假单胞菌DM11的二氯甲烷脱卤素酶研究──Ⅱ．动力学性质和抑制剂

对来自假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）ＤＭ１１菌株的二氯甲烷脱卤素酶（简称ＤＭ１１脱卤素酶）的动力学性质和抑制剂进行了研究。用１／Ｖ对１／［ｓ］作图法，测出ＤＭ１１脱卤素酶以ＣＨ２Ｃｌ２、ＣＨ２Ｂｒ２、ＣＨ２Ｉ２、ＣｌＣＨ２Ｂｒ和ＣｌＣＨ２Ｉ等５种化合物为底物时的Ｋｍ值分别是６７、２０、５５、７和９μｍｏｌ／Ｌ，比活力分别是７７．８、１２３．３、７８．８、５６．１和６０．３ｍｋａｔ／ｋｇ蛋白。测定了１４种抑制剂对ＤＭ１１脱卤素酶的５０％抑制浓度（Ｉ５０）。甲基谷胱甘肽（ＧＳＣＨ３）是ＤＭ１１脱卤素酶的竞争性抑制剂，四硝基甲烷（ＴＮＭ）是非竞争性抑制剂，当甲基谷胱甘肽和四硝基甲烷与ＤＭ１１脱卤素酶一起保温时，甲基谷胱甘肽对酶有保护作用。     

假单胞菌DM11的二氯甲烷脱卤素酶研究：Ⅱ.动力学性质和…

对来自假单胞菌ＤＭ１１菌株的二氯甲烷脱卤素酶的动力学性质和抑制剂进行了研究，用１／Ｖ对１／［ｓ］作图法，测出ＤＭ１１脱素酶以ＣＨ２Ｃｌ２，ＣＨ２Ｂｒ，ＣＨ２ｌ２，ＣｌＣＨ２Ｂｒ和ＣｌＣＨ２Ｉ等５种化合物为底物时的Ｋｍ值分别是６７，２０，５５、７和９μｍｏｌ／Ｌ，比活力分别是７７．８，１２３．３，７８．８，５６．１和６０．３ｍｋａｔ／ｋｇ蛋白，测定了１４种抑制剂对ＤＭ１１脱卤素酶的５０％抑制浓度，甲     

谷胱甘肽S—转移酶5—5和细菌二氯甲烷脱卤素酶的性质比较

通过简便的两步阴离子交换色谱，从遗传工程菌株大肠杆菌ＪＭ１０５中纯化出哺乳动物的谷胱甘肽Ｓ－转移酶５－５（ＧＳＴ５－５），ＧＳＴ５－５以二卤甲烷为底物时的动力学常数，热稳定性和最适ｐＨ被测定，并与细菌二氯甲烷脱卤素酶的上述性质进行了比较。     

美洲拟鲽（Pseudopleuronectes americanus）抗冻肽基因在大 …

将美洲拟鲽抗冻肽基因克隆于原核高效表达载体ｐＫＫ２３－３中,经酶切分析、ＰＣＲ检测筛选出重组克隆ｐＭＫ１１,转化大肠杆菌ＪＭ１０９和ＤＨ５α,ＩＰＴＧ诱导２￣３ｈ后,超声波裂解细菌产生,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱分子量９ｋＤａ处显示出一条明显的蛋白带,与美液拟鲽抗冻肽大小一致,表明美洲拟鲽抗冻肽基因在大肠杆菌中表达,为进一步天空抗冻肽基因在大肠杆菌中的表达水平及条件打下基础。     

SD—5菌株原生质体形成与再生条件的研究

探讨了培养基成分、培养时间、高渗缓冲液成分和ｐＨ、溶菌酶浓度以及酶解温度和时间对苏云金杆菌ＳＤ－５菌株原生质体形成和再生的影响；结果表明，ＳＤ－５菌株原生质形成和再生的最佳条件组合为：ＰＢＧ培养基、３０℃培养１４ｈ再活化５ｈ，以ＳＭＭｐＨ６．５作酶解缓冲液，溶菌酶浓度０．６ｍｇ／ｍｌ，３４℃处理６０ｍｉｎ。     

美洲拟鲽(Pseudopleuronectes americanus)抗冻肽基因在大肠杆菌中的表达

将美洲拟鲽抗冻肽基因克隆于原核高效表达载体ｐＫＫ２２３－３中,经酶切分析、ＰＣＲ检测筛选出重组克隆ｐＭＫ１１,转化大肠杆菌ＪＭ１０９和ＤＨ５α,ＩＰＴＧ诱导２～３ｈ后,超声波裂解细菌产物,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱分子量９ｋＤａ处显示出一条明显的蛋白带,与美洲拟鲽抗冻肽大小一致,表明美洲拟鲽抗冻肽基因在大肠杆菌中表达,为进一步研究抗冻肽基因在大肠杆菌中的表达水平及条件打下基础．     

SD－5菌株原生质体形成与再生条件的研究

探讨了培养基成分、培养时间、高渗缓冲液成分和ｐＨ、溶菌酶浓度以及酶解温度和时间对苏云金杆菌ＳＤ—５菌株原生质体形成和再生的影响；结果表明，ＳＤ—５菌株原生质体形成和再生的最佳条件组合为：ＰＢＧ培养基、３０℃培养１４ｈ再活化５ｈ，以ＳＭＭｐＨ６．５作酶解缓冲液，溶菌酶浓度０．６ｍｇ／ｍｌ，３４℃处理６０ｍｉｎ．     

蛋氨酸在长链硫醇修饰电极上的电化学行为研究

研究了蛋氨酸在ＨＳ（ＣＨ）１１ＮＨ２,ＨＳ（ＣＨ２）１１ＣＯＯＨ,ＨＳ（ＣＨ２）１１ＯＨ,ＨＳ（ＣＨ２）１１ＣＨ３４活跃步同末端官能团长链硫醇修饰电极上的电化学行为。结果表明ＤＬ－Ｍｅｔ不仅可以渗透自组单分子层膜,而且ＤＬ－Ｍｅｔ在不同末端官能团的ＳＡＭｓ上的渗秀速率不同。     

东方弧菌SOD的分离纯化和特性研究

从东方弧菌５１８菌株的细胞中提取超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）。先以硫酸铵分级沉淀取得粗酶，再经ＤＥ－５２，ＤＥＡＥ－纤维素柱层析，并以５－５００ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸钾缓冲液作线性梯度洗脱，再次分级沉淀而获纯化的ＳＯＤ，呈棕黄色，其分子量为３８０００道尔顿，为二聚体，亚基分子量为１８５００道尔顿，原子吸收光谱测定其金属辅基为Ｆｅ＾＋＋＋。该酶反应最适温度为２５℃，室温下溶液中很易失活。紫外及可见光吸收光谱测     

一个家蚕基因组MAR的克隆及其初步分析

家蚕（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ）基因组大片段ＤＮＡ经ＢａｍＨＩ完全酶解后,克隆到质粒ｐＵＣ１８中而构建成一个家蚕基因组文库．通过与家蚕细胞核基质的体外结合,从该文库中筛选到一个包含ＭＡＲ的克隆ｐＣ１１ｅ,其中外源插入片段Ｃ１１ｅ长约２．３ｋｂ．Ｃ１１ｅ的限制性酶谱分析及其酶切片段的体外结合实验表明,ＭＡＲ位于Ｃ１１ｅ上的ＳｐｈＩ和ＨｉｎｃⅡ位点之间,长１．０ｋｂ．由于这是家蚕中发现的第一个ＭＡＲ,因此我们称之为ＢｍＭＡＲ１．进一步借助ＤＮａｓｅＩ敏感性分析和ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ,对ＢｍＭＡＲ１在家蚕细胞内与核基质结合的情况以及它与人β干扰素（ｈｕＩＦＮ－β）基因５′上游ＭＡＲ之间的同源性进行了研究．     

Ruminobacter amylophilus 70细胞膜淀粉酶的纯化和分析

一种Ruminobacter amylophilus 70细胞膜联的新支连淀粉酶被4％ Triton X-100提取．其新支连淀粉酶活性存在于70％的硫酸铵沉淀组分中．通过等电聚焦纯化，根据SDS凝胶电泳测定，其新支连淀粉酶的分子量是91．2kDa，其等电点是5．8-5.9.根据另一种淀粉酶活性凝胶电泳的方法测定，其新支连淀粉酶的分子量大约是92．6kDa．在R.amylophilus 70细胞中存在着两种类型的淀粉酶(可溶性淀粉酶和膜联淀粉酶，比如新支连淀粉酶)共同承担分解淀粉的作用．     

长角血蜱不同龄期虫体免疫原性研究

用酶联免疫吸附技术,用长角血蜱三个龄期的虫体蛋白检测其幼虫、若虫和成虫多次叮咬后的兔血清效价.结果表明不同生活阶段的虫体之间存在免疫交叉反应.用SDS-PAGE方法分析了几种蜱类的蛋白质,结果表明长角血蜱不同发育期虫体共有的主要蛋白质有5种,分子量分别为97.4、94、63、37和32kDa;越南血蜱幼虫和微小牛蜱幼虫与长角血蜱不同发育期虫体共有的蛋白质有2种,分子量为97.4、94kDa.用酶联免疫印渍技术研究发现:长角血蜱三个龄期虫体分别叮咬兔产生的抗血清与长角血蜱不同发育期虫体蛋白质印渍,显示出共同蛋白质带,分子量为94kDa.三种抗血清与越南血蜱幼虫印渍显示出的蛋白质,其分子量为97.4、94kDa;与微小牛蜱幼虫蛋白反应显示的蛋白质带,分子量为83、63kDa.实验结果表明不仅长角血蜱三个龄期虫体之间存在免疫交叉反应,而且与微小牛蜱幼虫和越南血蜱幼虫之间也存在免疫交叉反应.     

红斑丹毒丝菌C43065株spaA基因的克隆和表达

通过PCR从红斑丹毒丝菌C43065株基因组DNA中扩增出编码信号肽除外的成熟SpaA蛋白基因spaA,将其克隆到表达载体pET32a的BamHⅠ和Hind Ⅲ位点上,构建重组表达质粒pET-spaA,转化大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下表达N端带有Trx标签的融合蛋白rSpaA,SDS-PAGE检测表达蛋白.DNA测序结果表明,spaA基因大小为1794 bp,编码由597个氨基酸残基组成的成熟SpaA蛋白,SDS-PAGE结果显示在大肠杆菌BL21中成功表达了分子量约为86 kDa的重组rSpaA,为进一步开展SpaA保护区域的研究奠定基础.     

基于低分子量PEI的不同疏水链修饰的梳状低聚物基因载体

为了探究基于低分子量聚乙烯亚胺(polyethylenimine, PEI)基因载体的转染效率,通过Michael加成反应将PEI 600 Da接枝于含有疏水链的生物可降解聚酯上形成系列梳状聚合物,并将之应用于基因载体;利用核磁氢谱和凝胶渗透色谱对聚合物的化学结构与分子量进行了测定,此外,还利用凝胶电泳实验和绿色荧光蛋白实验研究了聚合物与DNA的结合能力及其复合物的转染性能。结果表明：本文方法成功合成了系列低聚物,并对DNA表现出较好的包裹能力;油酸修饰后的低聚物与DNA复合物在质量比为6.4时转染效果与PEI 25 kDa相当。可见,油酸修饰后的脂质体低聚物有作为非病毒基因载体的前景。     

扩展青霉碱性脂肪酶的纯化及N-端氨基酸序列分析

扩展青霉PF898的发酵液经硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤等步骤，其碱性脂肪酶的活性被纯化了79．3倍，回收率约15％，此活为76．9U／mg。纯化蛋白经SDS－PAGE和HPLC TSK－GEL G3000SW凝胶过滤分析显示其分子量约为28kDa。纯化蛋白经氨基酸序列测定仪分析表明，其N－端12个氨基酸的序列为：A－T－A－D－A－A－A－F－P－D－L－H。     

An intracellular toxic protein (Xin) isolated from Xenorhabdus nematophilus strain BJ

An intracellular toxic protein, designated Xin and with remarkable inhibitory effect on growth of Helicoverpa armigera, was isolated from X. Nematophilus strain BJ by ion exchange chromatography and hydrophobic interaction chromatography. After placing neonates on the artificial diet containing Xin at concentration of 0 or 3.48μg/g for 7 days, the average weight of insects was 23.50mg and 0.55mg, respectively. The activity of Xin was lost by heating, freeze-drying, digestion with proteases or urea. The Xin molecular weight, over kD, was determined by gel filtration on Superose 12, and there were six component proteins analyzed by SDS-PAGE. The results show that Xin is a high molecular protein complex inhibiting growth of insect pest.     

TGase对花生分离蛋白与蓝园鲹酶解物交联产物乳化特性影响的研究

本文利用转谷氨酰胺酶(TGase)将花生分离蛋白(PPI)与蓝园鲹酶解物(DPH)进行酶法交联,并经高压均质制成O/W型乳状液,研究了TGase的交联作用对乳状液的粒度分布、表面积平均粒径、显微结构及离心乳析率等的影响。结果表明：TGase可促使PPI与不同水解度的DPH交联,与交联前的电泳图相比,低分子量亚基条带(31-14 kDa)消褪,高分子量亚基条带(>97 kDa) 生成;DPH的水解程度对交联物的乳化性有重要影响,DPH的水解度DH=5.5%时所得PPI与DPH的交联物具有较好乳化特性。此外,结果分析显示交联作用使PPI-DPH乳状液表面积平均粒径d3,2及离心乳析率减小,表明TGase可提高PPI-DPH异源蛋白交联产物的乳化活性与乳化稳定性。因此,通过TGase催化制备具有优良乳化特性的异源蛋白交联物用于食品领域将具有广泛的应用前景。     

2种古井贡酒中挥发性成分的研究

采用不同溶剂,通过液液萃取法结合气相色谱-质谱联用技术分析古井贡酒中的挥发性成分,并通过标准品、NIST 11谱库检索和保留指数3种方法进行定性。结果表明:不同极性溶剂萃取出来的化合物不同,正戊烷与乙醚、二氯甲烷相比,对芳香族化合物、烷烃类化合物以及含硫化合物萃取效果较好,二氯甲烷相较于正戊烷、乙醚,对杂环类化合物萃取效果较好。古井贡酒中共定性出188种挥发性成分,包括酯类化合物74种、醇类化合物26种、芳香族化合物25种、酸类化合物20种、烃类化合物14种、醛酮类化合物8种、含硫化合物8种、缩醛类化合物7种、杂环类化合物4种、内酯类化合物2种。其中167种化合物通过标准品比对进行准确定性。     

扁豆几丁质酶基因的克隆及表达

以扁豆总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增到长度为885 bp的扁豆几丁质酶基因cDNA,其编码294个氨基酸,目的蛋白的分子量为28.429 kDa.以该基因构建pET-21a-chi表达载体并在E.coli BL21(DE3)中表达.30℃下,用0.1 mmol.L-1IPTG,诱导5 h,表达产物的酶活力为36.25 U.mL-1.通过常压Sephadex G-50凝胶过滤色谱,DEAE-650C常压与高效离子交换色谱对表达产物进行纯化.目标蛋白达到电泳纯(SDS电泳一条带),几丁质酶的比活力108.42 U.mg-1.表达的蛋白质产物主要以可溶性形式存在.