应用农杆菌介导法的多年生黑麦草遗传转化研究

以草坪型多年生黑麦草Lolium perenne L.成熟种子为外植体,经过愈伤组织诱导和植株再生研究,建立了该草种的遗传转化体系,并成功地应用农杆菌介导法将克隆自辽宁碱蓬的甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)转移进多年生黑麦草,获得的转基因株系Gsc-LP5通过PCR检测证明了目的基因的存在,通过叶片离体检测法证明了作为检测基因随同质粒一同转入的抗潮霉素基因的表达,通过盆栽耐盐试验证明了转基因植株具有较强的耐盐能力.     

农杆菌介导的DREB1A基因转化多花黑麦草及其转化体系的优化

采用携带卡那霉素抗性基因nptII和GUS基因的ubiquitin启动子驱动的表达载体pBI121／DREB1A的根癌农杆菌AGL1, 对多花黑麦草幼胚来源的胚性愈伤组织进行了遗传转化,并优化了各种影响因素。胚性愈伤组织经根癌农杆菌感染和共培养后,用50mg／L巴龙霉素筛选抗性愈伤组织,待抗性愈伤组织在IB分化培养基上分化成苗后用25mg／L卡那霉素进一步筛选再生植株, 获得了部分抗性植株。抗性植株的总DNA用DREB1A基因的特异引物进行PCR检测,转化频率为2.14％,PCR-Southern blot进一步验证了转化植株基因组中含有该外源基因。各种影响转化效率因素的优化实验表明,当转化时菌液浓度的OD600为2.0、侵染时间为1h、共培养时间为2d、共培养温度为21℃及在共培养期间使用乙酰丁香酮等,均可明显提高转化频率。     

富营养化水体对黑麦草种子萌发及幼苗生长的影响

研究了两处富营养化水体对黑麦草种子萌发和幼苗生长的影响。研究结果表明：当富营养化水体的浓度稀释为原浓度的25％时,其对黑麦草种子萌发无明显影响;浓度高时对种子萌发有抑制作用,100％浓度的抑制作用最为强烈;整个幼苗生长期间,低浓度的富营养化水体能明显促进黑麦草株高的伸长及根系的生长;75％,100％浓度不利于黑麦草地上生物量的积累;两处富营养化水体对黑麦草叶绿素的含量均有明显的促进作用且达到显著水平（P〈0．05）,说明富营养化水体中丰富的N,P元素及一些金属元素,均有利于叶绿素的合成。     

盐胁迫对废弃物载体植生带建植黑麦草生理生态的影响

盐碱土上分别铺设两种废弃物载体植生带（棉布-纱布,报纸-纱布）建植黑麦草,研究了盐胁迫对废弃物载体植生带建植黑麦草生理生态的影响．结果表明：随着盐浓度的增加,黑麦草的生长受到抑制,生物量下降,3种保护酶的活性增加,MDA含量增加．同-盐浓度下,废弃物载体植生带建植黑麦草生物量均高于直接播种建植的对照处理,保护酶的活性、MDA含量均低于对照．当盐质量分数为0．5％和0．8％时,棉布－纱布植生建坪的POD、SOD活性与对照的差异分别达到了显著水平（P〈0．05）;当盐质量分数为0．8％时,棉布－纱布、报纸－纱布植生带中黑麦草叶片中的MDA含量分别比对照降低80．76％和84．95％,差异显著（P〈0．05）．在高盐浓度下,叶绿素含量出现了较明显的增加,但植生建坪的叶绿素含量均不及对照,当盐质量浓度为O．8％时,2种不同废弃物载体植生建坪处理的总叶绿素含量与对照间差异显著（P〈O．05）．在高盐浓度下,植生建坪的相对电导率显著低于对照．综合上述结果,废弃物载体植生带建坪可以减轻盐胁迫对草坪植物带来的伤害,促进植物生长．     

拟南芥多效性基因CPR5转化水稻中花11的研究

 利用根癌农杆菌介导法将拟南芥多效性基因CPR5转化水稻中花11,同时优化了其再生体系和遗传转化体系。结果表明：相比27 ℃、暗培养,32 ℃、持续光照培养可使诱导率提高到100 %,且缩短了诱导周期;〖JP2〗预分化培养后,在附加5 mg/L 6 BA和1 mg/L NAA的分化培养基上分化率和再生率可分别达到100 %和90.50 %。同时探索了较高转化频率的条件为 A600≈ 0.05~0.1的农杆菌菌液浸染5 min,共培养时间为3 d,同时添加1张用AAI培养液浸湿的无菌滤纸。对部分转化植株进行PCR、Southern blot和半定量RT PCR检测,结果表明AtCPR5基因已经整合到水稻基因组中,在所试验的转化植株中均为单拷贝,但表达程度存在差异。