酵母甘露聚糖乙酰解产物的制备和分析

从啤酒酵母(Saccnaromyces Cerevisiae)中提取甘露聚糖Sp_1。将Sp_1进行选择性(2.5hr,5hr)乙酰解反应,经冷冻干燥得乙酰解产物Sp_1 2.5和Sp_1 5。通过Sephadex G-50柱层析、醋酸纤维薄膜电泳、红外光谱法、比旋光度测定等方法分析其理化性质。Sp_1 2.5和Sp_1 5在3400cm~(-1)、2900cm~(-1)、2300cm~(-1)、1600cm~(-1)、1000cm~(-1)左右有多糖的特征吸收峰。     

酵母甘露聚糖乙酰解产物的制备和分析

从啤酒酵母(Saccnaromyces Cerevisiaesiae)中提取甘露聚糖Sp1,将Sp1进行选择性（2.5hr,5hr)乙酰解反应，经冷冻干燥得乙酰解产物Sp1 2．5和Sp15。通过Sephadex G-50柱层析、醋酸纤维薄膜电泳、红外光谱法、比旋光度测定等方法分析其理化性质。Spl2．5和Sp1 5在3400cm^-l、2900cm^-1、2300cm^-1、1600cm^-1、1000cm^-1左右有多糖的特征吸收峰。     

从酵母中提取新型保鲜剂--海藻糖的工艺研究

海藻糖是一种具有广阔应用前景的生物保护剂,提出了一条从啤酒厂废酵母中提取海藻糖的工艺路线。通过抑制酶的活性,采用活性炭脱色,阴阳离子交换除杂和脱色,最后经浓缩,结晶和干燥,制成海藻糖产品。     

脱脂咖啡渣中甘露聚糖含量的测定

以Ｄ－ 甘露糖为标准，ＤＮＳ作显色剂，用分光光度法间接测定脱脂咖啡渣中甘露聚糖的含量．结果表明：它在４９２ ｎｍ 处有最大吸收峰，测定标准回收率高，相对误差小，重现性好．该法操作简单，效果良好，适用于测定各种类型脱脂咖啡渣中甘露聚糖的含量．     

毕赤酵母表达猪胃蛋白酶的研究

利用已有的猪胃蛋白酶原A cDNA,构建毕赤酵母pPIC3．5K—pA胞内表达载体．经纤维蛋白消化试验和干酪素琼脂平板法筛选,获得2株高表达的重组子,并研究了在不同pH、不同诱导时间、不同起始浓度和甲醇诱导浓度等条件下表达水平的高低．结果表明：在pH7、诱导72h、起始诱导浓度为OD600为2、甲醇诱导浓度为1％时,重组胃蛋白酶活力最高,达到6．46U／mL．     

浸泡预处理提取伊朗蒿精油及其对毕赤酵母的抑制作用研究

目的:研究浸泡预处理提取伊朗蒿精油的最佳条件及精油的抑菌效果.方法:采用浸泡预处理,并试用不同的条件对精油进行提取,同时采用滤纸片扩散法来检测精油对于毕赤酵母生长的抑制作用.结果:浸泡预处理提取伊朗蒿精油的最佳工艺是料液比为1∶15;浸泡预处理24h后回流5h,得到的精油量为12.0ml/kg.结论:伊朗蒿精油对于毕赤酵母的生长具有明显的抑制作用.     

人溶菌酶的双水相萃取法分离

采用双水相体系直接从重组巴氏毕赤酵母发酵上清液中分离人溶菌酶,研究了体系中聚乙二醇(PEG)平均分子量,PEG、硫酸钠和氯化钠浓度,pH对人溶菌酶和总蛋白的分配系数、相体积比、萃取率和纯化因子的影响。结果表明:在PEG 4000、N a2SO4和N aC l质量分数分别为0.08、0.13、0.06,pH为5.6时,在室温下的双水相萃取率达96.63%,纯化因子为6.5。     

重组毕赤酵母细胞壁蛋白的抽提和分析

建立稳定有效的细胞壁蛋白(CWPs)抽提方法,是开展毕赤酵母细胞壁蛋白质组学及甲醇代谢调控相关性研究的基础.为此,以具重组非共价结合壁蛋白Flo1p絮凝素的酵母GS115/KFS-CALB、具共价结合壁蛋白α凝集素的酵母GS115/KNS-CALB和具重组共价结合壁蛋白Pir1的酵母GS115/Pir1-CALB为对象,用热十二烷基磺酸钠(SDS)、昆布多糖酶、氢氟酸吡啶和温和碱水解对上述壁蛋白进行抽提,结果表明:3种壁蛋白已成功地展示于毕赤酵母细胞壁的表面;用这3种毕赤酵母锚定蛋白展示脂肪酶,对细胞的生长状况影响不大,而对展示酶的表达量影响较大,GS115/KFS-CALB、GS115/KNS-CALB和GS115/Pir1-CALB的脂肪酶水解比酶活最高达855.02、1239.40和210.47 U/g(以干细胞计);热SDS可有效抽提GS115/KFS-CALB上的Flo1p絮凝素,昆布多糖酶和氢氟酸吡啶可释放GS115/KNS-CALB上的α凝集素,而昆布多糖酶和温和碱可释放GS115/Pir1-CALB上的Pir1.     

荠菜总黄酮的提取工艺条件研究

利用超声波辅助法,选择4个考察因素对荠菜总黄酮进行提取,采用500 nm检测波长测定提取液中总黄酮的含量,通过单因素和正交试验法确定荠菜中总黄酮的最佳提取工艺条件:溶剂为70%的乙醇,料液比为1∶5,温度为50℃,时间为30 min。在最佳工艺条件下,超声辅助法提取荠菜总黄酮提取率达1.35%。超声辅助提取具有省时、节能、高效等优点,适合工业化生产。     

克鲁维酵母中外切菊粉酶基因在毕赤酵母中的表达研究

用PCR的方法从克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)ATCC12424中克隆出外切菊粉酶基因.将该基因克隆到毕赤酵母表达载体pHBM905C、pHBM906上,构建了外切菊粉酶毕赤酵母表达载体pHBM1200、pHBM1201.将两者转化毕赤酵母GS115,得到重组菌株GS115(pHBM1200)、GS115(pHBM1201),将这两种重组菌株进行摇瓶发酵,测得带α-信号肽的菌株GS115(pHBM1200)表达的外切菊粉酶最高酶活为89.43 U/mL,带自身信号肽的菌株GS115(pHBM1201)表达的外切菊粉酶最高酶活为14.828 U/mL.SDS-PAGE电泳表明,外切菊粉酶的表观分子量为90 kD.将外切菊粉酶用去糖基化酶endoH处理后,SDS-PAGE电泳表明,分子量为60 kD,和预计的分子量一致.     

蛇神经毒素在毕赤酵母中的分泌表达及其分离纯化

文中主要研究了毕赤酵母基因工程菌的构建及其发酵表达产物蛇神经毒素的分离纯化条件。蛇神经毒素编码基因由本实验室设计、合成，并重组构建成表达质粒pPIC9k-hPK。经电穿孔将该质粒转化毕赤酵母GS115 (His-Mut+)，筛选His+Muts型菌株，经诱导表达，产物进行SDS- PAGE电泳鉴定，相对分子质量与理论值一致，目标蛋白经小试发酵产量可达350mg/L。利用超滤、离子交换树脂及分子筛分离纯化，产物经高效液相色谱(HPLC)分析纯度达92%。     

废旧PVC塑料制备PVC沥青的研究

以废旧聚氯乙烯(PVC)塑料为原料,采用两阶段恒温法制备PVC沥青,通过正交实验,确定制备PVC沥青的最优条件.采用热重分析、红外光谱分析和软化点分析等测定结果,初步分析PVC沥青的形成机理.研究结果表明,对于所选择的废旧PVC塑料,第一恒温阶段主要是通过热解脱除氯化氢阶段,该阶段的最佳温度为270℃,最佳恒温保持时间为150 min,在此条件下废旧PVC塑料的HCl脱除率可高达95%.在第二恒温阶段中,脱HCl后的PVC中C=C烯烃链段结构被破坏,经氧化、交联、重整,重新形成脂肪族、芳香族类物质.该阶段的最佳温度为410℃、保持时间以120 min为宜.     

重组毕氏酵母发酵过程的结构模型

分析了毕氏酵母（Pichia pastoris)以甘油和甲醇为碳源时的代谢途径，建立了胞内物质流和能量流的平衡方程－结构模型。经过适当的降维，解得比碳源消耗速率，比氧消耗速率，比乙酰辅酶A生成速率，细胞比生长速率等关键反应速率。结合反应器模型获得操作变量与过程状态变量间的关系。用实验数据对模型进行了初步验证。结果表明，该模型能较准确地描述细胞生长和重组蛋白合成过程。     

α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的组成型表达

为避免α-葡聚糖造成的制糖过程中的糖分损失、制炼难度增加以及糖产品质量下降,利用α-葡聚糖酶分解而直接去除α-葡聚糖是目前最佳的选择.文中扩增了α-葡聚糖酶基因dex,构建组成型表达载体pGAPZαA-dex;以毕赤酵母KM71H为受体菌,将表达载体整合进入受体菌基因组,构建了组成型表达α-葡聚糖酶的毕赤酵母工程菌.摇瓶发酵120h,α-葡聚糖酶酶活达到60.4U/mL,从而实现了α-葡聚糖酶在毕赤酵母中的组成型表达,使发酵过程无需使用甲醇进行诱导,提高了生产和使用安全性.     

表达人胰岛素前体的毕赤酵母菌株的构建

将人胰岛素前体 (HIP)基因插入到毕赤酵母Pichiapastoris的分泌表达质粒pPIC9K中,得到分泌表达质粒pPIC9K/HIP并用电转化法转化P.pastorisGS115。筛选出整合型His⁺Mut^s 菌株,进一步用G418筛选获得高拷贝转化子。经诱导培养后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)证明HIP在毕赤酵母中能有效分泌表达。对毕赤酵母中外源基因的稳定性进行了研究,结果表明外源基因在毕赤酵母中很稳定.