翘嘴鳜肝肾坏死症免疫预防的研究

用福尔马林,酚分别灭活的病原菌ＬＫ－４两种菌苗及粗脂多糖（ＬＰＳ）作为抗原,分别免疫注射翘嘴鳜５周后,检测了受免和对照鱼体的血清凝集抗体效介,血液中白细胞的吞噬活性,杀菌活性,免疫血清对吞噬细胞活性的调理指数,并进行了人工攻毒试验。毒力攻击的结果表明,３组受免鱼中,以ＰＫＣ组获得的免疫保护力最高,达９４．４％,其次为ＬＰＳ组,达８８．９％,ＦＫＣ组为７７．８％,而对照组仅有１０％的存活率。     

翘嘴鳜口服免疫效果的初步观察

将翘嘴鳜“肝肾坏死症”病原菌经福尔马林灭活的菌苗注射饵料鱼后,投喂翘嘴鳜,连续１４ｄ。于投喂结束２１ｄ后,通过检测受免鱼和对照鱼血清,体表和肠粘液中凝集抗体效价和血液中白细胞的吞噬活性,证实了口服免疫接种能使翘嘴鳜产生特异性免疫应答。     

翘嘴鳜的人工繁殖与胚胎发育观察

采用不同配伍外源激素对性成熟翘嘴鳜催情,发现:20～24°C下,催产素PG+LRH-A+HCG的效应时间更短;25～29°C下,则催产素PG+HCG效应时间更短。采用人工受精的方法获得受精卵,在水温18～22°C观察翘嘴鳜胚胎发育的时序和特点,从受精卵发育到破膜仔鱼经过了68h17min;翘嘴鳜胚胎发育可分为7个阶段26个时期。文章还详细记录了翘嘴鳜胚胎发育各个阶段的形态特征。     

翘嘴鳜淀粉酶基因SNPs和微卫星位点多态性的检测

本研究主要检测翘嘴鳜淀粉酶(amylase,AMY)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)和微卫星位点多态性.实验采用PCR产物直接测序法(PCR-direct sequencing,PCR-DS)检测翘嘴鳜AMY基因组序列的SNPs和微卫星位点,并使用创造限制酶切位点PCR法(created restriction sites PCR,CRS-PCR)和PCR-DS法对SNPs进行分型,应用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测AMY基因微卫星位点的多态性.实验结果发现AMY基因第1内含子有一个SNP位点A1,第5内含子有3个SNPs位点(A2、A3和A4);此外,第5内含子中还存在一个微卫星位点B1,共检测到4个等位基因,有9种单倍型.在翘嘴鳜群体中,4个SNP位点呈中度遗传多样性,而微卫星位点表现出高度遗传多样性.     

翘嘴鳜髓过氧化物酶基因克隆及重链序列的原核表达

利用RT PCR和RACE PCR方法,从翘嘴鳜中克隆出髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）cDNA全长。其开放阅读框有2?292个核苷酸,编码763个氨基酸的蛋白。虽然序列相似性分析发现该蛋白与哺乳动物MPO相似性为64%～65%,但分子质量大小相近。翘嘴鳜含有1个与人MPO相似的血红素基,1个保守的Ca2+结合位点,6个分子内二硫键,以及6个糖基化位点。由此推测翘嘴鳜MPO蛋白的空间结构及催化机制可能与哺乳动物的相似。将翘嘴鳜MPO的部分DNA序列连接到pET 32a c(+)载体上,成功构建了1个重组表达质粒pET MPO,该质粒在大肠杆菌（DE3）中获得了高效表达。另外,利用重组蛋白N末端带有的6×His标签,通过Ni2 NTA柱纯化获得了翘嘴鳜MPO重组蛋白。     

翘嘴鳜线粒体基因组全序列的克隆与特征分析

通过直接测序的方法获得翘嘴鳜线粒体DNA基因组全序列(GenBank:JF972568).翘嘴鳜线粒体基因组全长为16 496 bp,其包含13个编码蛋白基因、22个tRNA基因、2个rRNA基因和1个Control region区域.整个翘嘴鳜线粒体DNA利用率非常高,仅仅只有32 bp的基因间隔和35 bp的基因重...     

翘嘴鳜EST-SSR标记的开发及3个群体遗传多态性分析

为保护野生翘嘴鳜(Siniperca chuatsi)的种质资源以及遗传育种,本研究从翘嘴鳜的EST文库中开发微卫星并筛选出22对具有多态性的微卫星标记,对来自陆水水库(赤壁)和沅江流域(常德、怀化)的3个野生群体进行了遗传多样性分析.实验结果显示,这些标记在3个群体中均表现出了丰富的多态性;共检测到134个等位基因;各基因座观测等位基因数4～8个;平均等位基因数为6.090 1;观测杂合度0.675 4;期望杂合度0.748 7;多态信息含量0.701 0,表明3个翘嘴鳜群体在各检测位点中具有较好多态性.对数据进行F-检测,平均Fst值为0.038 3,说明群体间的遗传分化程度低;而群体遗传相似度和遗传距离的计算结果显示:常德和怀化群体的遗传相似度最大,遗传距离最小;而常德与赤壁群体的遗传相似度最小,遗传距离最大.这恰恰与翘嘴鳜群体的流域分布一致.     

池养和野生条件下翘嘴红鲌消化酶活性比较的初步研究

分别取太湖野生(野生组)和三个池塘饲养(投喂人工饲料:配合饲料组、投喂冰鲜鱼:冰鲜组、池塘散养:活饵组)各6尾翘嘴红鲌成鱼,测定比较了池养和野生条件下,鱼的肝胰脏和消化道(前肠、中肠和后肠)中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性的差异.各组鱼的消化酶活性均为肠道高于肝胰脏.除了冰鲜组的肝胰脏外,野生组的蛋白酶活性在其他组织中都是最低的,这可能与野生组鱼在天然湖泊环境中无法得到稳定充足的饵料,间断的摄食或半饥半饱的状态造成蛋白酶活性偏低有关.蛋白酶活性高低顺序为活饵组>配合饲料组>冰鲜组>野生组,配合饲料组的蛋白酶活性比冰鲜组高,仅次于活饵组,提示翘嘴红鲌经过驯化已能较好地适应人工配合饲料.活饵组的前肠、后肠类胰蛋白酶的活性分别是其他组的3.1~1.8倍和3.2~1.8倍,配合饲料组的蛋白酶活性在前、中、后肠中呈现出一定的升高趋势,而冰鲜组蛋白酶的活性变化情况则相反,表明在食物充足的情况下,饵料的物理性状(如硬度等)也会影响鱼的蛋白酶活性;肠道淀粉酶活性中除了后肠外,均是冰鲜组的淀粉酶活性最高,野生组最低,大小顺序为冰鲜组>活饵组>配合饲料组>野生组;各组鱼脂肪酶活性的高低顺序为配合饲料组>野生组>冰鲜组>活饵组,但除了冰鲜组后肠的脂肪酶活力显著低于配合饲料组和活饵组(P<0.05)外,其他各组的不同组织之间的差异不显著(P>0.05),相比之下,环境和饵料对翘嘴红鲌脂肪酶活性的影响不如对蛋白酶的影响那么明显.     

平菇黄萎病病原菌的分离、初步鉴定及防治

对平菇黄萎病的病原菌进行了分离和培养 ,人工感染时获得了相似的症状 ,根据其形态和生理生化特性鉴定为假单胞菌 ,该菌的主要特性为杆状 ,G-,极生单鞭毛 ,过氧化氢酶、氧化酶和V .P反应为阳性反应 ,氧化葡萄糖产酸。并对黄萎病的防治作了初步的探讨     

牙周炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

从７例牙周炎患者病料中分离到６株专性厌氧菌和若干株兼性厌氧菌。通过形态学观察，微量生化试验以及用气相色谱分析其代谢产物等方法，已将６株厌氧菌鉴定到种。随后用江西中医学院研制的数种治疗牙周炎的药物对其中几株主要病原菌做了体外药敏试验，比较了５种药物成分对牙周炎病原菌的作用；测定了５种药物配方对５株厌氧菌的ＭＩＣ及ＭＬＣ。此外，还探索了药液的牛津杯法在厌氧菌抑菌试验中的应用。     

鳜暴发流行病病毒性病原研究

患病鳜肾脏、脾脏、肝脏、心脏、鳃中发现二十面体病毒粒子,肾脏和脾脏是其感染主要器官．成熟病毒粒子直径１５０ｎｍ,核心球状,直径１０５ｎｍ．受感染细胞肿大,直径为正常细胞３～４倍,细胞核萎缩,为正常细胞核直径１／３．病毒粒子部分纯化后,经腹腔人工感染,第７天开始死亡,１０ｄ内死亡率为１００％,表现与池塘养殖状态相同症状,并在人工感染鳜肾和脾中电镜观察发现大量相同病毒粒子,命名为传染性脾肾坏死病毒（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｓｐｌｅｅｎａｎｄｋｉｄｎｅｙｎｅｃｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,ＩＳＫＮＶ）．     

鳜传染性脾肾坏死病毒ICR489基因序列分析

报道了鳜鱼传染性脾肾坏死病毒 (ISKNV)的ICR489基因结构及其序列分析。对ISKNVDNAKpnⅠB酶切片段的序列分析结果发现该序列中含有完整的ICR489基因。ISKNVICR489基因完整读码框为 10 11bp ,GC含量为 5 6 97% ,等电点为 6 82 ,编码一个长为 337aa、相对分子质量为 382 70的推定蛋白。结构分析发现该基因起始密码子上游具有启动子元件TATAbox,有反向重复序列可形成茎环 ,并有一段回文序列。ISKNV与其它 3种虹彩病毒 (FV3、RRV和LCDV_1)的ICR489基因氨基酸序列具有一定的同源性 ,但ISKNV与它们的同源性不高 ,序列比较和系统树分析发现ISKNV与蛙病毒属和淋巴囊肿病毒属的病毒都不尽相同     

鳜鱼基因组(AC)n微卫星富集文库的构建与鉴定

鳜鱼基因组DNA经MseI酶切后,与MseI接头连接,用链霉素和素磁珠亲和捕捉与生物素标记的微卫星寡核苷酸探针(CA)8杂交,杂交复合物通过变性洗脱获得单链目的片段,经PCR扩增形成双链,然后克隆到pGEM-T 载体上,转化至大肠杆菌DH5α中,首次成功构建鳜鱼(Siniperca chuatsi)基因组(AC)n重复类型的微卫星富集文库.测序结果表明,阳性克隆率为60%,说明构建的鳜鱼基因组微卫星富集文库是一个高质量的文库.鳜鱼富集微卫星文库的建立将为下一步进行鳜鱼微卫星标记的筛选提供了有效的工具.     

山东省普通级大、小鼠病原体携带状况的初步调查

目的　通过对山东省大部分单位普通级大、小鼠病原体携带状况的调查 ,了解省内实验动物质量情况 ,以利于新国标的宣传和执行。方法　选取省内不同地区、不同单位的普通级大、小鼠 ,按清洁级标准对其所携带细菌病毒进行检测。结果　小鼠肝炎病毒 (MHV)和小鼠仙台病毒 (SV)血清抗体阳性率分别为 11%和 19%。小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 (LCMV)、汉坦病毒 (HV)和鼠痘病毒 (Ect )血清抗体均为阴性。大鼠HV、SV血清抗体均为阴性。细菌检测结果 ,Wistar大鼠支气管鲍特杆菌阳性率为 8 3% ,其余所检项目均为阴性 (支原体、泰泽氏菌未能检测 )。结论　山东省实验动物质量有了明显提高 ,达到了普通级要求 ;但是 ,MHV和SV的存在以及Wistar大鼠支气管鲍特杆菌的隐性感染 ,说明普及清洁级大小鼠是很有必要的     

桃杏果实内生细菌多样性分析及软腐病原菌的分离与验证

为了解桃和杏采后果实内生细菌群落组成,并对潜在病原细菌进行筛选与验证,为其贮藏保鲜、软腐病害防治等相关研究奠定基础,利用高通量测序技术,对新疆地产油桃和库车小白杏采后果实内生细菌群落组成进行分析;同时,利用微生物传统分离培养,采用16S rDNA序列分析对潜在病原细菌进行分子鉴定,并利用离体接种法和再分离法,对相关菌株的致病能力进行验证。研究结果表明,油桃和库车小白杏内生细菌共包括128个操作分类单元,涉及9个门117个属,其中变形杆菌门(Proteobacteria)为绝对优势菌门,其次为厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes);在属水平上,油桃以泛菌属(Pantoea)、芽孢杆菌属(Bacillus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、拟杆菌属(Bacteroides)等菌属为优势菌群;库车小白杏以葡糖杆菌属(Gluconobacter)、泛菌属(Pantoea)、克里斯滕森菌(Christensenella)、普氏菌属(Prevotella)等菌属为优势菌群。通过分离筛选获得了1株潜在采后致腐病原细菌XAAS-P1,经分子鉴定初步确定其归属于泛菌属(Pantoea)。XAAS-P1对采后油桃和库车小白杏均具有较强的致腐能力,并呈现出与自然软腐一致的病状。接种4d后,XAAS-P1致腐率可达100%,与阴性对照组相比,接种组样品的软腐现象提前了1d。对接种组病灶中的微生物进行再分离、鉴定,结果显示,菌株XAAS-P1是病灶组织中的绝对优势菌群,证明了菌株XAAS-P1是导致采后油桃和库车小白杏软腐变质的主要病原细菌。研究表明,桃和杏果实中存在丰富多样的内生细菌,其内生泛菌XAAS-P1可导致采后油桃和库车小白杏的软腐变质。     

中华绒螯蟹弧菌病及病原检验

对一起自然发生的中华绒螯蟹（Eriocheir sinensis H．Milne-Edwards）病例进行了检验,结果表明该病是由鳗利斯顿氏菌（Listonella anguillarum）所引起的病害。对从病（死）蟹肝胰腺中分离做纯培养的6株菌（HF010522-1至HF010522-6）进行了形态特征、主要理化特性等方面的鉴定;同时,选择代表菌株（HF010522-1）对健康蟹进行了人工感染试验,结果显示出较强的致病作用;另外,测定了HF010522-1菌株的16S rRNA基因序列、构建了系统发育树;选用37种抗菌类药物对3株菌做药敏试验,结果均表现对头孢噻肟等31种药物呈现敏感或高度敏感、对头孢拉啶低度敏感、对青霉素G等5种耐药。     

羊柴根瘤中ATP酶活性的超微结构定位

作者用透射电镜,观察了羊柴根瘤中宿主的细胞和细菌在发育中ＡＴＰ水解酶的分布及变化。结果表明,ＡＴＰ水解酶活性反应的磷酸铅沉淀粒,分布于宿主细胞壁外表面,质膜,胞间隙,细胞质,细菌周膜和拟菌体等部位,尤其在胞间隙中有大量的ＡＴＰ水解酶并有泡状分泌物。     

Identification of salt-tolerance QTL in rice (Oryza sativa L.)

Quantitative trait loci (QTLs) controlling salt-tolerance at the seedling stage in rice (Oryza sativa L.) were identified by interval mapping (SIM) and composite interval mapping (CIM) using a doubled haploid population ZJDH and its high resolution genetic linkage map. The population was derived from an inter-subspecific cross between an indica variety Zhaiyeqing8 (ZYQ8) and a japonica variety Jingxi17 (JX17). Analysis of survival days of seedlings treated with 0.7% NaCI revealed that a major salt-tolerance quantitative trait locus (QTL), Std, was present between markers RG612 and C131 on chromosome 1 when using both MAPMAKER/QTL 1.1 and PLABQTL 1.0 (SIM). Its allele which contributes to salt-tolerance was from ZYQ8. In addition, seven more QTLs which give additive effect on salt-tolerance are identified when using PLABQTL (CIM), and most of them were from JX17.