ITN4-C相互作用蛋白的筛选与鉴定

我们的前期工作发现过表达RTN4-C基因能够抑制肝癌细胞株SMMC7721的生长并且促进其发生凋亡．为了进一步了解RTN4-C促进凋亡的机制，本文采用酵母双杂交的方法从小鼠7d胚胎文库中筛选其相互作用的蛋白．最终筛选到其同源家族成员RTN3．进一步采用间接免疫荧光和及构建的荧光载体表明，RTN4-C和RTN3蛋白在HEK293和Hela细胞中发生共分布．本研究为进一步阐明RTN4-C抑制细胞生长和促进细胞凋亡的机制提供了新的依据．     

茶氯香酰胺脂质体对人肝癌细胞生长和迁移的抑制作用

以茶氯香酰胺脂质体(TClC-L)为研究对象,研究其对人肝癌细胞(SMMC7721)生长和迁移的影响,并且探索其作用的分子机制,为研发抗肝癌新药提供科学依据.应用MTT法检测TClC-L对SMMC7721细胞生长的影响;应用划痕法和细胞流式分别检测TClC-L对SMMC7721细胞迁移和死亡的影响;应用Hoechst 33258染色检测SMMC7721细胞凋亡形态学变化;应用Western blotting技术检测TClC-L对SMMC7721细胞生长、凋亡和迁移密切相关蛋白表达的影响和其可能作用的分子机制.结果显示,TClC-L对SMMC7721细胞生长有显著的抑制作用,显示出剂量和时间的依赖性关系; TClC-L能够显著地降低SMMC7721细胞的迁移能力,促进其凋亡; TClC-L显著上调抑制肝癌细胞生长和诱导癌细胞凋亡的相关蛋白因子Bax、Caspase-3、PARP和迁移抑制因子E-cadherin蛋白的表达水平,下调促进细胞生长和迁移以及抗凋亡的相关蛋白因子Bcl-2、HGF、cMet、NF-κB、MMP9、VEGFR2、c-Myc蛋白的表达水平. TClC-L抑制人肝癌细胞SMMC7721的生长和迁移作用的分子机制涉及到HGF/c-Met/VEGFR-NF-κB信号通路.     

As4S4诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及相关分子机制研究

研究AS4S4对宫颈癌Hela细胞生长抑制厦诱导凋亡作用，并探讨可能的分子机制。以不同浓度的AS4S4分不同时间段处理Hela细胞，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率；采用流式细胞术测定细胞凋亡；Western blotting测凋亡相关蛋白Bcl-2，Caspase3表达的变化。结果表明，经AS4S4处理的Hela细胞，增殖受到抑制，作用呈明显的时效和量效关系，细胞凋亡率明显增高并呈浓度依赖性；Western blotting示Bcl-2表达下降，Caspase3表达增加。因此，AS4S4对Hela细胞具有增殖抑制和诱导凋亡作用，其机制与下调Bcl-2蛋白、上调Caspase3蛋白表达有关。     

穿心莲内酯通过影响SIRT3-p53信号通路诱导鼻咽癌C666-1细胞凋亡的机制研究

在前期研究工作中发现穿心莲内酯(Andrographolide,Andro)可以抑制鼻咽癌C666-1细胞活力并诱导其凋亡,但相关的分子机制并不清楚.为了明确穿心莲内酯调控C666-1细胞活力的具体机制,本课题组在体外培养的 C666-1 细胞中给予穿心莲内酯处理,并通过 Real-time PCR 检测 Sirutins 家族成员(SIRT1-7)的mRNA表达进行初步筛选;通过siRNA干扰的方法沉默SIRT3之后进一步检测穿心莲内酯对C666-1细胞活力和凋亡的影响;采用Western Blotting的方法检测沉默SIRT3之后穿心莲内酯对C666-1细胞中SIRT3/p53表达的影响.结果表明:穿心莲内酯能够显著增加SIRT3的mRNA表达,而对其它亚型的影响较小;沉默SIRT3能够部分逆转穿心莲内酯对C666-1细胞活力和凋亡的影响;穿心莲内酯可通过影响SIRT3的蛋白表达调控其下游凋亡相关蛋白p53的水平进而诱导细胞凋亡.本实验为进一步研究穿心莲内酯抑制鼻咽癌的机制奠定了基础.     

KLF4沉默与阿霉素诱导的DNA损伤协同抑制肝癌HepG2细胞的生长

探究KLF4沉默与经不同作用浓度阿霉素处理诱导的DNA损伤对肝癌HepG2细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.应用RNA干扰技术,采用siRNA转染HepG2细胞以沉默KLF4基因.采用MTT法检测KLF4沉默前后对HepG2细胞增殖的影响,使用流式细胞术检测KLF4沉默前后对HepG2细胞周期变化影响,应用Western blot法检测转染前后HepG2细胞中KLF4蛋白及细胞周期相关蛋白表达变化.Western blot检测到高浓度的阿霉素促进KLF4的表达,并且低浓度的阿霉素可使得细胞停滞在G2/M期,高浓度的阿霉素则使部分细胞凋亡(19.31%).将KLF4沉默后,发现细胞生长变缓,低浓度的阿霉素处理后,细胞随时间增加而出现更多的细胞凋亡;高浓度的阿霉素处理后,细胞数明显减少,更多的细胞发生凋亡(28.89%),且在KLF4沉默前后均发现低浓度阿霉素促进p53与p21表达,高浓度阿霉素抑制其表达.阿霉素诱导的DNA损伤可提高KLF4的表达,KLF4依赖于DNA损伤激活的p53促进p21的表达,进而引起G1/S期细胞周期阻滞.沉默KLF4与阿霉素诱导的DNA损伤可协同抑制肝癌细胞的增殖、促进凋亡,其在肝癌细胞 HepG2中扮演十分重要的角色.     

茶溴香酰胺脂质体对黑色素瘤细胞生长和迁移的抑制作用

考察茶溴香酰胺脂质体(TBrC-L)对黑色素瘤B16细胞生长和迁移的抑制作用及其分子机制,为研发抗癌新药提供科学依据.采用MTT法和细胞划痕术探究TBrC-L对黑色素瘤B16细胞生长和迁移的影响; Hoechst 33258染色法观察药物作用下细胞凋亡形态的变化; Western Blotting检测TBrC-L对B16细胞生长、迁移和凋亡相关蛋白表达的影响.结果表明:TBrC-L能对B16细胞的生长和迁移产生显著性抑制作用,并且诱导其凋亡; TBrC-L可下调c-Met、HGF、Bcl-2、NF-κB和VEGFR2的表达,上调Caspase-3、E-cadherin、Bax、p53和Cytochrome c的表达,抑制HGF/Met/VEGFR2-NF-κB通路可能是TBrC-L抑制黑色素瘤B16细胞生长和迁移作用的重要分子机制.本研究结果提示,TBrC-L具有进一步开发为抗黑色素瘤药物的潜力.     

Caspase-3在牛膝多糖诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡中的作用

为研究牛膝多糖对肝癌BEL-7402细胞凋亡及相关蛋白Caspase-3表达的作用,采用不同浓度ABPS作用于肝癌BEL-7402细胞48h,MTT法检测细胞生长抑制率,荧光显微镜观察细胞形态变化,Western Blot检测Caspase-3蛋白表达.实验结果表明,ABPS对BEL-7402细胞具有生长抑制作用,促进细胞凋亡,作用机制可能与上调Caspase-3蛋白表达有关.     

BMP2对骨肉瘤细胞株MG63的作用机制

为探讨骨形态发生蛋白2(BMP2)在体外抑制人骨肉瘤细胞株MG63的增殖和迁移并促使其凋亡的作用机制,分别用绿色荧光蛋白重组腺病毒(AdGFP)、骨形态发生蛋白2重组腺病毒(AdBMP2)感染人骨肉瘤细胞MG63,用RT-PCR和免疫细胞化学法检测核录因子κB(NF-κKB)、有丝分裂素激活蛋白激酶激酶4(MKK-4)的mRNA和蛋白水平变化.结果发现.AdBMP2降低MG63中NF-κB的mRNA水平和蛋白表达,分别为对照组的38.2%和42.5%(P<0.05);但未能检测到对MKK-4表达的影响.研究表明,BMP2可以显著降低细胞中NF-κB的mRNA水平和蛋白水平.这可能是其抑制细胞增殖和迁移、促进凋亡的机制之一.     

恩度对雌激素受体阳性的人乳腺癌细胞生长的抑制作用及其分子机制的研究

研究了重组人血管内皮抑素(恩度)对雌激素受体阳性的人乳腺癌MCF-7细胞株生长的抑制作用与其分子机制.采用MTT法、台盼蓝染色法和中性红染色法检测不同浓度恩度对MCF-7细胞生长的抑制作用,Hoechst33258荧光染色法和TUNEL分析法观察恩度诱导MCF-7细胞凋亡的形态变化,蛋白印迹法检测恩度作用的MCF-7细胞中与生长和凋亡相关蛋白的表达.结果表明,恩度显著性地抑制MCF-7细胞的生长并诱导细胞凋亡.此外,恩度显著性地减少MCF-7细胞VEGFR1,c-Met,ERα,Akt,NF-κB,Bcl-2和CyclinD1蛋白的表达,明显地上调Bax蛋白的表达,其作用的分子机制可能是通过抑制VEGFR1/c-Met/ERα-Akt-NF-κB信号传导通路,下调Bcl-2/Bax蛋白比率、降低CyclinD1蛋白的水平.     

荔枝核提取物对HepG-2细胞生长抑制及凋亡诱导机制的探讨

目的:探讨荔枝核提取物成分L2.3对人肝癌细胞HepG-2的生长抑制作用及其分子机制.方法:MTT法测定样品对HepG-2细胞的增殖抑制,荧光染色观察细胞凋亡;比色法检测样品对HepG-2中caspase-3、caspase-8和caspase-9活性的影响,流式细胞仪检测并分析Fas蛋白表达的变化.结果:L2.3对HepG-2细胞表现出时间及剂量依赖性增殖抑制活性(P<0.05),其半数抑制质量浓度为43.0 μg/mL;处理组细胞中出现致密浓染亮蓝色凋亡小体.较高质量浓度的L2.3处理细胞后,caspase-3、8、9的活性均呈时间依赖性增高(P<0.01),且Fas蛋白的表达也明显上调(P<0.05).结论:荔枝核提取物L2.3对HepG-2细胞有体外增殖抑制活性,并介导 caspase-3、caspase-8、caspase-9活性改变及Fas蛋白表达的上调,以此诱导细胞凋亡的发生.