情况下仍然具有较好的性能,与其它的聚焦测量函数如Laplacian能量聚焦测量函数、梯度(Sobel)能量聚焦测量函数和图像灰度方差测量函数等相比较,仿真和实验的结果表明该算法在聚焦分辨力、抗噪声等方面具有较好的性能。     

苦荞类胰蛋白酶水解酶的纯化及部分性质研究

采用缓冲液提取、盐析、凝胶过滤及离子交换层析等方法，从苦荞种子中分离纯化出1种类胰蛋白酶水解酶，经十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)测得其分于量为67kD，等电聚焦(IEF)测得等电点为6．3．该酶可以水解胰蛋白酶的底物BApNA，而且其活性不受苦荞胰蛋白酶抑制剂的影响．通过比较，苦荞中的胰蛋白酶水解酶在性质上与报道的甜荞BAPAase极为相似，可能属于同一类蛋白酶．