枯草杆菌6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及部分性质研究

采用DEAE—Sephaurose离子交换层析，Blue-Seplaarose CL-6B特异结合层析和Sephadex G-200凝胶过滤技术，对枯草芽孢杆菌中的6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶进行了分离纯化，纯化倍数为112．3倍，比活为1．46U／mg，回收率为8．2％，纯化酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一带，测得全酶相对分子质量为107kD，具有两个分子量相同的亚基，亚基相对分子质量为51kD，最适pH值为8．0，最适温度为30℃，对热不稳定，以6-磷酸葡萄糖酸和NADP^ 为底物，其Km值分别为Km1(NADP^ )=19．8μmol／L和Km2(6-GPA)=22．6μmol／L，在5mmol／L～50mmol／L浓度范围内，Mg^ ，Ca^2 和Mn^2 对酶有激活作用，Fe^3 和Cu^2 对酶有抑制作用，K^ ，Na^ ，Cl^-，NO^-3，SO^-4对酶几乎没有影响，用PMSF，TNBS，NBS，DTT和BrAc对酶进行修饰，实验结果表明，丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸和组氨酸残基可能是该酶活性中心的功能基团。     

油菜籽焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶的动力学研究

采用DEAE-Sephadex A-50及磷酸纤维素柱层析,用底物亲和洗脱法从萌发油菜(Brassica napus)种子中分离纯化了焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶(PFP).纯化倍数679.7倍,比活力为21.75 单位/毫克.蛋白,活力回收率22.9%.酶的最适pH值为7.5,Mg2+和M2+n对酶有激活作用.进行酶的初级动力学及稳态动力学研究,对果糖-6-磷酸(F6P)表现为典型的米氏规律,Km值为3.33 mmol/L;对焦磷酸(PPi)的活力变化,在PPi浓度小于1.0 mmol/L时具有部分米氏酶特点(Km＝1.0 mmol/L),大于1.0 mmol/L时,PPi对酶有抑制作用.从两底物F6P和PPi的相互作用以及产物磷酸(Pi)与底物(F6P和PPi)的相互关系分析,初步推断油菜籽PFP的催化反应为双底物双产物的有序机制.     

猪脾血红素加氧酶的纯化和某些性质研究

通过DEAE——纤维素层析.羟基磷灰石层析及Sepharose CL-6B层析,从猪脾中获得了纯的血红素加氧酶。纯化的酶在聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS-聚丙烯酰胺电泳中均呈现现单一条带。测得该酶分子量约为30500道尔顿,含272个氨基酸残基。氨基酸组成分析表明该酶中谷氨酸、谷氨酰胺含量丰富,而半胱氨酸和色氨酸含量低。在280nm处具有较低的消光系数(E1%1cm=8.12),而在406nm处具有强烈的光吸收。Triton×-100和EDTA对酶有稳定作用。     

猪末端转脱氧核苷酸酶的分离纯化

末端转脱氧核苷酸酶催化脱氧垓苷三磷酸连接到单链多聚脱氧核苷酸的3′—OH末端。猪胸腺匀浆抽提液,经磷酸纤维素吸附层析,硫酸铵分级沉淀,DEAE—纤维素负吸附,葡聚糖凝胶G100过滤和两次羟基磷灰石柱层析,分离后得到该酶,纯化倍数达2736倍。葡聚糖凝胶G100过滤分离出三个活力峰,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示其分子量分别为60000,53000和32000道尔顿,其中53000组分比活最高,达每毫克蛋白3135活力单位。     

功能性食品配料--丝素的性质和应用

采用电泳法对可溶性丝素粉末的性质进行研究 .十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)图谱表明 ,透析法制备的丝素粉末分子量主要分布在 30kD左右 ,超滤法制备的为 4 0kD左右 ;聚丙烯酰胺等电聚焦电泳 (IEF)结果表明 ,丝素的等电点分布广泛 ,等电区在pH 6 .1- 6 .6 ,4 .8- 5 .3以及pH 3左右 .在蛋糕配料中添加 0 .5 % - 1% (W /V)的丝素 ,改善了蛋糕的品质 .     

红酵母苯丙氨酸解氨酶的分离纯化及性质研究

采用玻珠破壁 ,硫酸铵分级沉淀 ,凝胶过滤和离子交换等方法 ,从L 苯丙氨酸工业生产菌株红酵母中分离纯化苯丙氨酸解氨酶 (PAL) ,纯化倍数为 1 39,收率为 1 2 6%,纯化到的酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳均为单一蛋白带 ,其亚基分子量约为79.4kD该酶最适反应温度为 40℃ ,最适反应pH为 8.5 ,以L Phe为底物 ,40℃ ,pH 8.5的Km值为 3 87× 1 0 - 4 mol/L 除了Mg2 +和Na+,其它金属离子如Fe3+,Cu2 +,Co2 +,Hg2 +等对其都有明显的抑制作用 .     

黄鳝超氧化物歧化酶的纯化和部分性质研究

黄鳝超氧化物歧化酶粗酶液，经过正丁醇脱脂，丙酮分级沉淀，DEAE-琼脂糖离子交换层析和Sephacryl S-200凝胶过滤，从黄鳝中分离纯化获得铁超氧化物歧化酶(Fe-SOD)，并对其性质进行研究，最终该酶的比活力为1500U／mg，提纯倍数为368．5．回收率为24．7％．该酶对KCN不敏感．而对H2O2敏感，对热较稳定，对酸碱有较强的耐受性，抗胃蛋白酶的破坏，聚丙烯酰胺凝胶电泳和等电点聚焦电泳结果表明：纯化酶蛋白呈一条带，酶分子量约为85kD，亚基分子量约为16．5kD，等电点为7．15。     

扩展青霉(Penicillium expansum)PF868脂肪酶的纯化及氨基酸序列测定

扩展青霉 (P. expansum) PF868所产脂肪酶通过硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素柱层析以及Sephacryl 200柱层析等步骤被纯化了74倍,最终比活力为69.7 u/mg.纯化后的脂肪酶经过SDS-聚丙烯酰胺电泳和微内径高效液相色谱仪检测分别达到了SDS-PAGE纯和微内径高效液相色谱纯.分子量经SDS-PAGE确定为28.44 kD. 脂肪酶N-端氨基酸序列测定的结果是:ATADAAAFPD--这与其他一些真菌产的脂肪酶的序列具有较大的同源性.     

高渗物质对α-磷酸甘油酯酶活性的影响

α-磷酸甘油酯酶是催化甘油生成的最后一步反应的酶,该酶具有高度的底物专一性.本文研究了高渗物质NaCl、KCl和甘露醇在不同浓度下对该酶活性的影响.结果表明,同一高渗介质的不同浓度对α-磷酸甘油酯酶的活性有不同程度的影响.其中氯化钠的影响程度最大,氯化钾的影响程度次之,甘露醇的影响程度最小.相同浓度的同一高渗介质,在不同的时间点上,该酶的活性大小也不相同,比酶活的峰值所对应的高渗介质的浓度随时间逐渐减小.     

麻疯树过氧化氢酶的分离纯化

麻疯树种仁经抽提、硫酸铵盐析、Phenyl Sepharose CL-4B层析、DEAE-Sepharose F.F.层析,获得了纯化的麻疯树过氧化氢酶(CAT).该酶比活力为69.23 U/mg,纯化倍数为37.63倍.经Sephacryl S-300 HR测定,该酶表观分子量为232 kD,SDS-PAGE显示为一条分子量为59 kD的条带,表明该酶是由四个相同的分子量为59 kD的亚基组成.经等电聚焦测定该酶的等电点为4.7.经过温度和pH考察,该酶最适温度为30℃,最适pH为7.0.Mn~(2+)对酶活有促进作用,Zn~(2+)、Cd~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Co~(2+)有抑制作用.6×10~(-3)mmol/L NaN_3以及0.9 mmol/L KCN能使酶活丧失.该酶的V_(max)和K_m分别为5 U/mL·min,1.5 mmol/L.     

双孢蘑菇子实体超氧化物歧化酶(SOD)的分离纯化及部分性质

采用硫酸铵分级盐析、DEAE-Cellulose-52离子交换柱层析、Sephadex G-150分子筛柱层析分离纯化了双孢蘑菇(Agaricus bisporus)子实体超氧化物歧化酶.纯化了31倍,回收率为10.51%,纯酶比活力为5 512.6 u/mg,酶的最适作用温度为25 ℃,最适pH值为8.0,酶在25 ℃以下比较稳定,亚基分子质量为21 kD,全酶分子质量为43 kD, 该酶由2个相同的亚基组成.     

黑曲霉(UV—11)葡葡糖淀粉酶的分离纯化和酶的多型性性质的初步研究

以黑曲霉UV—11的工业酶制剂为材料,分离纯化葡萄糖淀粉酶。蒸馏水抽提,硫酸铵盐析,凝胶过滤脱盐和DEAE一纤维素DE_(52)柱层析,得到4个部分(峰Ⅰ—Ⅳ),4个部份提纯0.92—1.84倍,酶活收率为26.6％。黑曲霉UV—11葡萄糖淀粉酶具有多型性,经聚丙烯酰胺凝胶水平板电泳共分出5条区带。粗酶和纯化的酶经电泳染色结果表明黑曲霉UV—11葡萄糖淀粉酶为一种糖蛋白。     

用快速蛋白液相层析（FPLC）法纯化文昌鱼酸性磷酸酶

从厦门文昌鱼体内提纯了一种酸性磷酸酶，用快速蛋白液相层析法（ＦＰＬＣ）的Ｓｕ－ｐｅｒｏｓｅ１２柱和ＭｏｎｏＳ柱对其进一步纯化，用聚丙烯酰胺凝胶电泳和ＦＰＬＣ的Ｓｕｐｅｒｏｓｅ１２柱鉴定为单一纯的酶制剂．它的分子量为５２０００，经ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定该酶为二聚体．酶的提纯倍数为６１２．５２．     

家兔中性粒细胞防御素的纯化及其对念珠菌抗菌活性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化兔中性粒细胞防御素,兔中性粒细胞防御素NP2具有抗白念珠菌M1012R,INH A-207,乳酒念珠菌,热带念珠菌和高里氏念珠菌等菌的活性,具抗菌活性随防御素浓度的升高而增强。     

Tat短肽跨膜递送作用的研究(I)——模型蛋白Tat-GFP在毕赤酵母中的表达与纯化

为探讨Tat短肽的跨膜递送作用,利用DNA重组技术在毕赤酵母表达系统中表达融合蛋白Tat-GFP,通过硫酸铵沉淀、SephadexG-75凝胶色谱和POROS-20HQ离子交换色谱分离纯化该融合蛋白.表达和纯化了分子量约为29kD的融合蛋白Tat-GFP,在经融合蛋白作用的细胞内检测到融合蛋白的存在.这个结果可望为外源性蛋白进行细胞内治疗提供一种新的工具.     

雅致放射毛霉AS3.2778碱性蛋白酶的制备及应用

毛酶蛋白酶对大豆蛋白具有较高的水解效率以及对蛋白水解物良好的脱苦效果,因此在大豆多肽的制备方面显示出很好的应用前景。为了开发这一蛋白酶系,采用离子交换,疏水层析及凝胶层析对其进行了分离纯化,从雅致放射毛霉As3.2778的发酵麸曲中分离纯化出一种蛋白酶,其纯度提高了22.7倍,酶活回收16.1%,最终比酶活可达到6094u/mg。电泳分析发现,该蛋白酶在还原及非还原条件下均显示出单一条带,表明该酶已达到电泳纯,并且是一单体蛋白,其分子量大约在32KDa。酶谱分析表明,纯化的蛋白酶仅为原发酵麸曲中三种蛋白酶组分中的一种。以大豆蛋白为底物,探讨了纯化后的蛋白酶对大豆蛋白的水解效果。结果显示,该蛋白酶在55℃,pH8.0～10.0的条件下对大豆蛋白显示出较强的水解能力。对比实验发现,纯化的毛酶蛋白酶对大豆蛋白的水解效果优于Papain、Alcalase及Protamex,表明该蛋白酶具有更为广泛的肽键选择性,对大豆蛋白亲和力更强,在大豆蛋白肽链上存在相对较多的酶切位点。     

中华锯齿米虾卵黄蛋白的纯化鉴定

为了研究中华锯齿米虾卵黄蛋白的性质,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用不同的染色方法对其进行分析鉴定,并采用电泳洗脱法从中华锯齿米虾成熟卵巢中将其分离纯化.研究结果表明,中华锯齿米虾成熟卵巢中的卵黄蛋白为糖脂复合蛋白,该蛋白分子质量为434 ku.利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析该卵黄蛋白由3个主要亚基组成,分子质量分...     

对生玉米5-氨基酮戊酸脱水酶的简单快速纯化

以聚乙二醇６０００分级沉淀、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ,ＰｈｅｎｙｌＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析和制备电泳初步纯化了对生玉米的５－氨基酮戊酸脱水酶,它在ｐＨ８．５时比活为３１Ｕ／ｍｇ蛋白,酶纯化了１１２倍,得率为１２％,其亚基分子量为４１ＫＤ,它可以用于酶促合成胆色素原,也可用于联合法测定胆色素原脱氨酶的酶活     

利用两种电泳技术分析番茄品种醇溶蛋白及其亲缘关系

本文利用番茄种子醇溶蛋白电泳图谱鉴定番茄各个品种之间的亲缘关系,采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对枣庄市售10种番茄品种的醇溶蛋白电泳图谱的分析.结果表明：不同物种间的醇溶蛋白谱带存在一定差异且这种差异反映一定的关系.10种番茄醇溶蛋白分离谱带8条,大部分具有5条相同谱带,少部分谱带数量较少,最少谱带4条,经过遗传相似性与遗传多样性分析番茄的亲缘关系,经过遗传多样性聚类分析,将10种番茄在一定水平上,聚为5类.为枣庄番茄品种的亲缘关系分析以及遗传育种工作提供了依据.     

海生红藻多管藻R-藻蓝蛋白亚基组成及特性

以海生大型红藻多管藻(Polysiphonia urceolata)为材料,经Sephadex G-150凝胶过滤和DEAE-Sepharose FF离子交换层析,从藻胆蛋白提取液中分离纯化出在非变性电泳和非变性等电聚焦中均表现单一条带的R-藻蓝蛋白(R-phycocyanin,R-PC),等电点为5.6.SDS-PAGE、变性等电聚焦及二维电泳分析表明,所得R-PC含有1种分子质量为18.2kD、pI为6.5的α亚基α16.85.2,含有分子质量为20.0kD和20.9kD、pI为5.5和5.6的4种β亚基β52.05.0、β52.05.9、β52.06.0和β250..69.该结果为深化R-PC的结构功能研究提供了有价值的实验依据.