人脐静脉内皮细胞原代培养方法的建立

目的：探索并建立人脐静脉内皮细胞（删Ⅶc）体外稳定培养的方法。方法：以1％Ⅱ型胶原酶消化收集人脐静脉内皮细胞，用嘲加10％的胎牛血清进行培养，免疫细胞化学方法鉴定内皮细胞。结果：原代培养的内皮细胞镜下呈典型的铺路石或者鹅卵石样排列，3～4d时生长最快。5d左右融合；免疫细胞化学染色显示内皮细胞Ⅷ因子相关抗原表达阳性。结论：酶消化法获得的原代血管内皮细胞有较高的存活率，可以作为基础和临床研究的良好模型。     

人脐静脉内皮细胞培养液的选择

目的:筛选出人脐静脉内皮细胞(HUVECs)原代、传代最适培养液.方法:0.02%II型胶原酶灌注脐静脉消化15min获得细胞,用不同的培养液培养.24h后观察细胞贴壁状况,细胞计数法得到贴壁细胞数量;内皮细胞标志性蛋白vWF进行细胞鉴定.传代培养后,用MTT法比较不同培养液对HUVECs活力的影响.结果:用含ECGS、20%FBS的ECM组进行原代培养,可获得贴壁细胞数量最多的HUVECs,且与其他组间有显著差异;用含30ng·mL-1 VEGF165、10%FBS的M199进行传代培养,HUVECs活力较ECM组无明显差异.结论:HUVECs原代、传代培养分别选用优化后的培养液,既保证原代HUVECs的质量和数量,又使传代培养成本降低60.8%.     

“去细胞”羊膜基质与人脐静脉内皮细胞相容性的实验研究

测定“去细胞”羊膜基质（human acellular amniotic membrane，HAAM）与人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endotholica lcell，HUVEC）的相容性，为提高内皮细胞在血管支架上的粘附率提供新的途径。     

正常人脐静脉内皮细胞的原子力显微镜观察

目的:利用原子力显微镜(AFM)在单细胞水平分析正常人脐静脉内皮细胞的形貌特征和机械性质,为了解内皮细胞结构与功能的关系奠定基础.方法:新鲜人脐静脉内灌注质量分数为0.25%胰蛋白酶消化,获得人脐静脉内皮细胞(HUVECs),M199培养基进行培养,免疫细胞化学检测内皮细胞第Ⅷ因子的表达.将体外培养的HUVECs用质量...     

脐静脉内皮细胞的提取与形态学观察

目的 获取胶原酶灌注法提取脐静脉内皮细胞的有效方法.探讨内皮细胞培养过程中生长因子的添加浓度,并对内皮细胞进行形态学观察及鉴定.方法 采用血球计数法对在不同时间和不同胶原酶浓度下提取的脐静脉内皮细胞进行计数.同时采用MTT法探讨了生长因子(Endothe-lia Cells Growth Supplement,ECGS)的浓度对脐静脉内皮细胞生长的作用,并用倒置显微镜和HE染色法观察了脐静脉内皮细胞的形态,Ⅷ因子免疫组化对获取的脐静脉内皮细胞进行鉴定.结果 当提取时间为10～30 min时,随着时间的增加,内皮细胞的提取数量增加;当胶原酶的浓度为0.1%～0.3%时,消化的脐静脉内皮细胞数量逐渐增加.ECGS的浓度为30μg/mL时,促进脐静脉内皮细胞的生长,种植4天后细胞进入平台期.脐静脉内皮细胞体外培养形态为"铺路石"状.Ⅷ因子免疫组化鉴定为阳性.结论 胶原酶灌注法是一种快速而有效的获取血管内皮细胞的方法,可以为组织工程血管内皮化提供充足的种子细胞.     

鱼腥草素钠对人脐静脉内皮细胞NO合成及NOS活力的影响

目的:研究鱼腥草素钠对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)NO合成及一氧化氮合酶(NOS)活力的影响.方法:采用15μg/ml LPS作用于HUVECs,共同孵育12h建立炎性损伤细胞模型.考察不同剂量鱼腥草素钠对各组HUVECs细胞存活率、培养上清液中LDH活力、NO含量、内皮型NOS(eNOS)及诱导型NOS(iNOS)表达的影响.结果:鱼腥草素钠可明显提高HUVECs细胞存活率,增加NO的分泌与释放,提高eNOS与降低iNOS活力,从而保护脂多糖诱导的HUVECs炎性损伤.结论:鱼腥草素钠对脂多糖诱导损伤的内皮细胞具有保护作用,其机制与其促进内皮细胞NO分泌与释放,增强eNOS活性和表达,改善血管内皮功能状态相关.     

高迁移率族蛋白1对脐静脉内皮细胞迁移及相关蛋白表达的影响

【目的】组织工程中微循环的建立在生物材料植入中发挥重要作用,其中血管内皮细胞迁移是快速血管生成的主要影响因素。组织和器官损伤后常引发炎症反应,高迁移率族蛋白1(HMGB1)是炎症反应的起始因子,但对内皮细胞迁移的影响尚不清楚。【方法】体外提取和培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),并进行细胞表型鉴定;构建培养液中含有HMGB1的浓度梯度,通过CCK-8、划痕实验和Transwell小室实验检测HUVECs的增殖能力和迁移能力,采用RT-qPCR和Western Blot检测细胞内细胞增殖因子和迁移因子基因和蛋白的表达情况。【结果】不同浓度HMGB1对HUVECs的增殖能力无显著影响,但对细胞迁移能力有浓度依赖性,随着HMGB1浓度增加,细胞的迁移能力增强。FGF-2表达随HMGB1浓度增加表达上调;高浓度HMGB1处理HUVECs后,VEGFA表达明显下降。【结论】HMGB1可通过FGF-2促进HUVECs迁移,为今后HMGB1对内皮细胞迁移能力的影响研究提供依据。     

淋巴结转移数目在结直肠癌预后判断中的意义

目的 :AJCC/ UICC TNM分期公布已 13年 ,国际上已得广泛应用 ,但国内至今未见用引分期文献报道。这种分期也不太严谨 ,未规定淋巴结检查数目和每枚淋巴结切片数。因此 ,研究结直肠癌淋巴结转移 (L NM)数目与预后的关系可弥补其不足。方法 :用自制的病理检查规范检查结直肠癌的淋巴结 ,分期采用AJCC/ U ICC TNM系统 ,同时作 Dukes分期 ,比较两种分期。结果 :76例共查淋巴结 3885枚 ,每例平均 5 1.5 2± 2 3.15枚。 4 3例有 L NM,L NM率为 5 6 .5 8%。N1 和 N2 病例 5年生存率有高度显著差别。L NM≥ 10枚和/或顶端、主干血管旁 L NM病例的预后极差。结论 :AJCC/ UICC TNM分期优于 Dukes分期 ;AJCC/ UICCTNM分期也有不足 ;提出一新的结直肠癌分期     

nm23转移抑制基因表达在结直肠癌淋巴结转移中的意义

人类肿瘤转移抑制基因nm23定位于17号染色体,有H_1和H_2两个亚型,编码17KD蛋白质,氨基酸排列顺序与二磷酸核苷激酶(NDPK)高度同源。已发现nm23基因的等位基因缺失,突变和低表达与多种人类肿瘤转移相关。nm23基因产物的表达与结直肠癌转移的关系及意义尚无一致意见。本文以结直肠癌根治性手术后全数淋巴结检查为基础(平均每例46.25个),应用S—P技术检测20例结直肠癌nm23基因产物的表达情况。结果表明,nm23基因产物的表达与淋巴结转移个数之间呈明显负相关(r=-16.58,P<0.01);而在有无淋巴结转移之间,差异无显著性(P>0.05)。我们认为:结直肠癌有淋巴结转移时,nm23基因产物的表达情况有助于判断转移的程度,而对估计有否淋巴结转移多方面的意义不大。     

HIF-1α表达对人乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响

为研究缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性,采用在培养基中加入CoCl2模拟化学缺氧培养细胞,RT—PCR和Western-blot、免疫细胞化学检测HIF-1α在人乳腺癌细胞MCF-7和MDA—MB-231中mRNA水平和蛋白质水平在缺氧前后的表达差异,及Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测缺氧前后两株细胞侵袭迁移能力的改变．结果发现：缺氧后,两株细胞的HIF-1α mRNA水平和蛋白质水平均较缺氧前增高（p〈0．01）,MDA—MB-231和MCF-7之间有显著差异（p〈0．01）;MDA—MB-231的侵袭转移能力明显增加（p〈0．01）,MCF-7的侵袭转移能力略有增加（p〈0．05）．表明缺氧上调HIF-1α转录及蛋白表达,进而促进乳腺癌细胞的侵袭转移能力．     

结直肠癌中肿瘤出芽判断淋巴结转移的价值

目的:研究结直肠癌中肿瘤出芽判断淋巴结转移的价值.方法:2004年1月2007年12月有完整淋巴结病理学资料的结直肠癌手术患者92例,全数淋巴结检查,参照Ueno等的研究判断肿瘤出芽.结果:本组92例共切除淋巴结3036枚,平均每例取约33枚,92例结直肠癌中有47例出芽.肿瘤出芽与淋巴结转移的程度(pN分期)、肿瘤浸润深度呈显著性相关.肿瘤出芽对预测结直肠癌淋巴结转移的灵敏度、阴性预测值分别为90.91%和91.11%.结论:通过HE染色,镜下检测结直肠癌中肿瘤有无出芽来判断局部淋巴结转移,有助于快速确定结直肠癌患者局部淋巴结转移的状况,对及时辅助治疗具有实用价值.     

MVD及VEGF表达与鼻咽癌侵袭转移关系的研究

为探讨微血管密度（ＭＶＤ）及血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达与鼻咽癌（ＮＰＣ）侵袭转移关系,在分子水平干预肿瘤血管生成,预防ＮＰＣ复发和转移打下基础,采用免疫组织化学Ｓ－Ｐ法检测了７３例ＮＰＣ,１５例鼻咽良性肿瘤、２０例无瘤鼻咽部石蜡标本组织中的ＭＶＤ及ＶＥＧＦ表达,ＮＰＣ中转移组４９例,非转移组２４例。     

结直肠癌肝转移动物模型研究进展

肝脏是结直肠癌转移最主要的靶器官,结直肠癌肝转移也是结直肠癌患者死亡的主要原因。目前,结直肠癌肝转移动物模型构建的方法主要包括原位种植模型,用于研究结直肠癌发生肝转移过程及其相关机制;异位种植模型,用于评价各种治疗方案;异种种植模型,用于对患者个体化治疗方案的筛选;转基因动物模型用于准确地引导患者进行靶向治疗。     

整合素在肝癌细胞侵袭和转移中的作用

癌细胞与细胞外基质（ECM）的粘附是恶性肿瘤侵袭首要步骤。肿瘤细胞与细胞外基质的粘附是通过细胞膜表达的特异受体介导的，其中整合素家族为重要的粘附分子。对整合素表达相关的细胞外基质的介绍及肝癌细胞侵袭与转移中整合素研究的综述，可了解相关的整合素所介导肝癌细胞与细胞外基质、肝癌细胞之间的相互作用。文中提及肝癌细胞趋化运动中相关的整合素，有助于进一步了解整合素在肝癌侵袭与转移中的作用。整合素参与了整个肝癌细胞的侵袭转移过程，寻找出干扰整合素与配体相互作用、特异性增加或减少整合素在肿瘤中的表达的物质，从而阻断肿瘤的侵袭与转移，对抗癌药物的研究有着深远的影响。     

小凹蛋白-1和钙受体在人的脐静脉内皮细胞的表达

为探讨人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中小凹蛋白-1与细胞外钙受体表达及定位,为进一步功能研究提供理论依据,采用Western-blot和Rt-PCR及免疫荧光技术检测HUVEC中小凹蛋白-1与细胞外钙受体mRNA和蛋白表达及定位.结果显示:(1)形态学观察和免疫细胞化学法测Ⅷ因子抗原,95%以上的细胞呈阳性着色,证实细胞为HUVEC.(2)RT-PCR检测到HUVEC中459bp和260bpmRNA表达,Western-blot测到HUVEC中22KD和150-160KD蛋白表达.(3)免疫荧光检测到小凹蛋白-1与细胞外钙受体定位于人脐静脉内皮细胞膜.由此可知,人的HUVEC中有小凹蛋白-1与细胞外钙受体表达,两者是否共定位及其功能有待进一步研究.     

桦树皮提取物抑制血管生成作用的研究

研究桦树皮提取物对血管生成的抑制作用.应用MTT法检测桦树皮提取物对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制作用,采用Realtime PCR方法检测桦树皮提取物对人脐静脉内皮细胞中VEGFmRNA表达的影响,应用ELISA测定细胞上清液中VEGF的分泌情况.实验表明,桦树皮提取物能显著抑制人脐静脉内皮细胞增殖,最高浓度150 μg/mL其抑制率达48.4%,能明显抑制人脐静脉内皮细胞内VEGFmRNA的表达及VEGF分泌.结果表明桦树皮提取物可通过抑制细胞内VEGF mRNA的表达及VEGF的分泌有效抑制人脐静脉内皮细胞的增殖.     

结直肠癌中肿瘤出芽与淋巴结分期及预后的关系

目的：研究结直肠癌中肿瘤出芽与淋巴结分期及预后的关系.方法：2004年1月-2009年12月有完整淋巴结病理学资料的结直肠癌手术患者112例,全数淋巴结检查,参照Ueno等的研究判断肿瘤出芽.结果：本组切除淋巴结3 809枚,平均每例取约34枚,112例结直肠癌中有51例出芽.肿瘤出芽与淋巴结转移的程度呈显著性相关.无...