抗—DNA免疫复合物性质的研究

用聚乙二醇和硫酸铵从系统性红斑狼疮患血清中分离出免疫复合物和血浆核酸。分析结果表明，ＰＮＡ的主要成分是ＲＮＡ，仅有少量ＤＮＡ存在，并且ＰＮＡ中ＤＮＡ的ｄＧ＋ｄＣ含量（５５％）明显高于正常值（４２％）。一旦经过ＲＮａｓｅ处理，ＰＮＡ抑制抗－ＤＮＡ抗体结合ＤＮＡ的能力降低，说明抗－ＤＮＡ抗体和ＲＮＡ有交叉反应。动力学研究观察到，抗－ＤＮＡ免疫复合物中抗原抗体的分子比是１：１结合能为３７ｋＪ／ｍｏｌ．     

催化杀虫剂西维因水解的抗体酶制备(Ⅱ)多克隆催化抗体的制备、纯化及检测

以优选的合成抗原（Ｈ(ａｐ)－ＢＳＡ）免疫动物产生了滴度为１：５５０００（１号兔,Ｒｔ－１）的兔抗多克隆催化抗体．采用盐析和ＰｒｏｔｅｉｎＡ－ＳｅｐｈａｘｏｓｅＣＬ４Ｂ亲和层析法,从兔抗血清中分离出了具有电泳纯度的多克隆催化抗体．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测,ＩｇＧｓ相对分子质量为１４８０００．纯化后的多克隆抗体,经ＥＬＩＳＡ法测定,其最低检出活性为２×１０(－６)～４×１０(－６)ｇ／Ｌ．     

脱落酸受体及其基因的分子免疫学研究(英文)

发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋白,并用１％琼脂糖凝胶电泳时,发现其中存在约３００个核苷酸的ｒＲＮＡ分子。用识别ＡＢＡ结合蛋白的抗体筛选ｃＤＮＡ表达文库,从２００,０００个独立噬斑中获得１２０个编码玉米１７ｓＲＮＡ的ｃＤＮＡ克隆和１个ｃＤＮＡ编码结合蛋白的ｃＤＮＡ克隆（２４ｃＤＮＡ）。２４ｃＤＮＡ有１０７５个碱基对,含编码２５４个氨基酸的开放阅读框架。其二,制备了识别抗ＡＢＡ单克隆抗体的独特型抗体（ａｎｔｉ－Ｉｄ）,它具有模拟并竞争ＡＢＡ的能力。用上述两类免疫探针定位了植物细胞中的ＡＢＡ结合蛋白。发展了研究脱落酸（ＡＢＡ）结合蛋白的两类免疫探针。其一,用ＡＢＡ－Ｃ１－ＢＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析柱纯化出ＡＢＡ结合蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示该蛋白分子量为５６ＫＤ的一条带,它具有特异结合ＡＢＡ的能力（Ｋｄ＝２．０×１０－９ｍｏｌ／Ｌ）。当用蛋白水解酶Ｋ水解该蛋?     

荧光染料离子缔合作用在荧光法测定微量DNA中的应用

建立了高灵敏荧光分光光度测定ＤＮＡ 和ＲＮＡ 的新方法． 方法的线性范围分别为０－０４ ～１－２０μｇ／ｍ Ｌ（ 鲑鱼精子ＳＭＤＮＡ 和小牛胸腺ＣＴＤＮＡ） , ０－１０ ～１－２０μｇ／ｍＬ（ 酵母ＲＮＡ） , 检测限分别为１７ｎｇ／ｍＬ（ＳＭＤＮＡ） , ２４ｎｇ／ｍＬ（ＣＴＤＮＡ） , ９８ｎｇ／ｍＬ（ＲＮＡ） ． 将方法用于实际样品金黄色葡萄球菌中ＤＮＡ 含量的测定, 结果满意．     

高迁移组染色体蛋白-17的分离提取及其抗体ELISA测定方法的建立

纯化高迁移组染色体蛋白－１７（ＨＭＧ－１７）,建立检测抗ＨＭＧ－１７自身抗体的ＥＬＩＳＡ方法,探讨抗ＨＭＧ－１７抗体与临床疾病的关系。用水煮沸法提取,甲酸－吡啶缓冲液酸化和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶过滤技术,自小牛胸腺组织中分离ＨＭＧ－１７,用此纯化物包被,方阵滴定,建立测定抗ＨＭＧ－１７抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法,并进行方法学考核和临床标本检测。纯化的ＨＭＧ－１７抗原经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析,呈现一条分子量约９２００的蛋白带;建立的ＥＬＩＳＡ方法批内平均变异系数（ＣＶ）为５．８％,批间ＣＶ值为９．６％,ＥＬＩＳＡ抑制试验最高抑制率达８７．２％;临床检测结果表明,在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ）和干燥综合征（ＳＳ）患者中分别有１７．４％～３７．３％的抗ＨＭＧ－１７抗体的阳性检出率（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）,而在其他自身免疫病和内科疾病者中,抗ＨＭＧ－１７抗体均为低水平。抗ＨＭＧ－１７抗体ＥＬＩＳＡ测定法具有较好的特异性和重复性,便于常规检测,该类抗体的存在似与某些自身免疫病（尤其是ＳＬＥ）的关系较为密切     

抑制羧肽酶A催化活性的单克隆抗体的制备及性质测定

以羧肽酶Ａ为抗原，经动物免疫、细胞融合、筛选及３次克隆化培养，获得了一株稳定分泌对羧肽酶Ａ肽酶活性有抑制作用的单克隆抗体的杂交瘤细胞株１Ｇ１０。染色体数目为８０～９０；ＥＬＩＳＡ测定腹水效价为１０６；亲和常数为１．５９×１０９（ｍｏｌ／Ｌ）－１；免疫球蛋白属ＩｇＧ１型；分子量为１５０Ｋｄ。羧肽酶Ａ与该抗体反应后测定肽酶活性，显示出该抗体能抑制羧肽酶Ａ的肽酶活性，Ｄｉｘｏｎ法作图表明类似竞争性抑制反应，测得其表观抑制常数为１．１７×１０－７ｍｏｌ／Ｌ。该抗体可能针对羧肽酶Ａ的活性中心部位，为制备具有抗原内影像作用的抗独特型抗体酶打下了基础     

丙型肝炎病毒核酸疫苗的研究

从丙型肝炎病人的阳性血清中提取出丙型肝炎病毒ＲＮＡ，通过ＲＴ－ＰＣＲ的方法获得丙型肝炎病毒Ｃ区基因片段。并将此片段克隆到真核细胞表达载体ｐｃＤＮＡ３．１（＋），得到重组质粒ｐｃＤＮＡ－ＨＣＶ／Ｃ，再将其通过肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／小鼠后，小鼠产生了抗ＨＣＶ／Ｃ区抗体。     

免疫分析试剂异硫氰酸异鲁米诺的发光标记性能研究

研究了新化学发光免疫分析试剂异硫氰酸异鲁米诺（简称ＩＴＣＩ）的发光及标记性能。在ＮａＯＨ－Ｈ_２Ｏ_２－Ｋ_３Ｆｅ（ＣＮ）_６介质中，测定ＩＴＣＩ的线性范围为３个数量级，检测限为６．６×１０^－１１ｍｏｌ／Ｌ，测定５０×１Ｏ^－９ｍｏｌ／ＬＩＴＣＩ，相对标准偏差为５．２％。标记酵母ＲＮＡ、ＡＦＰ抗体和羊抗人抗体（ＳａＨＩｇＧ）的反应条件温和，反应速度较快，标记率较高，每克酵母ＲＮＡ可与１．５×１０^－５ｍｏｌ／ＬＩＴＣＩ结合；标记ＡＦＰ抗体和羊抗人抗体的标记卒分别为０．４０和０．３５。     

酵母嗜杀质粒融合转移──Ⅰ．融合转移系统的建立

以嗜杀酵母ＥＲＲ１和啤酒生产酵母ＡＳ２４２０出发菌株，建立了供体菌ＭＫ２－３：Ｋ＋Ｒ＋Ｌｅｕ－ρ＋（ｎ）和受体菌ＡＳ２４２０－１：Ｋ－Ｒ－ｌｅｕ＋ρ°（２ｎ）．对原生质体制备再生条件的研究结果表明两株菌的原生质体制备条件不尽相同；同一菌株原生质体形成与再生的最佳条件也不相同．有利于融合再生的原生质体制备条件是ＭＫ２－３：菌龄３０ｈ，蜗牛酶解量３０ｇ／Ｌ酶解时间３０ｍｉｎ，此时原生质体形成率为８０％，而再生率达１７．１％，这些条件对嗜杀活性无影响，再生菌落的嗜杀活性率达１００％；而ＡＳ２４２０－１；菌龄２４ｈ，蜗牛酶量２０ｇ／Ｌ，酶解时间３０ｍｉｎ，原生质体形成率为８１％，再生率为１８．１％．对四种渗透压稳定剂的再生效果实验表明甘露醇效果最佳，氯化钾次之，考虑到廉价，氯化钾是很好的代用品，在３０％ＰＥＧ６０００及Ｃａ２＋条件下进行原生质体融合，融合率可达８．９×１０－６，对其中的融合子ＭＡＲ４的遗传性状及嗜杀活性的稳定性检测，ＤＮＡ含量及细胞大小测定，ｄｓＲＮＡ质粒的提取及电泳结果分析和发酵性能测定，结果表明融合子ＭＡＲ４具有较高的嗜杀活性并可以稳定遗传，有与供体菌ＭＫ２－３嗜杀质粒ｄｓＲＮＡ相同的电泳行为，     

淋巴细胞性脉络丛胞膜炎病毒单克隆抗体的研制及初步鉴定

用提纯的ＬＣＭ病毒抗原（主要为ＮＰ６３）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，应用鼠—鼠杂交瘤技术获得了三珠（１Ｅ２、１Ｃ６和２Ｄ２）分泌抗ＬＣＭＶ单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经检测，它们所分泌的抗体亚类分别为ＩｇＧ１（１Ｅ２）和ＩｇＭ（１Ｃ６）。亲和力为７５μｇ（１Ｅ２）和５μｇ（１Ｃ６）。腹水效价为１０５。免疫荧光阻断法和ＥＬＩＳＡ阻断试验测定结果一致，１Ｅ２的标记物能阻断２Ｄ２，但不能阻断１Ｃ６。三株ＭｃＡｂ对７种鼠源性病毒抗原（ＲｅＯ３、Ｓｅｎｄａｉ、ＭＨＶ、ＧＤⅦ、ＥＨＦＰＶＭ和Ｅｃｔｒｏ）均无反应。     

Multilayers Assembly of DNA Probe for Biosensor

IntroductionThere are many kinds of biosensors for detectingthe interactions of protein-protein,protein-DNAand enzyme-substrates.Surface plasmon resonance(SPR) biosensor is one of the importantdetectingtechniques.The analytical system is based on asensor chip that uses SPR to monitor theinteraction of biomolecules on a sensor chip.SPRis an optical phenomenon,which is sensitive tochanges in the optical properties of the mediumclose to a metal surface[1 ] .This optical techniquemeasures the…     

PNA（T）.DNA（AT） triplexes with Hoogsteen base pairing are more favorable

Peptide nucleic acids (PNAs) are nucleic acid analogs with the deoxyribose phosphate backbone replaced by pseudo-peplide polymers to which the nucleobases are linked. The achiral, uncharged and rather flexible properties of the peplide backbone permit peptide nucleic acids more potential than oligonucleolides in application to antisence and antigenic reagents. The process of PNA binding to DNA duplex and forming triplex is the first step of PNA interacting with PNA. But there are no PNA.2DNA triplex crystal data up to date and little has been reported on the structure features and the force of the PNA.2DNA triplex. In this work, PNA(T).DNA(AT) triplexes are successfully built and the structures and forces to stabilize the triplex after optimizations and molecule dynamics are systematically examined, which are expected to aid in the application of PNAs as anticerise and antigene agents.     

肽核酸研究的现状与未来

肽核酸 (PNA)是DNA的类似物 ,具有由氨乙基甘氨酸单位组成的假肽骨架 ,能以高亲和性和高生物稳定性与DNA和RNA特异性杂交 .PNA以链侵占方式与DNA结合 ,抑制转录或提供人工强启动子促进转录 ;与mRNA结合 ,阻止蛋白质的合成 ;此外 ,PNA还能导向核糖核蛋白的RNA部分 ,抑制其酶活性 .肽核酸的其它特点如抗核酸酶和蛋白酶作用、方便而灵活的固相合成法 (SPS)等 ,使其有望成为一个基因靶向药物 .该文综述了近年有关肽核酸研究的生物化学特性及其应用前景     

派罗宁GS双峰双波长光度法测定核酸

 采用光度法研究了派罗宁GS与核酸的结合反应,结果表明在pH 6.0左右的介质中,派罗宁GS与核酸在室温下能迅速结合形成紫红色复合物,该复合物在570 nm处有正吸收峰,在540 nm处有负吸收峰.据此,建立了1个测定核酸的双峰双波长光度分析新方法.用该方法测定小牛胸腺DNA(ctDNA)、鱼精子DNA(fsDNA)、酵母RNA(yt RNA)及热变性ctDNA(Dct DNA)的检出限均低于0.011μg/mL.方法简单、快速,试剂及反应体系稳定、选择性好、准确度高,用于4个合成试样的分析,回收率为96.1%~103.0%.     

近红外分光光度法测定核酸

以阳离子型近红外花菁染料做为生色探针,研究了该染料与核酸的结合反应,在ＰＨ６．０的条件下,该染料在７７１ｎｍ处有最大吸收峰,在核酸存在下,其吸收峰显著下降,而在６４０ｎｍ处出现新的吸收峰。据此,以该近红外花菁染料为生色探针,在７７１ｎｍ处依其吸光度的下降可定量测定核酸。     

吡啰红Y共振光散射法测定纳克级核酸

研究了二苯并吡喃类染料吡口罗红Y(PY)与核酸作用的共振光散射光谱,在pH11.5～12.0Tris-NaOH缓冲溶液中,1.75×10-5mol/L的PY溶液加入核酸后,体系的共振光散射增强,在364.0nm处,存在一共振光散射增强峰,其增强强度(△IRLS=I-I0)与核酸浓度呈线性关系,据此建立了一种测定纳克级核酸的简便灵敏的方法.对于fsDNA,方法的线性范围为27.0～625ng/mL,检出限为8.1ng/mL;对于ctD NA,方法的线性范围为39.0～500ng/mL,检出限为11.7ng/mL;对于yRNA,方法的线性范围为59.0～375ng/mL,检出限为17.7ng/mL.建立的方法已用于六种合成样品的测定,结果令人满意.     

The hybridization between peptide nucleic acid containing azobenzene and DNA labeled nanoparticle on chip surfaces studied by atomic force microscopy

Peptide nucleic acid containing azobenzene （N-PNA） was covalently bound on chip surfaces. Complementary DNA probes labeled by gold nanoparticles hybridizated with PNA on chip surfaces, The hybridization was successfully detected with AFM by the microscopy mothed. The influences of the position and the cis-trans isomerization of azobenzene unit on hybridization were investigated with AFM.     

红细胞CR1数量表达和基因多态性的研究

红细胞补体受体I（CR1）是红细胞重要的免疫物质基础,红细胞的一个功能是通过CR1促进免疫复合物由循环中完全清除.红细胞免疫黏附能力与CR1数量表达有关,CR1的基因突变影响数量表达.许多疾病如系统性红斑狼疮（SLE）、慢性肝炎及肿瘤中红细胞CR1水平下降,与CR1分子的数量及基因多态性密切相关.     

Fluorescence quenching and the binding interaction of lumichrome with nucleic acids

The interaction of lumichrome (LC) as an endogenous fluorescence probe with nucleobases, nucleosides and nucleic acids has been studied by UV-visible absorption, fluorescence spectroscopy, polarized fluorescence and viscosity. The fluorescence of LC was strongly quenched by a series of nucleic acids and their precursors. The influences of the medium, temperature and salt effects on LC-nucleobase and LC-nucleic acid complexes were investigated. The influences of polarized fluorescence, thermal denaturation and viscosity on LC-ctDNA interaction were examined. The results demonstrate that the main binding model of LC-ctDNA includes strong intercalating into the DNA helix chain.     

分支DNA探针法检测21例丙型肝炎血清病毒RNA

目前主要依赖检测丙型肝炎抗体来确定对丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)感染的诊断,但它不能反应机体是否有活动的病毒血症。分支DNA探针法应用合成的DNA分子与靶HCV—RNA特异性的杂交,形成RNA—DNA杂交体,用dioxetane作为底物与化学发光物结合,通过测定其发光强度可直接检测血清HCV—RNA的含量。本文测定21例慢性活动性丙型肝炎血清。HCV—RNA最低值为0.66Meg/ml;最高值为58Meg/ml,21例中86％的数值分布在0.66Meg/m-12Meg/ml的范围内。此方法cutoff值为0.5Meg//ml。我们所测定的21例均高于cutoff值。此方法操作简便,特异性强。为临床丙型肝炎治疗的监测及疗效的判断提供了重要的依据。