应用定点突变技术进行流感病毒NS1蛋白功能的研究

目的流感病毒NS1基因敲除毒株(delNS1毒株)的获得可以使我们建立更有效的生物学关系,主要表现在流感病毒繁殖周期和致病的过程中,流感病毒NS1蛋白和双链RNA活性蛋白激酶(PKR)之间的生物学关系.资料表明,缺少功能性的PKR可以使delNS1毒株在其他非允许宿主中繁殖,这表明流感病毒NS1蛋白的主要功能是对抗或阻止PKR调解抗病毒效应.因此,本实验为了证明流感病毒NS1蛋白对其复制和毒力的影响.方法应用定点突变技术进行流感病毒NS1基因的第38位和第41位氨基酸残基位点的定点突变;然后进行细胞转染包装成新的缺陷病毒;再对其进行转染后产量的测定,如TCID50和PFU.结果包装成的缺陷病毒与包装成的非缺陷病毒相比,缺陷病毒的TCID50和PFU明显下降.结论本实验证明了流感病毒NS1蛋白在流感病毒复制过程中,使其产量和毒力下降.     

人类T淋巴细胞白血病1型病毒的感染复制及致病机制研究进展

主要针对人类T淋巴细胞白血病1型病毒(human T-cell leukemia virus type 1,HTLV-1)及其与成人T淋巴细胞白血病(adult T-cell leukemia,ATL)的关系,尤其是人类T淋巴细胞白血病1型病毒的感染、复制及致病机制进行了综述.HTLV-1属于逆转录病毒,它的感染可导致成人T细胞白血病.HTLV-1病毒主要通过细胞与细胞间接触进行传播,并通过促进其感染细胞的增殖增加病毒拷贝数.病毒基因的调控及宿主免疫系统共同决定了体内HTLV-1病毒的载量.病毒编码的HBZ和Tax蛋白在ATL发生过程中发挥着至关重要的作用,它们在功能上相互配合,共同调节病毒的复制,诱导感染细胞增殖及病毒传播.对于HTLV-1病毒与ATL关系的深入研究,将对认识病毒和宿主的相互作用及相关传染性疾病的防治带来新的启示.     

基于网络的流感病毒复制的研究

流感病毒是一种重要的呼吸道疾病病源,容易在人群中造成地方流行,给人类带来灾难和危害。利用A型流感病毒的4种毒株H3N2、H5N1、H7N7和H7N9的基因表达谱数据集,运用偏最小二乘法,分别构建了4个流感病毒感染复制的调控网络,挖掘了4个数据集下在病毒复制过程中发挥重要功能的基因,为进一步探索流感病毒在宿主细胞内的复制机制,揭示流感病毒的致病机理提供了可能。     

含果蝇肌动蛋白基因的重组棉铃虫核型多角体病毒的构建

本实验利用昆虫杆状病毒表达载体，将果蝇肌动蛋白基因5Cactin克隆入杆状病毒表达载体，以棉铃虫单核衣壳核多角体病毒为亲本病毒，在脂质体介导下共转染棉铃虫细胞，空斑纯化得到重组病毒，以深入研究棉铃虫病毒在入侵、复制及装配过程中，宿主肌动蛋白的动态变化对病毒复制的作用与影响。     

斜纹夜蛾核多角体病毒感染甜菜夜蛾细胞的研究

 研究发现斜纹夜蛾核多角体病毒（Spodoptera litura nucleopolyhedrovirus,SpltNPV）不能成功感染同属甜菜夜蛾（S. exigua,Se）昆虫,为深入研究SpltNPV在离体Se301细胞中的感染进程以及病毒感染失败的原因,对感染后Se301细胞进行DNA复制、病毒基因转录以及病毒蛋白表达等检测。结果显示被感染的Se301细胞中病毒完成了DNA的复制和病毒早、晚期基因转录,但检测不到极晚期基因多角体基因（polyhedrin）的表达,病毒的蛋白表达受阻从而影响了病毒完成复制周期。 研究发现病毒蛋白表达受阻是SpltNPV在Se301细胞中无法形成子代病毒,完成整个病毒复制的主要原因,这为深入研究其感染失败机理奠定了坚实基础。     

中国科学家从玉米中提取出抗艾蛋白酶突变体

艾滋病病毒（HIV）存在潜藏机制可以长期潜伏在细胞中而逃逸宿主免疫系统的攻击,目前已上市的抗HIV药物均不能选择性地杀伤感染细胞而根除病毒。核糖体失活蛋白（RIP）具有RNA N-糖苷酶活性,     

MAPK信号转导通路与HCMV感染

MAPK信号转导通路参与了HCMV的感染过程.MAPK通路中的ERK和p38通路在HCMV复制周期中起重要作用,它通过磷酸化转录因子引起病毒及宿主相关基因的转录,从而调控HCMV的复制.HCMV的包膜糖蛋白及其他多种基因表达产物可通过不同的机制以一定时序激活MAPK通路,调节自身及宿主细胞相应基因表达,以利于病毒完成其生活周期,并参与病毒的致病过程.深入研究MAPK信号转导通路与HCMV感染的关系可为治疗HCMV感染引起的疾病提供新的治疗靶点.     

Tn5转座子插入p95基因不影响AcMNPV的复制

从Tn5转座子介导的AcMNPV随机插入突变体库中,分离到一株复制正常的突变体AcApra41.突变定位发现Tn5转座子插入了病毒p95基因中.为了排除AcApra41中还有其他突变,利用同源重组法构建了p95基因定点插入突变的重组病毒AcGFP-P95in.PCR确认p95基因中插入了Tn5转座子;Western blot也证实AcApra41和AcGFP-P95in感染的细胞中,P95蛋白的分子量都因为插入突变而变小,由野生型的95 ku变为 55 ku.病毒复制动态曲线和荧光显微镜观察证实带有该插入突变的病毒能够在Sf9细胞中正常复制,并表达极晚期基因.这一结果表明完整的P95蛋白对病毒复制是非必须的.     

人副流感病毒入侵宿主细胞的分子机制

综述了3型副流感病毒结合和进入宿主细胞的过程,重点讨论了受体结合分子血球凝集素-神经氨酶蛋白如何引发病毒与宿主细胞膜的融合过程,从分子水平上认识病毒入侵细胞的各个步骤,为进一步阻断病毒感染提供靶标。     

埃博拉病毒入侵宿主细胞的分子机制

 埃博拉病毒是一类能够感染并引起人和灵长类动物发生埃博拉出血热的烈性囊膜病毒。发现近40年中,埃博拉病毒给人类生命带来了极大威胁。然而,目前人们对于埃博拉病毒的了解非常有限,尤其是病毒与其宿主细胞受体的结合机制和膜融合机制相关信息的缺失,使得针对埃博拉病毒的特效药物的设计和研发工作阻碍重重。本文综述了埃博拉病毒分类、形态、病毒蛋白和病毒生命周期,着重介绍了高福院士团队在埃博拉病毒入侵宿主细胞的分子机制研究中的成果。通过结构学手段解析了埃博拉病毒激活态囊膜糖蛋白GPcl与宿主细胞受体NPC1分子的复合物结构,从原子水平上阐明了埃博拉病毒与宿主细胞相互识别的机制,并在结构基础上对病毒的膜融合促发机制做出推测,提出以埃博拉病毒为代表的新的（第5种）囊膜病毒膜融合激发机制,为抗埃博拉病毒药物和疫苗的设计提供了结构基础。     

核不均一性核糖核蛋白H2（hnRNPH2）对单纯疱疹病毒（HSVI）复制影响

本文研究了单纯疱疹病毒（HSVI）在感染与复制过程中影响宿主细胞RNA转录，蛋白表达，进而为病毒的潜伏和持续感染创造必要条件．采用基于2-DE分析，人正常肝细胞L-02细胞核不均一性核糖核蛋白H2（heterogeneous nutlear ribonucleoprotein H2，hnRNPH2）在感染HSVI前后存在表达差异，构建pcDNA-hnRNPH2真核表达载体及hnRNPH2稳定转染的293T细胞系的方法，研究在核不均一性核糖核蛋白H2（hnRNPH2）稳定过表达后对HSVI病毒复制周期的影响．结果表明，病毒滴度和生长曲线显示，hnRNPH2可以显著影响病毒复制周期．过表达hnRNPh2的细胞系与对照相比，其病毒滴度明显下降，hnRNPH2在HSVI病毒复制中起到比较明显的抑制作用，其作用机理还有待进一步研究．     

致病性不同的两种流感病毒NS1蛋白对人源细胞IFN-β转录抑制的比较

A型流感病毒编码的NS1蛋白是病毒关键的致病因子,可以通过多种机制拮抗宿主抗病毒反应.病毒感染过程中,NS1通过抑制NF-κB和IRF3两种转录因子的活性,下调IFN-β转录水平以阻断其诱导的信号通路.实验选取病毒母本致病性不同的两种NS1蛋白(NS1-a,NS1-h),通过RT-PCR、报告基因和VSV病毒滴度等实验证明高致病性禽流感病毒NS1-a与普通人流感病毒NS1-h相比,表现出较强的抑制IFN-β转录能力,并有效帮助VSV病毒复制.此差异源于NS1-a更加有效抑制NF-κB活性以及IRF3激活后的入核行为,与IFN诱导的ISG转录无关.所得结果为阐释流感病毒致病性与NS1的密切关系提供线索.     

单纯疱疹病毒蛋白ICP34.5的抗凋亡功能探索

单纯疱疹病毒(HSV)是一种高感染率的人类DNA病毒,HSV进化出多种机制拮抗人体免疫系统的抗病毒免疫,其中抗凋亡是HSV的重要机制之一.有多种HSV病毒蛋白具有抗凋亡功能.该论文通过多种凋亡表型证明ICP34.5也具有抗凋亡功能.进一步实验确定ICP34.5是抑制了线粒体及其上游的凋亡通路.ICP34.5通过拮抗宿主细胞凋亡促进了病毒自身的复制.     

HPV感染与宿主细胞DNA损伤应答关系的研究进展

人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV),为球形无包膜环状双链DNA病毒,具有高度的嗜上皮特性和种属特异性,能够引起人类皮肤黏膜的增生性病变.HPV感染宿主细胞时,能引起宿主细胞的DNA损伤应答(DNA damage response,DDR).内在或者外界因素引起DNA损伤时,多条信号传导通路被激活,对损伤信号进行监测和传递,并形成一个适当的应答机制,即DDR.多项研究证实,HPV能够利用DDR来完成病毒复制.文章对HPV感染与宿主细胞DNA损伤应答关系的研究进展进行了综述.     

宿主细胞泛素系统与病毒相互作用的研究

真核细胞中,泛素系统执行对大多数短周期寿命蛋白的选择性降解,且已发现由泛素介导的对蛋白的降解调控在细胞的多种生命过程中起重要作用。病毒侵染宿主细胞后,细胞的泛素系统与一些重要的病毒蛋白相互作用,参与调节病毒的生活周期,如病毒迁移,核酸复制,免疫逃避,出芽等过程。     

人和动物的多瘤病毒

多瘤病毒分类于乳多空病毒科，ＤＮＡ肿瘤病毒。病毒无囊膜，直径４０ｎｍ～４５ｎｍ，有３种～４种衣壳蛋白，基因组为约５０００对核苷酸组成的双链闭合环状ＤＮＡ。病毒在自然界分布广泛，目前已从人、兔子、小牛、鸟类、啮齿类和灵长类等动物分离到多种多瘤病毒。各病毒内部有共同的属特异性抗原，但大多数病毒表面蛋白无血清学交叉反应。病毒在容许细胞中增殖良好，能使非容许细胞发生转化，在转化细胞中病毒ＤＮＡ以整合到宿主染色体的方式存在。多瘤病毒感染有严格的种特异性，在自然宿主内大多数病毒呈隐性感染，但人和虎皮鹦鹉多瘤病毒对宿主有一定致病性。本文就有关多瘤病毒的感染和生物学特性研究进展作一概述     

α-Enolase抑制人泡沫病毒反式激活因子Bell介导的反式激活作用

泡沫病毒能在宿主细胞内长期潜伏感染,且不伴随任何病理现象.为了阐明这一病毒潜伏感染机制关键要研究病毒与其宿主之间的相互影响,尤其是宿主对病毒基因转录水平的影响.Bell是人泡沫病毒的反式激活因子,它能够激活该病毒LTR和IP两个转录启动子.该研究利用酵母双杂交技术筛选到Bell的相互作月蛋白α-Enolase,并用免疫共沉淀技术确定了这两个蛋白的结合涉及α-Enolase的243～372位氨基酸及Bell的223～275位氨基酸.细胞转染实验发现α-Enolase蛋白能够抑制Bell介导的反式激活作用.     

猴副流感病毒(SV5)研究进展

猴副流感病毒SV5(simian virus 5)在病原学分类上属于副流感病毒5型,它在猴群中常以隐性感染的方式存在,由于该病毒会对猴源细胞生产的生物制品造成污染,在实验动物和生物制品的质量控制中须对该病毒进行监测。本文就猴副流感病毒SV5的生物学,分子生物学特性,遗传复制特征,相关     

流感分子病毒学研究进展

流感病毒繁殖周期很短,基因结构又非常简单,病毒RNA分成8个独立的片段。每个基因片段编码一个蛋白,有利于宿主发生双重感染后不同毒株之间基因交换重组。流感病毒为了自身生存,适应外界环境,频繁发生变异。每次新亚型出现,都引起世界性大流行。人类与流感病毒将长期共存。     

流感病毒NS1蛋白在复制中的作用研究

流感病毒NS1基因敲除毒株(delNS1毒株)的获得可以使我们建立更有效的生物学关系,主要表现在流感病毒繁殖周期和致病的过程中,流感病毒NS1蛋白和双链RNA活性蛋白激酶(PKR)之间的生物学关系.实验结果表明,缺少功能性的PKR可以使delNS1毒株在其他非允许宿主中繁殖,这表明流感病毒NS1蛋白的主要功能是对抗或阻止PKR调解抗病毒效应.