啤酒废酵母超氧化物歧化酶（SOD）的分离纯化及性质研究

啤酒废酵母（１０８－１０９细胞／ｍｌ）通气发酵后，经乙醇－氯仿沉淀，加热，调ＰＨ，（ＮＨ４）２ＳＯ４沉淀等除去杂蛋白质。最后经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５层析得到纯化的ＣｕＺｎ－ＳＯＤ，酶比活在１５００单位／ｍｇ蛋白以上，酶的分子量为１４８０００，由四个亚基组成，紫外最大吸收峰位于２５６ｕｍ处。Ａ２５６．４／２８０＝１．２２．     

早孕妇女蜕膜中淋巴细胞抗原的分析

检测早孕蜕膜中淋巴细胞抗原的表达。以几种抗淋巴细胞表面标志的单克隆抗体,采用花环标记、碱磷酶抗碱磷酶（ＡＰＡＡＰ）法,对２３例早孕蜕膜组织中的淋巴细胞进行测定。早孕蜕膜淋巴细胞中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ１６＋及Ｂ细胞百分率（ｘ±ｓ）分别为２９．５２±６．８０％、２３．６０±４．８０％、２０．９１±４．０６％、１．０７±１．００％、７．８１±２．５６％,ＣＤ４／ＣＤ８为１．２±０．２,ＣＤ３－淋巴细胞呈大颗粒淋巴细胞（ＬＧＬ）形态。早孕蜕膜中存在较多ＣＤ３－、ＣＤ１６－形态呈ＬＧＬ的ＮＫ细胞,ＣＤ４＋细胞与ＣＤ８＋细胞的比值较正常外周血明显降低。     

非小细胞肺癌CD44v6,VEGF与C—erbB—2和nm23基因蛋白 …

应用链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶（ＳＰ）法染色技术测定６５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）组织标本的ＣＤ４４ｖ６、ＶＥＧＦ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２和ｎｍ２３基因蛋白的表达水平。显示ＣＤ４４ｖ６、ＶＥＧＦ、Ｃ－ｅｒｂＢ－２及ｎｍ２３在ＮＳＣＬＣ组织中表达的阳性率分别为６６．２％、７８．５％、６３．１％及７３．８％,均显著高于癌旁组织;上述四项指标阳性率与ＮＳＣＬＣ的病理类型无明显关系;区域性淋巴结转移组ＣＤ     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

巴西铁的茎组织培养

以巴西铁（Ｄｒａｃａｅｎａ　ｓａｎｄｅｒｉｅｎａ）茎段为接种材料，ＭＳ为基本培养基，吲哚乙酸（ＩＡＡ）、茶乙酸（ＮＡＡ），２，４－二氯苯氧乙酸（２．４－Ｄ）、６－苄氨基嘌呤（６－ＢＡ）、６一糠基氨基嘌呤（６－ＦＡ）、吲哚丁酸（ＩＢＡ）、生根粉（ＡＢＴ１）、玉米素（ＺＴ）为附加成分，进行诱导、分化、生根试验。诱导结果表明：ＩＡＡ不起作用，２，４－Ｄ有较好的促进作用，０．５ｍｇ／Ｌ（２，４－Ｄ）＋２ｍｇ／Ｌ（６－ＢＡ）组合，诱导率高达９０％。分化结果表明：ＮＡＡ、６－ＢＡ效果较好，６－ＦＡ作用不明显，ｌｍｇ／ＬＮＡＡ＋４ｍｓ／Ｌ（６－ＢＡ）＋２ｍｓ／ＬＺＴ组合，分化率最高．达８１．１％。生根结果表明：ＭＳ＋０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．５ｍｇ／Ｌ（６－ＦＡ），ＭＳ＋０．４ｍｇ／ＬＮＡＡ＋２ｍｇ／ＬＩＢＡ，ＭＳ＋０．２ｍｇ／ＬＮＡＡ＋０．１ｍｇ／Ｌ（６－ＦＡ）＋ＡＢＴ１三种培养基均发根，生根率７０％以上，根粗，但有点脆，若培养基中加入活性碳产生的根则细而韧。     

人肿瘤坏死因子受体Ⅰ(hTNFRⅠ)基因死亡域在大肠杆菌中的表达

将人肿瘤坏死因子受体Ⅰ（ｈＴＮＦＲＩ）死亡域基因克隆在氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）的后面,构建成重组表达质粒ｐＬＴ１０ ＣＡＴＬＤｄ．该融合蛋白基因转化大肠杆菌后发酵,ＩＰＴＧ诱导２ ｈ,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定ＣＡＴＬＤｄ 蛋白质的分子质量为３９ ｋｕ．Ｗｅｓｔｅｒｎ 印迹实验进一步作了鉴定．表达产物为包涵体．ＣＡＴＬＤｄ 蛋白质经Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ 柱层析后纯度大于９５％ ．     

猫儿屎植物的化学成分及其药效学研究

首次从木通科猫儿屎（ＤｅｃａｉｓｎｅａｆａｒｇｅｓｉｉＦｒａｎｃｈ）中分离鉴定了１１种皂甙化合物．经光谱分析及化学方法鉴定，其中５种化合物为新化合物，分别命名为：ＤｅｃａｉｓｏｓｉｄｅＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｇ；另５种化合物为ＳａｐｏｎｉｎＰＧ、ＤｉｐｓａｃｏｓｉｄｅＢ、Ｋａｌｏｐａｎａｘ－ｓａｐｏｎｉｎＢ、Ｓａｐｏｎｉｎ１１、ＨｅｄｅｒａｓａｐｏｎｉｎＢ和ｓａｐｏｎｉｎＰＪ３．猫儿屎对小鼠移植性肿瘤Ｓ１８０（小白鼠肉瘤）、Ｈｅｐａ（肝癌）、Ｅｃ（艾氏病）的平均抑制率分别为４７．８０％、４１．４８％、４４．７１％，具有一定的抗肿瘤活性．     

Bc1-2 基因加强表达对 OA 诱发的细胞编程死亡的效应

ＯＡ能诱发人神经母细胞瘤ＳＫ细胞进行编程死亡．死亡细胞缩小变圆，细胞质凝聚，ＤＮＡ有控降解成约２００ｂｐ左右的片段，且这一过程可由蛋白质合成抑制剂亚胺环己酮（ＣＨＸ）抑制．将编码Ｂｃ１－２全长蛋白质的ｃＤＮＡ植入ｐＸＪ４１ｎｅｏ载体中，使其表达由ＨＣＭＶ病毒启动子控制．形成的顺义（ｐＢｃｌ－２－Ｓ）及反义（ｐＢｃｌ－２－ＡＳ）表达质粒经转染导入ＳＫ细胞中获得稳定转染子，Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ印迹表明顺义转染子表达较大量的２６ｋｄＢｃ１－２蛋白，而反义转染子则不表达．增强表达的Ｂｃ１－２基因产物对ＯＡ引ＳＫ细胞编程死亡无抑制效应．     

饭豆铜锌超氧物歧化酶的纯化及性质

饭豆种子粗提液中有６条Ｃｕ·Ｚｎ—ＳＯＤ活性谱带，经氯仿－乙醇混合液处理，硫酸铵盐析，ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱层析被分离，获得了两组ＳＯＤ同工酶组分（ＳＯＤ—１，ＳＯＤ—２）．它们在酶分子结构上可能存在一定差异．ＳＯＤ－１含与粗提液相对的、电泳迁移率较小的活性谱带，它在聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）图谱上的活性染色带和蛋白染色带相互对在；在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和等电聚焦电泳图谱上均呈现单一区带，说明该酶已纯化到均一程度．该酶分子量为３１３００，亚基分子量为１６５００，等电点为４．２，在紫外区的吸收值为２６４．０ｎｍ．该必在０—７５℃范围内稳定．纯化的ＳＯＤ—１比活性为１７８９Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ—２比活性为２８４Ｕ／ｍｇ，ＳＯＤ活力回收率为３２％．     

添加剂对废水中COD,N和P去除的影响

实验室规模的ＡＮＡＮＯＸ工艺（ＡＮａｅｒｏｂｉｃ－ＡＮｏｘｉｃ－ＯＸｉｃ）用来处理豆制品废水，阐明添加剂对此工艺去除ＣＯＤ、Ｎ和Ｐ能力．研究结果表明：ＴＣＯＤ去除９５．７％，ＳＣＯＤ去除９５．８％，去除９４．２％，去除８９．１％，ＴＫＮ去除８２．４％，ＴＰ去除８７．４％，ＳＰ去除７７．２％，ＳＳ去除９８．０％．比加添加剂之前去除率提高了ＴＣＯＤ９．９％，ＳＣＯＤ１０．３％，ＴＰ４１．４％，ＳＰ３０．８％，ＳＳ８．１％     

半夏中一种抗癌蛋白的纯化及其抗癌活性研究

经硫酸铵分级沉淀、疏水层析和DEAE离子交换层析3种方法从新鲜半夏块茎中分离纯化出一种具抗肿瘤作用的蛋白,命名为APPT,用MTT法、载瘤小鼠实验和流式细胞术研究其抗肿瘤作用.结果显示:APPT是一种分子量大小为12.09 ku的糖蛋白,其含糖量为3.22％;MTT实验结果表明APPT对Sarcoma 180细胞有一定的细胞毒性,同时载瘤小鼠实验证明APPT能明显抑制载瘤小鼠中肿瘤的生长,当APPT处理剂量为0.85 mg/kg、2.30 mg/kg及3.25 mg/kg体重时,其抑制率分别为15.6％、32.1％、36.2％;流式细胞仪结果显示APPT不能诱导Sarcoma 180细胞凋亡,却能抑制Sarcoma 180细胞DNA的合成起始并将大量细胞同步于G0/G1期.表明APPT是半夏总蛋白中具有抑癌活性的成分之一,APPT通过抑制肿瘤细胞DNA合成的起始进而阻止肿瘤细胞增殖而不是诱导细胞凋亡.     

茎瘤作用对长喙田菁—Azorhizobium caulinodans共生体系固氮效率的影响

盆栽和大田试验研究了长喙田菁茎瘤共生体系在华南地区的氮积累,并用氮平衡法对共生体系的生物固氮效率进行了研究。结果表明,长喙田菁瘤共生体系在华南地区有较高的绿肥应用潜能,65d生长喙田菁的氮累积量为225kg/hm^2,是同等条件下普通田菁的1．74倍;经65d的生长,长喙田菁茎瘤共生体系的生物固氮量为0．463g/株,而普通田菁为0．04g／株,生物固氮量在植物总氮中所占比重,长喙田菁高达85．6％,远高于普通田菁的26．7％;茎瘤在共生体系的生长和固氮中占有重要地位,根茎瘤总量中,茎瘤所占比重超过了75％,摘除茎瘤组植物的生物量干质量及生物固氮量分别只有正常组植物的60%和46％。     

紫色甘薯多糖对荷瘤小鼠抗肿瘤活性的影响

以荷瘤S180小鼠为实验对象, 研究了紫色甘薯多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤的体内抑制、免疫器官的影响. 结果表明: 紫色甘薯多糖对S180荷瘤小鼠的抑瘤率可达40%左右(P<0 01); 低剂量的紫色甘薯多糖与5 氟尿嘧啶(5 FU)配伍使用, 能提高荷瘤小鼠抑瘤率, 对5 FU所致的荷瘤小鼠胸腺、脾脏质量萎缩有明显的保护作用, 对白细胞的减少有一定的拮抗作用.     

大麦黄花叶病毒抗性突破株系的分子变异

通过大麦黄花叶病毒 (Ba YMV)抗性突破株系的核酸 RNA1全序列分析并与野生株系比较表明 ,抗性突破株系在病毒复制酶或转运蛋白区域 (6K2 )和核酸 RNA复制酶区域 (NIb)存在二个变异位点 .在这二个位点上抗性突破株系核酸分子编码的氨基酸分别为脯氨酸 (Pro)和苏氨酸 (Thr) ,而野生株系分别为缬氨酸(Val)和丙氨酸 (Ala) .对该两种酶蛋白质二级结构分析显示 ,氨基酸的变异可能导致了蛋白质的结构、功能与性质的改变 ,并且此种变异与抗 Ba YMV冬大麦中抗性基因 ym4的功能丧失有关 ,同时也说明了大麦品种田间致病性的差异与病毒核酸分子中的点突变关系密切 .     

山香圆总黄酮对慢性咽炎模型大鼠 NF-κB、IκBα表达的影响

以2.5%氨水喷咽部建立大鼠慢性咽炎模型,用HE染色法观察咽部病理形态学改变,用ELISA法检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6,用RT-qPCR测定咽部组织NF-κBp65mRNA的表达,用Western blot检测咽部组织NF-κBp65和IκBα蛋白的表达,探讨山香圆总黄酮对慢性咽炎模型大鼠 NF-κB、IκBα表达的影响.结果显示:山香圆总黄酮能明显改善模型大鼠咽部病理形态学; 与模型组比较,山香圆总黄酮各组能不同程度地下调TNF-α、IL-1β、IL-6和NF-κBp65的表达并上调IκBα的表达,其中高剂量组最显著.这表明山香圆总黄酮能通过抑制NF-κB的表达和IκBα的解离下调炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达,从而减轻炎症,发挥抗慢性咽炎作用.     

水稻黑条矮缩病毒基因组组分10编码的外壳蛋白基因的克隆及表达

从我国山东发病的玉米材料中提取水稻黑条矮缩病毒 ,抽提病毒RNA ,经RT PCR ,克隆了编码外层外壳蛋白的基因组组分 10 (S10 )的cDNA ,并进行了序列测定 .与已报道的日本株和湖北等地的S10进行了序列同源性比较 .结果表明 ,与日本株的同源性为 92 % ,与湖北等地的同源性在 97%～ 98%之间 .将该序列构建到pGEX 3X表达载体中 ,经IPTG诱导 ,表达了分子质量约为 76ku的GST融合蛋白 .经亲和层析纯化和Western印迹分析 ,证实了该基因以可溶性的GST融合蛋白形式在原核中表达 .     

酿酒酵母YBR019C基因缺失突变的分析

【目的】研究目的基因YBR019C缺失对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)菌株糖代谢和乙醇发酵的影响。【方法】以酿酒酵母野生菌NF1002为出发菌株,选择2号染色体上的基因YBR019C为目的基因,以质粒pUG6和pUG66为模板进行PCR,构建带有Cre/loxP系统的酿酒酵母YBR019C基因敲除组件,并转化酿酒酵母NF1002,利用筛选标记Kan r和Ble r与YBR019C基因进行同源重组,筛选YBR019C双倍体缺陷型菌株。利用蔗糖和甘蔗糖蜜为碳源,对突变菌进行发酵特性的研究。【结果】成功获得YBR019C双倍体缺陷型菌株NFybr。碳源同化实验表明,突变株和野生菌均能利用葡萄糖和蔗糖,不能利用乳糖和木糖;但相比野生菌,突变株利用棉子糖和麦芽糖的能力有所下降,而且完全不能利用半乳糖。蔗糖发酵实验表明:突变株NF-ybr与野生菌株相比,在发酵终点乙醇浓度提高10.7%,发酵周期有所延长。按目前甘蔗糖蜜乙醇生产的发酵工艺,突变株在30℃发酵72h的醪液乙醇含量为12.52%,低于野生菌的13.89%。【结论】YBR019C基因的缺失影响了菌株对糖份的利用,导致乙醇发酵能力不及野生菌。本研究为菌株高效快捷的基因改造提供了参考。     

CPLT抗肿瘤作用研究

研究了CPLT在体内对肿瘤生长的抑制作用．采用体内抑瘤试验灌胃给药，测定了CPLT对小鼠LA795、S180、Lewis肺癌、U14及G422五种癌株的抑瘤作用．CPLT在剂量为100～400mg／kg时，对G422抑瘤率为41．7％～65．8％；138～267mg／kg时，对S180抑瘤率为34．4％～41．2％、对Ul4抑瘤率为24．3％～31．8％、对LA795抑瘤率为19．6％～42．3％；剂量为324mg／kg时对Lewis肺瘤抑瘤率为66．9％．CPLT有较广的抗瘤谱．     

酒鬼酒制曲车间产淀粉酶细菌筛选和系统发育

采用平板水解圈法对酒鬼酒制曲车间空气的细菌进行产淀粉酶活性筛选,运用基于16SrRNA基因序列的分析法对高酶活菌株进行系统发育分析.研究结果表明,65株受试菌株中,有24.6%的菌株(16株)淀粉水解酶活性呈阳性,其中有4株(JSM 2145008,JSM 2155001,JSM 2155017,JSM 2175012)产淀粉水解酶能力较强.基于16SrRNA基因序列的系统发育分析表明,这4个菌株分别属于细菌域3个大的系统发育类群中3个科的3个属.菌株JSM 2145008属于放线菌门微球菌科,与节杆菌属(Arthrobacter)的氧化节杆菌的系统发育关系最为密切,它们之间的16SrRNA基因序列相似性高达99.8%,且在系统进化树上形成一个稳定的亚分支;菌株JSM 2155001和JSM 2175012属于异常球菌——栖热菌群异常球菌科的异常球菌属(Deinococcus),分别与该属的大琼异常球菌和云威异常球菌系统发育关系最为密切(序列相似性分别为99.6%和99.9%);菌株JSM 2155017属于厚壁菌门芽孢杆菌科,与芽孢杆菌属(Bacillus)的同温层芽孢杆菌系统发育关系最为密切(序列相似性为100%),它们以极高的自展值支持(boostrap value,100%)在系统进化树上聚在一起.上述实验结果表明,酒鬼酒制曲车间空气源细菌中存在较高比例的产淀粉酶菌株,且这些菌株具有较高的类群多样性.     

Genome sequencing and characterization analysis of a Beijing isolate of chicken coronavirus infectious bronchitis virus

Avian infectious bronchitis virus (AIBV) is classified as a member of the genus coronavirus in the family coronaviridae. The enveloped virus has a positive-sense, single-stranded RNA genome of approximately 28 kilo-bases,which has a 5‘ cap structure and 3‘ polyadenylation tract.The complete genome sequence of infectious bronchitis virus (IBV), Beijing isolate, was determined by cloning sequencing and primer walking. The whole genome is 27733 nucleotides in length, has ten open reading frames:5′-orfla-orflab-s-3a-3b-e-m- 6a-6b-n-3′. Alignments of the genome sequence of IBV Beijing isolate with those of two AIBV strains and one SARS coronavirus were performed respectively. The genome sequence of IBV Beijing isolate compared with that of the IBV strain LX4 (uncompleted, 19440 bp in size) was 91.2% similarity. However, the full-length genome sequence of IBV Beijing isolate was 85.2% identity to that of IBV Strain Beaudette, and was only 50.8% homology to that of SARS coronavirus. The results showed that the genome of IBV has remarkable variation. And IBV Beijing isolate is not closely related to SARS coronavirus. Phylogenetic analyses based on the whole genome sequence, S protein, M protein and N protein, also showed that AIBV Bering isolate is lone virus in group Ⅲ and is distant from SARS coronavirus. In conclusion, this study will contribute to the studies of diagnosis and diseases control on IBV in China.