Bt毒蛋白基因重组大肠杆菌的杀虫活性研究

本文对Bt毒蛋白基因(cry1Aa)重组大肠杆菌(ECE52)的发酵条件及杀虫活性进行了研究,结果表明该菌在37℃下培养或发酵8～12h较为合适.经超声波破碎的菌体对家蚕4龄幼虫有较强的毒性,用62.5×10-6g/mL的菌体稀释液处理过的桑叶饲喂4龄家蚕幼虫12h,96h内死亡率达100%.当浓度分别为125×10-6g/mL、250×10-6g/mL、500×10-6g/mL时,供试幼虫在72h,48h,24h内全部死亡.饲喂后24h,48h,72h的LC50值分别为0.101×10-3g/mL、0.045×10-3g/mL、0.028×10-3g/mL.     

麻疯树雌雄花分化对4种外源激素的响应

为了探究激素对麻疯树Jatropha curcas L.花芽分化的影响,寻求诱导雌花分化的最佳激素及浓度处理,提高其雌雄比例,本文以4年生麻疯树为研究对象,采用4种可促雌分化的激素(IAA、6-BA、NAA、乙烯利)对花芽期的麻疯树进行诱导试验,确定对麻疯树雌花诱导效果最佳激素种类及浓度配比。4种激素对麻疯树都有一定的促雌分化效果,IAA最适浓度为60 mg/L,对麻疯树雌花的诱导率最高达70.97%;NAA最适浓度为60 mg/L,对麻疯树雌花诱导率最高达54.84%(主要是抑制雄花分化,提高其雌雄比);6-BA最适浓度为60 mg/L,对麻疯树雌花诱导率最高达20%;乙烯利最适浓度为1 440 mg/L,对麻疯树雌花诱导率最高达41.94%。经IAA处理后,麻疯树座果率高达98.83%,同时提高了种子质量,而种子含油率没有显著提高。综合分析比较,最终确定喷施浓度为60 mg/L的IAA是提高麻疯树雌雄比例最适宜的激素,其雌雄比为1∶12.0,坐果率49.96%。     

巴东醉鱼草杀虫活性成分的初步分离及活性追踪

采用杀虫活性追踪和化学分离相结合的方法对巴东醉鱼草95%乙醇提取物的石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物进行活性成分分离,在5mg/mL的体积质量分数下,石油醚萃取物经一级柱层析所得馏分AG的活性最高,对3龄粘虫24h,48h和72h拒食率分别达58.44%,79.77%和71.52%,对5龄菜青虫24h和48h拒食率分别达89.03%和72.73%;乙酸乙酯萃取物经一级柱层析所得馏分BB对3龄粘虫24h,48h和72h拒食率分别达97.34%,100%和100%,对3龄小菜蛾24h和48h拒食率最高分别达97.33%和99.46%.实验结果表明,经过一级柱层析后,石油醚萃取物杀虫活性物质主要分布在AG段,乙酸乙酯萃取物杀虫活性物质主要分布在BA,BB和BC段.     

赤霉素诱导麻疯树雌雄花分化的研究

为了探究外源喷施赤霉素(GA₃)对麻疯树花芽分化的影响,寻求赤霉素诱导雌花分化的适宜浓度,提高雌花比例,以3个麻疯树无性系为材料,用不同浓度的赤霉素喷施麻疯树花序芽,调查与花枝生长、花芽分化以及果实特性相关的14个性状,并进行数据分析。结果表明:赤霉素处理后,花序中花枝并未增多,雌雄花数量以及雌雄花比例均高于对照,且40 mg/L的赤霉素处理效果最佳,可显著促进雌花发育; 单花序果实数量增加,单果均质量、出籽率、百粒质量和种子含油量均显著低于对照; 在试验范围内,随着赤霉素浓度的提高,麻疯树花枝逐渐枯萎,1 200 mg/L赤霉素处理后的花枝全部枯萎,无果实采收。赤霉素的处理效果比较稳定,40 mg/L赤霉素可显著促进雌花发育。     

瑞香狼毒提取物杀虫活性研究

就瑞香狼毒根乙醇提取物(简称SCEE)对菜粉蝶、桃蚜和亚洲玉米螟的生物活性进行了测定.当试虫为菜粉蝶五龄幼虫时,采用夹毒法测定,SCEE处理2天后胃毒作用的LD?52为每头12.32og;采用叶蝶法测定,当SCEE浓度分别为5mg@mL-1时,处理7天后其校正死亡率为100%;采用叶碟法测定,SCEE对其AFC50为0.381 3mg@mL-1.当试虫为桃蚜时,采用浸叶法测定,SCEE处理2天后,其LD50值为0.592 2mg@mL-1.当试虫为亚洲玉米螟三龄幼虫时,采用食料混药法测定,SCEE处理7天和14天后,其校正死亡率分别为65.52%和85.52%.以上结果表明,SCEE对菜粉蝶幼虫、桃蚜和亚洲玉米螟幼虫具有很强的杀虫活性.     

瑞香狼毒活性成分对东亚飞蝗的生物活性和病理学研究

采用活体生物试验方法进行活性跟踪,选取瑞香狼毒对东亚飞蝗毒杀活性最高的石油醚萃取部分,测定瑞香狼毒活性成分对东亚飞蝗的生物活性及其中肠消化道的组织病理学影响.结果表明:瑞香狼毒活性成分对东亚飞蝗具有拒食、触杀、胃毒活性及生长发育抑制作用,其中拒食活性最为显著,24h、48h拒食中浓度(AFC50)分别为317.63、113.20mg/L;96h触杀致死中浓度(LC50)、胃毒致死中浓度(LC50)分别为548.21mg/L、2486.19mg/L;生长发育抑制作用也十分明显,48h生长发育抑制中浓度(EC50)为39.75mg/L.东亚飞蝗中肠组织病理学变化研究结果表明,瑞香狼毒萃取物可破坏东亚飞蝗中肠的正常组织结构,引起其中肠柱状上皮细胞脱落坏死.     

麻疯树根高效再生体系的建立及不定芽起源研究

为了克服现有麻疯树快繁技术的不足,分别以麻疯树胚根和子叶外植体诱导的不定根为外植体诱导不定芽.麻疯树子叶不定根诱导的最佳培养方式为:MS+5 mg/L IBA上培养4天,然后转至MS0培养基上生根.诱导生根率和生根数分别达到93.33%和6.54个/外植体.子叶不定根诱导不定芽的最佳培养基是MS+3.0 mg/L 6-BA+3 mg/L IAA,诱导率达到83.33%.麻疯树胚根的最佳不定芽诱导培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IBA,分化率达67.80%,平均出芽数为3.25个/外植体.对麻疯树胚根再生的各阶段进行了石蜡切片观察,明确了不定芽起源于根的薄壁细胞层.与现有技术相比,本方法具有周期短、再生效率高的特点.     

天葵石油醚油状粗提物对菜青虫、小菜蛾的拒食活性研究

研究报道了石油醚油状粗提物对菜青虫、小菜蛾的拒食作用。结果表明石油醚油状粗提物具有明显的拒食活性,对菜青虫、小菜蛾幼虫的选择性拒食作用中浓度AFC50分别为1.51mg/mL、1.82mg/mL;非选择性拒食作用中浓度AFC50分别为1.94mg/mL、4.78mg/mL。8mg/mL处理后24h对试虫的选择性拒食率分别为89.17%、82.41%;非选择性拒食率分别为75.68%、67.05%。     

5种中草药提取物对菇蝇的毒杀活性

采用药膜法,以清水为阴性对照,测定了5种中草药提取物对菇蝇的毒杀活性,结果显示:在供试的5个浓度下,百部和苦参对菇蝇的毒杀活性显著,在50 mg/mL质量浓度下,处理12 h后,百部、苦参对菇蝇的毒杀活性分别是85.00%和81.67%,处理24 h,均达到了100.00%.川楝子、龙胆草、透骨草次之.通过LC₅₀的测定,结果显示,百部、苦参24 h毒杀LC₅₀分别是13.790 mg/mL和18.668 mg/mL.田间防效试验表明:百部和苦参提取物对菇蝇具有良好的药效,用药3天的防效分别达到73.66%和71.27%,用药7天后维持在75.00 %左右,与清水对照相比防效显著.建议在生产中轮流使用50 mg/mL的百部提取物和75 mg/mL的苦参提取物,在菇蝇发生初期及时喷雾防治.     

瑞香狼毒中杀灭菜青虫活性成分的提取与分离

采用无水乙醇对瑞香狼毒杀虫活性成分进行总提,然后采用萃取、柱层析等方法并结合活性跟踪,从总提物中分离纯化杀灭菜青虫的活性成分．结果从中获得了1个高活性化合物．该化合物对菜粉蝶3龄幼虫的拒食中浓度(AVC50)是154．5mg／L,触杀活性的致死中浓度(LC50)是582．5mg／L,为进一步利用瑞香狼毒创制新型无公害植物农药奠定了基础．     

不同产地麻疯树的抗冷性研究

对三个不同产地的麻疯树用8℃的低温胁迫处理,以研究麻疯树的抗冷性.结果表明低温胁迫对麻疯树造成明显伤害,使麻疯树幼苗叶绿素含量减少,根系活力降低,生物膜的通透性增大.但各产地的麻疯树受冷伤害的程度不同,说明其抗冷性不同.三个产地的麻疯树幼苗的抗冷性永胜的最强,攀枝花的次之,红河的最弱.     

PMA对人肝癌细胞中Ha-ras基因启动子活性的影响及与PKC活性的相关性

为探讨佛波脂PMA的生物作用与癌基因ras表达及与PKC信号通路的相关性,用人肝癌细胞BEL-7402为模型,以荧光素酶为报告基因观察了PMA对Ha-ras启动子活性的影响.当用100μg/L PMA长期处理人肝癌细胞BEL-7402时,可明显抑制肿瘤细胞生长.通过RT-PCR和Western Blot分析发现,PMA处理后的BEL-7402细胞中Ha-ras mRNA和蛋白水平均明显下降.进一步观察了PMA对Ha-ras基因启动子活性的影响.通过构建含有Ha-ras启动子序列的、以荧光素酶为报告基因的pGL3-ras真核表达载体,利用脂质体瞬时转染技术将其转入BEL-7402细胞中,并通过荧光素酶活性的检测,发现PMA作用48和72h后的BEL-7402细胞中,Ha-ras启动子活性分别被抑制了55%和54%,同时PKC活性分别下降了76.7%和75.7%.并进一步观察到PKCα和βⅠ蛋白水平明显降低.实验结果表明,PMA长期处理的人肝癌细胞可通过抑制Ha-ras启动子的活性使Ha-ras基因表达被抑制,并且可能与PKC信号通路有关.     

麻疯树叶多酚的提取及其抗氧化作用

在单因素实验的基础上,采用正交实验法对麻疯树叶多酚提取时间,液料比,提取温度等提取条件进行优化,并采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法,还原力法和β-胡萝卜素漂白法检测麻疯树叶中多酚类物质的抗氧化能力.试验确定麻疯树叶多酚类物质的提取最佳工艺为:40%乙醇,50℃,料液比1∶40,提取80min.麻疯树叶多酚的抗氧化能力较强,其清除DPPH自由基的EC50为0.15mg/mL,还原力测定的EC50为2.06mg/mL,β-胡萝卜素/亚油酸体系中测定BHT和麻疯树叶提取物都有抑制作用.麻疯树叶多酚类物质具较好的抗氧化作用.     

干旱胁迫下外源钙对麻疯树相关生理指标的影响

以0.01,0.05,0.1 mol/L CaCl2溶液浸泡麻疯树种子及以0.01 mol/L Ca(NO3)2喷施麻疯树幼苗叶片.测定了不同条件和处理时间下种子萌发率、叶片相对含水量、脯氨酸（Pro）含量、丙二醛(MDA)含量等指标,考察麻疯树在干旱胁迫下相关生理指标的影响.实验结果表明,CaCl2溶液浸种提高了干旱条件下叶片相对含水量和Pro含量,降低了叶片的MDA含量;低浓度CaCl2溶液浸种（≤0.05 mol/L）能促进麻疯树种子的萌发势和萌发率,其中以0.01 mol/LCaCl2溶液浸种效果最好.叶片喷施Ca(NO3)2显著提高了PEG胁迫下麻疯树幼苗叶片的相对含水量和Pro含量,降低了MDA含量.因此,外源钙能提高麻疯树幼苗的抗旱性,增强干旱胁迫下的渗透调节作用,保护细胞质膜的结构,调节干旱胁迫导致的生理反应.     

间接酶联免疫法检测麻疯树核糖体失活蛋白

建立了基于单克隆抗体的间接非竞争酶联免疫法用于检测麻疯树核糖体失活蛋白的含量.优化单克隆抗体最佳工作浓度为312.5ng/mL,辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG最佳工作浓度为200ng/mL.该方法的线性范围为25~300ng/mL,线性回归方程为y=0.0024x+0.0322,相关系数R2=0.9985,定量检测限25ng/mL,定性检出限3.0336ng/mL.试验证明该方法准确度较高,且具有较好的重复性和特异性,可以用于实际检测麻疯树种仁核糖体失活蛋白的含量.     

麻疯树幼苗耐旱的保护性应答

采用聚乙二醇(PEG6000)胁迫,研究了干旱胁迫条件下麻疯树幼苗叶组织中抗氧化系统的变化.结果表明:在0～60 h胁迫中,麻疯树幼苗叶片相对含水量(Rwc)明显下降;处理36 h内,丙二醛(MDA)含量略有增加,但增幅不大,叶绿素含量增加;处理36 h后,MDA含量大幅增加,叶绿素含量逐渐下降;抗坏血酸(ASA)含量...     

新疆产细虫草菌醇提物抗氧化及抗肺癌活性研究

利用DPPH自由基清除能力与总还原能力分析,对新疆产细虫草发酵菌丝体的菌醇提物(OGPDC)的抗氧化能力进行测定.MTT分析OGPDC对肺癌A549细胞增殖的抑制作用.抗氧化结果表明OGPDC具有较好的清除DPPH自由基及总还原能力,且清除自由基和总还原能力随着醇提物浓度的升高,逐渐增强,清除DPPH自由基的IC50值为1.952 mg/mL;MTT结果显示OGPDC对肺癌A549细胞增殖有一定的抑制作用,随着浓度提高而增强,处理48 h时药物的IC50值为10.87 μg/mL.另外,利用用流式细胞仪检测OGPDC作用48 h后肺癌A549细胞周期变化及凋亡率,其总凋亡率高于仅加培养液的对照组,最高总凋亡率为34.77%,使A549细胞周期阻滞在G0/G1期.结果表明新疆产细虫草菌醇提物(OGPDC)在一定的浓度范围内具有抗氧化及抗癌活性,暗示新疆产细虫草发酵菌丝体具有重要的开发利用价值.     

侧蒿挥发油化学成分及抗氧化、抑菌活性研究

采用同时蒸馏萃取法(SDE)提取侧蒿全草挥发油,通过气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术鉴定其中化学成分,采用峰面积归一化法确定各组分的相对百分含量,并对挥发油体外抗氧化活性和抑菌活性进行测试.采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法测定侧蒿挥发油体外抗氧化活性,以及其对5种供试菌的抑菌活性.结果表明：侧蒿挥发油共鉴定出37种化学成分,占总含量的76.93%,其中主要成分为石竹烯及其氧化物、桉树脑、樟脑、龙脑、萜品烯-4-醇、大根香叶烯D等.侧蒿挥发油对DPPH具有一定的清除能力,但清除效果弱于维生素C(Vc);侧蒿挥发油对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、黑曲霉有较好的抑菌效果,最小抑菌浓度(MIC)分别为0.25 mg/mL、8.0 mg/mL、2.0 mg/mL.     

高温下两种不同生态型麻疯树叶片光能利用和分配特性的比较

比较了高温对来源于海南和贵州的2种不同生态型麻疯树的光能利用和分配特性的影响.结果表明,温度升高引起了2种麻疯树叶片PSⅡ最大光能转化效率（Fv/Fm）的降低和初始荧光（Fo）的上升,部分抑制了PSⅡ的功能.与贵州麻疯树相比,海南麻疯树在中度高温胁迫（30～40℃）时,增加了对过量激发能的热耗散能力,使其维持较高的光能转化效率.当温度升至45℃,虽然热耗散机制受到破坏,海南麻疯树仍然有7%的光能用于光化学反应,而贵州麻疯树的这一比例降为0%.本研究的结果表明,海南麻疯树比贵州麻疯树具有更强的高温耐受能力.     

三种胁迫预处理对麻疯树幼苗抗冷性的影响

将经过干旱(基质含水率低于6.0%)72 h、低温((10±1)℃)72 h、盐(0.25 mol/L NaCl溶液)120 h预处理的3组麻疯树(Jatropha curcasL.)幼苗,与对照组一起置于低温((2±1)℃)条件下72 h,测定其间叶片的电解质相对渗漏率和叶鲜重等的变化。结果表明:与对照相比,经预处理的幼苗在2℃左右低温下除生长状况较好外,叶片电解质相对渗漏率显著降低,叶鲜重受影响较小。换言之,不同胁迫预处理能有效地提高麻疯树幼苗的抗冷性,说明麻疯树幼苗具有一定的交叉适应能力。