靶向bcl-2基因siRNA-2提高急性原代白血病细胞对高三尖杉酯碱敏感性

目的:研究以bc l-2基因为靶标有效siRNA-2(sm all interference RNA)能否提高急性原代白血病细胞对高三尖杉酯碱(HT)敏感性。方法:将siRNA转入原代白血病细胞并与HT联合培养,于24、48、72 h,用苔盼蓝拒染法计数活细胞,用免疫细胞化学技术检测原代白血病细胞Bc l-2和P53蛋白的表达。结果:siRNA-2(1μmol/L)与HT组(0.2μmol/L)联合作用,在72 h内均能显著降低原代白血病细胞存活,细胞数从3×105/mL下降到1.2×105/mL左右;显著抑制Bc l-2和P53蛋白的表达,Bc l-2和P53蛋白表达率下降到对照的1/2左右。结论:siRNA-2能提高原代白血病细胞对HT敏感性。     

重组腺病毒Canstatin对人肝癌HepG2细胞增殖影响的研究

为研究重组腺病毒Canstatin感染人肝癌HepG2细胞及细胞转染后Canstatin在HepG2细胞中的表达,探讨Canstatin基因对人肝癌HepG2细胞生长增殖的影响。采用不同感染复数(MOI=10、40、80)的腺病毒Ad-Canstatin-GFP感染HepG2细胞,倒置荧光显微镜下观察细胞形态,流式检测感染效率,Real-Time PCR和Western blot法检测HepG2细胞中Canstatin mRNA和蛋白表达。CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,Western blot法检测细胞中PCNA蛋白的表达。结果显示MOI为40时,72 h感染率可达到98.9%,HepG2细胞中Canstatin mRNA和蛋白表达均高于对照组和空载体组(P0.05)。HepG2细胞感染Ad-Canstatin腺病毒后生长增殖受到抑制(P0.05),且PCNA的表达低于对照组(P0.05)。由此可知,Canstatin抑制人肝癌HepG2细胞的生长增殖有作用可能与影响PCNA的表达有关。     

高三尖杉酯碱对白血病细胞分化和肿瘤转移的影响

为研究高三尖杉酯碱（Ｈｏｍ）对白血病细胞分化和肿瘤转移的影响．采用四氮唑蓝法检测ＨＬ－６０细胞的分化及测定游离磷含量观测肿瘤细胞Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶和Ｍｇ＋＋－ＡＴＰ酶活性．肿瘤转移模型采用小鼠皮下接种Ｌｅｗｉｓ肺癌观测肺转移灶数和小鼠足跖接种Ｐ３８８白血病细胞观察动物生存期,且用γ射线测定法评价１２５Ｉ－纤维蛋白原与肿瘤细胞的结合能力．结果显示Ｈｏｍ１．５～４．５μｇ／Ｌ能诱导ＨＬ－６０细胞分化,Ｈｏｍ０．１μｍｏｌ／Ｌ２４ｈ对Ｆｒｉｅｎｄ白血病细胞Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性抑制,对Ｍｇ＋＋－ＡＴＰ酶活性无影响,Ｈｏｍ０．５～１．５ｍｇ·ｋｇ－１／ｄ剂量下能抑制Ｌｅｗｉｓ癌肺转移和Ｐ３８８白血病细胞淋巴道转移,以及Ｈｏｍ２～１０ｍｇ／Ｌ抑制纤维蛋白原与癌细胞的结合．提示Ｈｏｍ能通过以上途径诱导肿瘤细胞分化和抗肿瘤转移     

三尖杉酯碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c myc和bcl 2基因的表达并且与细胞周期密切相关 .初步探讨其凋亡诱导的机制 ,认为HT通过在G1和G2 期下调细胞凋亡抑制基因bcl 2的诱导凋亡 ,以及下调c myc癌基因阻滞细胞增殖 ,并延迟凋亡发生 .这些结果对于了解HT的药物作用机制和提高临床化疗疗效具有重要意义 .     

裙带菜岩藻黄素的提取分离及对人肝癌细胞HepG2的抑制作用研究

以裙带菜为原料对岩藻黄素的提取分离工艺进行改进,并对岩藻黄素体外抑制人肝癌细胞HepG2生长进行初步研究.通过对干燥温度、溶剂配比、提取剂用量和提取时间的筛选,结果显示:采用95:5(体积比)的丙酮乙醇混合提取液、1:40(质量体积比)提取剂用量、粗提冷冻干燥处理的裙带菜,抽提24 h,提取3次,1 g干燥裙带菜可提取1.201 2 mg岩藻黄素,纯化效率为28.50％;将粗提液中的色素转移至正己烷中,采用浓度为70％的乙醇溶液萃取出的岩藻黄素含量为0.847 2 mg,纯化效率为85.89％;用薄层层析进一步纯化,岩藻黄素的含量为0.593 0 mg,纯化效率为98.90％;人肝癌细胞HepG2体外培养试验表明:当岩藻黄素浓度达到50 μg·mL-1时,抑制率达到28.44％.     

紫甘薯花色苷对人肝癌细胞HepG2的作用

以人肝癌细胞HepG2为模型研究紫甘薯花色苷的抗肿瘤活性.通过MTT实验检测紫甘薯花色苷对HepG2细胞的生长抑制作用,HE染色观察细胞形态,流式细胞仪测定细胞周期变化.MTT结果表明,不同浓度的紫甘薯花色苷处理HepG2细胞24、48、72,h后,低浓度的紫甘薯花色苷促进肿瘤细胞的生长,高浓度的紫甘薯花色苷抑制肿瘤细胞的生长,800,μg/mL花色苷处理72,h抑制率高达80%.HE染色结果表明,正常HepG2细胞的细胞核和细胞质清晰可见,而加入花色苷后,出现细胞核固缩、染色质浓集于核膜表面、形成新月形致密小斑块、细胞膜形态变得不规则等凋亡的特征.流式细胞仪分析结果表明,花色苷能够促进肿瘤细胞的凋亡,且细胞的凋亡率随花色苷浓度的增加而增大.     

枸杞叶中总黄酮对人肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响

研究枸杞叶中总黄酮对体外培养的人肝癌细胞HepG2增殖抑制及其细胞凋亡的影响.用不同质量浓度的枸杞叶总黄酮作用于体外培养的人肝癌细胞HepG2,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测HepG2细胞存活率,通过Hoechst33258染色法、AV/PI双染流式细胞术检测HepG2细胞凋亡情况,利用免疫细胞化学法、Western blot方法分析枸杞叶中总黄酮对HepG2细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达的影响.结果表明,枸杞叶中总黄酮分别作用于人肝癌细胞HepG2 48,72h均可明显抑制其增殖,并呈现显著的时间、剂量依赖性.高质量浓度枸杞叶总黄酮作用人肝癌细胞HepG2 48h后,HepG2细胞呈现出典型的细胞凋亡特征,凋亡率达67.3%.枸杞叶总黄酮作用于HepG2细胞一定时间后,可引起促凋亡蛋白Bax、Caspase-3的表达上调.枸杞叶中总黄酮可明显抑制人肝癌细胞HepG2增殖和诱导细胞凋亡,其作用机制可能是通过有效上调促凋亡蛋白Bax,破坏细胞内稳态环境,继而激活凋亡蛋白Caspase-3,最终引发人肝癌细胞HepG2凋亡.     

粉防己碱逆转人早幼粒白血病HL60而药细胞对三尖杉…

无细胞毒性浓度的粉防己碱，明显地增强三尖杉酯碱对人早幼粒白血病ＨＬ６０耐药细胞的生长抑制作用，降低集落形成率，但对敏感ＨＬ６０细胞没有增强作用，ＤＰＨ荧光标记法测定表明，粉防己碱对细胞膜流动性没有影响。     

硫酸长春新碱对肝癌细胞HepG2抑制作用

通过体外实验观察长春新碱对人体肝癌细胞增殖的影响效果.通过MTT比色法检测药物在不同时间和不同质量浓度条件下对细胞增殖的抑制作用.结果显示,24、48 h作用效果不理想,在72 h从质量浓度0.031 25μg/mL开始的长春新碱能造成对人体肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用,达到8μg/mL时抑制效果基本达到最大.实验表明,长春新碱对人体肝癌细胞的增殖有比较明显的抑制作用,是一种效果较高,毒性较低,需要作用时间较长的化疗药.     

赤参水提物对人肝癌细胞株HepG2细胞的影响

探讨了赤参水提物对人肝癌细胞株HepG2细胞的影响.采用体外培养的人肝癌细胞HepG2细胞株,接种入96孔板,24 h后加入赤参水提物,MTT(methyl thiazolyl tetrazolium)法,计算肝癌细胞生长存活率;Acridine orange/ethylene dibromide(AO/EB)荧光染色法,检测细胞形态学变化;RT-PCR法检测细胞Bcl-2、Bax、p53基因表达变化.结果表明,赤参水提物可剂量-时间依赖性地抑制HepG2细胞增殖;1.0 mg/mL赤参水提物处理HepG2细胞24 h后,细胞荧光染色出现了明显的凋亡细胞;赤参水提物处理HepG2细胞后,Bcl-2 mRNA表达量剂量依赖性地减少,而Bax和p53 mRNA表达量剂量依赖性地增加.     

RAPD法探究百草枯对HepG2细胞基因组稳定性的影响

目的:探讨百草枯(PQ)处理对HepG2细胞基因组稳定性的影响.方法:采用随机扩增多态性DNA(RAPD)标记技术,选取20种随机引物分析PQ处理24h对HepG2细胞基因组稳定性的影响.结果:引物5’-GGAAGTCGCC-3’、5’-ACGCGCATGT-3’和5’-GAATCGGCCA-3’的扩增产物在正常组与7.21、10.67、15.78、22.36和34.57mg/L的PQ处理组间有较明显差异.其中,引物5’-GGAAGTCGCC-3’的2种扩增产物(约2 200和2 600bp)在所有PQ处理组均缺失;引物5’-ACGCGCATGT-3’的2种扩增产物(约250和1 200bp)在高于7.21mg/L的PQ处理组均发生缺失,1种扩增产物(约1 500bp)在34.57mg/L的PQ处理组发生缺失,另有2种扩增产物(约400和550bp)在34.57mg/L的PQ处理组含量较低;引物5’-GAATCGGCCA-3’有2种扩增产物(约900和1 900bp)在全部PQ处理组均缺失,另2种扩增产物(约530和560bp)新出现在各PQ处理组.结论PQ处理会破坏HepG2细胞基因组的完整性和稳定性.     

HA纳米颗粒对HepG2细胞冷冻干燥效果的影响

针对纳米颗粒对细胞冷冻干燥的影响进行研究。将不同质量浓度的羟基磷灰石(HA)纳米颗粒(质量浓度分别为0,0.1,0.3,0.5,0.7,1,5 g/L)添加到冻干保护剂中,研究其对HepG2细胞冷冻干燥效果的影响,结果显示:当保护剂中纳米颗粒质量浓度为0.5 g/L时,细胞的冻干效果最好,复水后细胞的回收率为37.39%,存活率为62.02%(P0.05);但是当纳米颗粒质量浓度高于0.5 g/L,对细胞具有较大损伤,显著降低细胞的24 h贴壁率。研究表明:添加适当浓度的纳米颗粒可以保护细胞,若纳米颗粒浓度过高,则会起到相反的作用;HA纳米颗粒冻干保护剂作用于冷冻、升华过程,在复水过程不起作用。     

荭草素和异荭草素抗氧化活性及对肝癌细胞增殖的影响

采用荭草素和异荭草素标准品，通过测定两者对DPPH·、ABTS+·、H2O2、·OH自由基的清除率，脂质过氧化，Cu2+/H2O2诱导的牛血清蛋白-BSA-和DNA氧化损伤及BSA蛋白羰基化的抑制作用来评价二者的抗氧化活性，另外用MTT法评价了二者对人肝癌-HepG2-细胞生长的影响. 结果表明，荭草素和异荭草素均可清除自由基，抑制脂质过氧化、BSA和DNA氧化损伤和BSA羰基化，且一定浓度范围内异荭草素的抗氧化活性强于荭草素；另外荭草素和异荭草素可显著抑制HepG2细胞增殖，并呈浓度和时间依赖性，且异荭草素的抑制率高于荭草素，说明异荭草素是优于荭草素的有抗癌功效的天然抗氧化剂.     

P-5m八肽对肝癌HepG2细胞中MMP-2和MMP-9表达的抑制作用

目的探讨P-5m八肽对肝癌HepG2细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,以及P-5m八肽的抗肿瘤作用机制.方法用终浓度为10μmol/L和100μmol/L的P-5m八肽分别对处于对数生长期的HepG2细胞进行处理,药物作用时间为36 h,36 h后将细胞裂解.采用Real-time PCR方法检测给药后细胞中MMP-2和MMP-9 m RNA表达水平的变化;Western blot方法测定MMP-2和MMP-9蛋白表达水平的变化.结果Real-time PCR检测显示终浓度为10μmol/L和100μmol/L的P-5m八肽对HepG2细胞刺激后,MMP-2和MMP-9的m RNA表达均受到抑制,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05);Western blot检测结果表明:用10μmol/L和100μmol/L的P-5m八肽对HepG2细胞刺激后,MMP-2和MMP-9的蛋白表达均受到抑制,与对照组比较差异具有统计学意义(P0.05).结论 P-5m八肽可明显抑制HepG2细胞中MMP-2和MMP-9的表达.     

龙葵碱对HepG2细胞内[Ca2+]i的影响

探讨龙葵碱对HepG2细胞形态及细胞内[Ca~(2 )]i的影响,揭示龙葵碱诱导细胞凋亡的机制.以人肝癌细胞HepG2为研究对象,采用AO/EB双染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞形态学改变,Fluo-3/AM单染HepG2细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞内[Ca~(2 )]i的改变.结果发现龙葵碱作用于HepG2 48h后,细胞形态出现典型的细胞凋亡形态;细胞内[Ca~(2 )]i浓度明显升高.表明龙葵碱升高细胞内Ca~(2 )浓度启动细胞凋亡机制.     

单细胞凝胶电泳技术检测甲醛对人肝癌细胞HepG2的遗传毒性效应

为了探讨甲醛对人肝癌细胞HepG2的遗传毒性效应,该实验以体外培养的HepG2细胞作为实验材料,运用单细胞凝胶电泳（SCGE）技术分析不同浓度甲醛处理2 h后HepG2细胞DNA损伤效应.结果显示,低浓度（5,25μmol/L）甲醛处理后HepG2细胞尾部DNA百分率（tail DNA%）及彗星状拖尾（comet tail）尾长显著增加,并呈剂量-效应依赖性关系,说明低浓度甲醛具有致HepG2细胞DNA链断裂（DNA strand breakages）作用;而较高浓度（125,625μmol/L）甲醛处理后HepG2细胞尾部DNA百分率及彗星状拖尾尾长则以剂量依赖性方式显著降低,提示较高浓度甲醛具有致HepG2细胞DNA-蛋白质交联物（DNA-protein cross-links,DPXs）形成作用.     

龙葵碱对HepG2细胞NAT1酶活性的影响

探讨龙葵碱对HepG2人肝癌细胞的N-乙酰基转移酶1(NAT1)酶活性的影响.采用高效液相色谱法(HPLC),以对氨基苯甲酸(PABA)为底物,以PABA被NAT1乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸(Ac-PABA)的量反应NAT1酶的活性.观察不同质量浓度、不同时间龙葵碱对完整HepG2细胞NAT1酶活性的影响;龙葵碱对HepG2细胞细胞质中NAT1酶活性的影响.结果表明,在NAT1酶活性测定中,龙葵碱能显著降低HepG2完整细胞NAT1的活性;龙葵碱能够降低HepG2细胞质内NAT1的活性,且作用具有剂量依赖性;随着时间的增加NAT1转化产物的量逐渐增加,但龙葵碱能显著降低同一时段NAT1的活性.提示龙葵碱通过抑制HepG2细胞中NAT1的活性是龙葵碱抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用机制之一.