两种抗原不同方法检测猕猴B病毒抗体的初步探讨

分别以人单纯疱疹病毒１型（ＨＳＶ－１）作抗原，采用玻片免疫酶法（ＥＩＡ）和以Ｂ病毒作抗原，采用ＤＩＡｄｏｔ法检测了６０份猕猴血清中的Ｂ病毒抗体。结果ＥＩＡ法检测的阳性率为５％，ＤＩＡｄｏｔ法检测的阳性率为１０％，两者的符合率为９５％。这一结果可为猕猴生产和出口单位提供参考。     

小鼠肺炎病毒的分离和鉴定

本文采用SPF小鼠滴鼻分离到一株鼠肺炎病毒,经鸡胚试验、组织培养、间接免疫荧光试验(IFA),抗体产生实验,同时用美国鼠肺炎(PVM)药盒的验证试验均证实了该分离物为鼠肺炎病毒(简称PVM-Bj)。1986年PVM抗体检测按季度统计,其阳性率分别为51％,15％,7.7％,0％。     

猕猴B病毒妒和gC合成基因重组杆状病毒质粒的构建

目的构建猕猴B病毒gB和gc合成基因的杆状病毒重组质粒（rBacmid）。方法根据本室已经合成的猕猴B病毒gB基因和gc基因,利用BamHI和XhoI特异性酶切,将其亚克隆于昆虫杆状病毒的pFastBacHTA转座载体。将该阳性转座载体转化到DHlobac感受态细胞,从中筛选出阳性重组细菌,并提取重组质粒。结果获得了重组质粒bacmid—gB和bacmid—gC。结论该研究为猕猴B病毒gB和gc蛋白在杆状病毒系统内的表达奠定了基础。     

新疆普氏野马鼻肺炎病毒的分离鉴定

从新疆昌吉州吉木萨尔野马饲养繁殖中心送检的野马病料中分离到一株病毒,并对其进行了全面鉴定．该病毒株在ＢＨＫ－２１细胞上连传６代出现典型细胞病变,用适应ＢＨＫ－２１细胞的病毒接种鸡胚成纤维细胞、乳豚鼠肾原代细胞、豚鼠睾丸细胞均出现程度不同的细胞病变．在电镜下可见到典型的马鼻肺炎病毒粒子（疱疹病毒样颗粒）．病毒对５－碘脱氧尿核苷、氯仿、乙醚等敏感．在ｐＨ３下失活,５６℃３０ｍｉｎ灭活．病毒能被马鼻肺炎病毒标准阳性血清所中和．病毒接种乳豚鼠出现典型致死性肝炎．结果表明所分离病毒为马鼻肺炎病毒,并将该毒株定名为ＰＨ９３－１株     

山鸡感染禽流感H9亚型病毒的分离鉴定

禽流感H9亚型病毒(AIVH9)为低致病性病毒,毒力相对较弱,若无并发症,死亡率不高,主要出现呼吸道症状。2005年6月某珍禽养殖场饲养珍禽山鸡突然发病,通过发病情况调查、观察临床症状、病理变化,同时采取发病鸡的血液分离血清测定AIH5、AIH9和ND的抗体;采集病鸡内脏接种鸡胚尿囊腔分离到一株病毒,该分离株具有血凝活性,经鉴定为AIVH9亚型,表明禽流感不仅危及家禽,一些珍禽也有自然感染AIV的潜在性。     

B病毒PCR检测方法的建立

目的建立B病毒核酸的PCR检测方法。方法设计引物,用PCR方法扩增B病毒,并验证其灵敏性和特异性。结果引物P1、P2及P3、P4在以B病毒为模板时有特定大小的目的片段出现,在以其他病毒为模板时无目的片段出现;引物P5、P6以B病毒和人单纯疱疹病毒I型(HSVI)为模板能扩增出382bp的产物,经SacⅡ酶切后,B病毒产生176bp和206bp的两个片段,HSVI无变化。结论通过PCR方法成功的区分开B病毒,并且鉴定区分了B病毒和HSVI。     

新城疫病毒TL1株的分离鉴定及部分生物学特性研究

新城疫是引起很多禽类发病并致死的一种烈性传染病．本研究通过对内蒙古分离株TL1株应用SPF鸡胚传代、电镜形态学观察、HA及HI试验、毒力鉴定、血凝解脱及血凝素热稳定性试验、动物感染试验等进行了研究。发现TL1株属于新城疫病毒强毒株,血凝素热稳定性较差,属快速血凝解脱型．     

三种不同抗原对猴B病毒抗体检测结果的比较研究

采用HSV1抗原片、BV抗原片以及BV DIA dot试剂盒对我区灵长类实验动物进行BV抗体检查.结果表明用HSV1抗原片检测为阳性猴的阳性率与BV抗原片以及BV DIA dot检测为阳性猴的阳性率之间差异极显著(P＜0.01);后两者之间阳性率差异不显著.用HSV1抗原片、Bv抗原片以及BV DIA dot检测为阴性的猴,分别饲养2、4、6个月后,用同一种抗原复检,结果HSV1检测为阴性猴的阳转率与后两者的阳转率之间的差异极显著(P＜0.01).自1999年8月至今,经BV抗原片检测为阴性的猴出口至美国、荷兰、日本、德国等国家累计1389只,均符合客户要求.     

猴B病毒BVgD-多肽ELISA检测方法的建立

目的建立猴B病毒抗体BVgD-多肽ELISA检测方法。方法以Western-blot分析猴B病毒糖蛋白D(BVgD)上的多肽抗原决定簇(BVgD-多肽)的抗原性,采用方阵滴定法,确定ELISA法的最佳实验条件。用灭活BV全病毒、HSV-1和BVgD-多肽三种抗原系统对猴血清样品进行平行检测,比较分析了三种系统的抗原性特点。并且将检测结果与美国BV抗体检测试剂盒的检测结果进行了比较。结果建立了猴B病毒抗体的BVgD-多肽ELISA法,研究结果表明本方法与BV全病毒和以HSV-1病毒为抗原的试剂盒相比,敏感性较低、特异性较好,避免了制备BV抗原对实验室要求高和HSV-1抗原引起的非特异性问题。检测结果与美国实验室BV抗体检测结果的符合率达85%。     

两株小鼠诺如病毒的分离与鉴定

摘要: 目的了解江苏地区常用实验小鼠诺如病毒( murine norovirus,MNV) 的感染情况及进化特征。方法在江苏地区抽取三个实验动物中心的实验小鼠,采集直肠及内容物样本,应用ＲT-PCＲ 方法检测MNV OＲF2 特异性基因( 547bp,MNV nt5104-5650) 。阳性样本经ＲAW264. 7 细胞分离病毒,对MNV 分离株的VP1 基因进行扩增,将其连接在pEASY-Blunt 载体上,转化至大肠杆菌Trans1-T1 感受态细胞,通过Kanamycin 抗性筛选,挑取菌落进行PCＲ鉴定,鉴定为阳性的克隆送检测定其VP1 基因序列,构建系统发生进化树。结果共检测小鼠直肠内容物30 份,检出MNV 阳性样本4 份,包括ICＲ 小鼠( 2 /8) 、BALB/c 小鼠( 1 /12) 和C57BL/6J 小鼠( 1 /10) ,感染率为13. 3%;ＲAW264. 7 细胞接毒盲传三代,两只ICＲ 小鼠样品接种的细胞产生明显细胞病变( CPE) ,表现为细胞圆缩聚集,大部分脱落死亡,而C57BL/6J 和BALB/c 小鼠样本接种ＲAW264. 7 细胞无CPE; 应用VP1 特异引物经ＲT-PCＲ 检测,表现CPE 的细胞样本出现特异条带,测序结果显示分离到的2 株MNVVP1 核酸序列均为1626bp,与引物设计参考毒株S7-P2( GenBank 登录号: AB435514) VP1 基因大小相同,进化树图表显示检测到的2 株MNV 属同一独立小分支与参考株BJ10-2062、CＲ4 最为相近。结论此次抽检的实验小鼠MNV 感染率为13. 3% ( 4 /30) ,考虑可能在同一设施内传播。常用实验小鼠携带病毒的生物学意义有待进一步研究。     

禽流感病毒三种检测方法的比较研究

对分别应用病毒分离鉴定、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、间接免疫荧光(IFA)3种方法对病料组织中的禽流感病毒(AIV) 进行检测与比较研究。结果显示:经鸡胚尿囊腔接种分离到的病毒,通过用禽流感病毒H5、H9亚型单克隆抗体所进行的血凝(HA)和血凝抑制试验(HI),鉴定为AIV H5亚型毒株;应用RT-PCR技术直接对病料组织抽提的RNA样品进行检测,从病料组织能扩增出大小为229bp的AIV通用目的片段和大小为380bp的H5亚型特异性片段;取病料组织的过滤液接种狗肾上皮细胞(MDCK)单层,24h后用H5亚型AIV特异性的单克隆抗体进行间接免疫荧光试验,结果在细胞核、细胞质内观察到特异性的荧光。研究的结果表明,3种技术都可对病料样品中的AIV进行检测,而RT-PCR和IFA两种方法还可直接对病料样品中的病毒进行亚型的鉴定。相对而言,后两者具有更快速、更敏感、操作更简便的特点。     

普通棉耳狨猴中乙型流感病毒的分离和鉴定

乙型流感病毒是引起人类局部流行性感冒的重要病原体，其起源和自然储存宿主目前仍不清楚。1999年夏季在某动物中心饲养的普通棉耳绒猴（Callithrix jacchus）群体中爆发了以呼吸道症状为主的急性传染病，死亡比率高达1／3。通过对死亡狨猴肺组织匀浆接种鸡胚和MDCK细胞的分离培养，分离出病毒。双份血清的红细胞凝集抑制试验证实，此分离株为此次狨猴群体感染流行的病原体。通过甲型和乙型流感病毒标准血清鉴定，证实该分离株为乙型流感病毒，命名为B/marmoset/China/1/99。     

盗毒蛾核型多角体病毒的分离鉴定

作者从自然罹病死亡的盗毒蛾幼虫中分离到一株昆虫病原物,经鉴定,该病原物为盗毒蛾核型多角体病毒(PsNPV),该病毒包涵体多数呈三角形、四边形,部分呈多角形,其大小为1000～2000nm;病毒粒子呈杆状,为单粒包埋型(SEV),其大小为(250～350)nm×(40～60)nm.通过感染试验测定了盗毒蛾核型多角体病毒的毒力,结果显示其LC50为3.34×104PIB/mL;以3×106PIB/mL和3×105PIB/mL两种浓度感染盗毒蛾幼虫,测得LT50分别为5.78d和6.24d.     

山东林果害虫病毒研究初报

1986至1989年从山东一些林果害虫中分离出10种病毒,它们是赤松毛虫NPV、侧柏松毛虫NPV、灰斑古毒蛾NPV、古毒蛾NPV、杨尺蠖NPV、双齿绿刺蛾NPV、豆天蛾CPV、扬扇舟蛾CPV、侧柏松毛虫CPV、桃天蛾CPV.     

运动性气单胞菌分离和鉴定方法的研究

通过碱性蛋白胨水 (APW)的增菌效果与气单胞菌培养基 (RYAN)的选择性效果试验 ,建立了运动性气单胞菌细菌学分离和鉴定的实验室检测程序。应用该程序对 8个模拟阳性样品和 71个动物产品、养殖水样及动物病料进行检测 ,结果模拟感染菌全部被分离到 ,从 71个检测样品中分离到 2 0株运动性气单胞菌。实验表明 ,所建立的分离和鉴定方法简便、快速、敏感。此外本文对用生化特性判定细菌致病力的可行性作了探讨     

云南烟草根结线虫拮抗真菌分离鉴定初报

 从云南省28个县采集152个土样及发病烟根,利用直接分离法和诱集分离法分别从根结线虫卵囊、卵、雌虫和幼虫分离到400株拮抗真菌,它们包括拟青霉属、镰刀菌属、普可尼亚属、木霉属、链格孢属、曲霉属、青霉属、柱孢菌属、茎点霉属、单顶孢属、钩丝孢属、节丛孢属、矛束孢属等21属及一些不产孢的拮抗真菌,其中淡紫拟青霉、厚垣孢普可尼亚菌、尖孢镰刀菌为分离频率最高,约占分离数的60%.卵囊、卵和雌虫寄生真菌种类和数量远远大于二龄幼虫寄生真菌种类和数量,不同县寄生真菌种类和数量差异较大.     

鸦胆子油中三萜醇的分离和结构鉴定

采用快速层析技术（ＦＣ）和络合快速层析技术（ＣＦＣ）、质谱、红外光谱、气相色谱、化学衍生化并结合旋光度、熔点的测定，分离鉴定了鸦胆子油中７种三萜醇。     

石家庄市猪链球菌分离鉴定及快速诊断方法研究

从石家庄市地区各县市猪场送检的疑似病例中分离得到72株猪源链球菌,选择其中具有一定区域、特定致病类型的代表性菌株18株,进行了病原分离和分群鉴定,并与标准株进行了对比试验.初步证实本地区流行菌株仍以兰氏分群C群及D群居多,以C群链球菌为主占50%,但D群有上升趋势占33.3%,此外还出现1株G群占5.6%,另有2株未定群的猪链球菌,其分布无明显的地域性.为检测石家庄地区SS分离株的毒力因子,选取了猪链球菌8种主要毒力因子基因,设计并合成8对引物,用PCR方法进行检测.结果显示:已知21株SS2菌株中90.5%表现为cps2/gdh+/gapdh+/ef+/mrp+/sly+/fbps+/orf2+;送检的疑似SS2的病例中,仅有10%左右表现为cps2/gdh+/gapdh+/ef+/mrp+/sly+/fbps+/orf2+.可见,石家庄地区的猪链球菌与国内其他地区SS2分离株的基因型不同,表明石家庄目前SS2的主要流行菌株是具有部分毒力因子的弱毒菌株.     

汾酒大曲中红曲霉的分离和鉴定

对汾酒大曲中的红心曲、后火曲、清茬曲等样品中的红曲霉进行了分离鉴定.从后火曲和红心曲中分别分离到两株红曲霉,编号为N1和N2,经培养特征观察、个体形态特征观察,以及生物学特性分析和生理生化试验等,将两株红曲霉初步鉴定为红曲霉属(Monascus)中的红色红曲霉(Monascus ruber).     

小鼠诱导转基因传代细胞对AFP粪便标本中脊灰和其他肠道病毒的分离鉴别研究

报告46份AFP粪便标本用L_α、RD和Hep-2三种细胞作病毒分离,阳性率分别为26.09%、60.87%、43.48%。同步分离出脊灰病毒Ⅰ型3株,Ⅱ型2株,Ⅲ型4株,Ⅰ+Ⅱ型1株,Ⅰ+Ⅲ型1株,混合P2+E1株。脊灰病毒总分离阳性率为28.95%。非脊灰肠道病毒分离阳性率分别为0%、36.96%、23.91%。从6份第1次分离结果阴性的高危病例和高度临床病例粪便标本重新分离出1株Ⅲ型脊灰病毒和3株非脊灰肠道病毒。应用L_α细胞不仅能作型别鉴定,而且能区别脊灰病毒和非脊灰肠道病毒混合感染。