质粒PBR322—脂质体的制备及其内含DNA的转移

采用改进的逆相蒸发法（ＲＥＶ）制备卵磷脂／胆固醇（７：３，ｍｏｌ／ｍｏｌ）脂质体，并用于包裹荧光特异标记的质粒ＰＢＲ３２２ＤＮＡ，构建了基因转移载体。然后将纯化的质粒ＰＢＲ３２２ＤＮＡ－脂质体与悬浮的白菜原生质体一起温育。经过ＤＮＡ－ＤＡＰＩ荧光复合物的镜检，证明ＤＮＡ被包裹到卵磷脂／胆固醇脂质体内。被包装的ＤＮＡ能有效地避免外源ＤＮＡａｓｃ的降解作用。且质粒ＤＮＡ通过脂质体与原生质体膜的融合可随     

p53蛋白在胃癌和结肠癌中的表达

目的　研究 p5 3蛋白在胃癌和结肠癌中的表达 ,分析其与临床及病理因素的关系 .方法　采用免疫组织化学S P法 ,对外科手术切除的胃癌 2 0例、结肠癌 39例的癌体标本组织中 p5 3蛋白的表达进行检测 .结果　p5 3蛋白在胃癌和结肠癌标本组中阳性的表达在细胞核 ,其阳性表达率在胃癌和结肠癌标本中分别为 80 %和 4 8.7% .结论　p5 3蛋白的阳性表达与肿瘤的浸润深度无关 (P >0 .0 5 ) ,而与肿瘤的分化程度及淋巴结转移呈相关关系 (P <0 .0 5 ) .     

p53蛋白对HL-60肿瘤细胞凋亡率的影响

实验以人白血病HL-60细胞为实验对象,观察p53蛋白对HL-60细胞凋亡的影响。采用吖啶橙（AO）荧光染色法分析p53蛋白对HL-60细胞生长的影响,所呈现的量效和时效关系,运用形态学、吖啶橙荧光染色法、透射电子显微镜观察法检测细胞凋亡。     

应用酵母双杂交技术筛选与p53相互作用的蛋白质

应用酵母双杂交技术筛选与p53发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在肿瘤发生、发展中发挥重要作用的调控机制。采用酵母双杂交技术,以p53C末端（62-393aa）作为诱饵筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质．并运用报告基因等实验提供的信息,经过重复验证排除假阳性以确定最后的阳性克隆。以p53C末端（62～393aa）作为诱饵最终筛选出了一个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这一个阳性克隆为：PIAS3（Protein inhibitor of activated stat3）。说明了PIAS3蛋白能与p53（62-393aa）发生特异性的相互作用。     

DNA与抗癌药物道诺霉素相互作用的研究

该文采用荧光光谱法并用溴化乙锭（ＥＢ）作为荧光探针研究了道诺霉素（ＤＲＮ）与ＤＮＡ相互作用的方式。结果表明：ＤＲＮ的生色团能够嵌入ｄｓＤＮＡ双螺旋结构的碱基对之间,ＤＲＮ与ＤＮＡ的主要作用位点是碱基Ｇ、Ｃ;ＤＲＮ插入ｄｓＤＮＡ碱其对中,不会破坏碱基对中氢键,不会影响ＤＮＡ的复性;ＤＮＡ与ｓｓＤＮＡ仅仅存在弱的相互作用。     

胃上皮内瘤和胃癌组织中p53蛋白表达的意义

探讨胃上皮内瘤和胃癌组织中P53蛋白的表达及其临床意义;应用免疫组化SP法对10例慢性胃炎组、30例胃上皮内瘤组及20例胃癌组中P53的表达进行检测;慢性胃炎中无p53表达,随着异型增生程度的增加,p53阳性表达也在增加,胃癌的阳性率最高;p53蛋白在胃上皮内瘤中即显示异常表达,其突变发生于胃粘膜癌变的早期阶段,提示p53基因的缺失、突变与细胞的异型性密切相关。     

免疫PCR方法检测乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体

目的为乳腺癌诊断提供血清学新方法.方法免疫PCR方法检测血清抗p53蛋白抗体,酶免疫组化方法检测组织p53蛋白表达.结果乳腺癌患者血清抗p53蛋白抗体阳性率为39.5%,而非癌患者和正常人血清抗p53蛋白抗体均为阴性,乳腺癌患者血清中抗p53蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人(P＜0.01).p53蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗p53蛋白抗体阳性率为64.2%,明显高于p53蛋白阴性表达组,血清p53抗体测定与p53蛋白表达密切相关(P＜0.01).结论检测血清抗p53蛋白抗体是检测组织p53蛋白理想的替代工具抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.     

基于植物p53保守序列构建RNAi的DNA片段方法

构建p53基因RNA干涉DNA片段的目的,是将其应用于植物悬浮培养中的细胞周期调节.依据拟南芥p53基因与其他高等植物具有高度保守区域的特点,合成其两个区域的核苷酸片段(Ⅰ和Ⅱ)及其相应的反向片段(Ⅰ′和Ⅱ′),并在Ⅱ和Ⅱ′端部分别引入内含子两个端部核苷酸序列.在相互连接后进行PCR选择扩增,其产物再与克隆载体连接并经过蓝白斑筛选获得重组DNA;在电泳和核苷酸测序鉴定后表明,最终得到了Ⅰ–5′–内含子–Ⅱ′–Ⅱ–内含子–3′–Ⅰ′序列的重组DNA片段.该片段两端含多克隆位点,通过插入植物的表达载体进入细胞基因组,在细胞中其转录产物将形成发夹结构,经胞内酶切后可以形成短的双链RNA片段,将具有干涉p53基因表达的功能.     

利用酵母Two-hybrid系统筛选编码产物与p53相作用的人类基因

用酵母ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ系统在人胚胎脑组织ｃＤＮＡ表达文库中寻找编码产物与ｐ５３相互作用的基因。在１．５×１０６个转化子中筛选到６８个初级阳性克隆。通过测定转化子第二轮β－半乳糖苷酶活力发现，人胚胎脑组织ｃＤＮＡ表达文库中有一个阳性克隆中的ｃＤＮＡ编码产物与ｐ５３反应结果为明显阳性，说明两个蛋白之间存在较强的相互作用。用热测序法测得这段ｃＤＮＡ的序列通过查询基因数据库发现，这段ｃＤＮＡ编码人的泛肽交联酶，可认为是泛肽交联酶参与ｐ５３在细胞内浓度的调节。     

DNA与小分子相互作用的研究进展

概述了能与DNA发生相互作用的小分子的种类和不同小分子与DNA相互作用的方式、机理,并对DNA与小分子相互作用研究的常用方法,以及这些方法的特点进行了评述。最后对其发展前景,尤其是对药物分子与DNA相互作用的未来发展方向进行了展望与预测。     

胃癌中p53基因失活及其蛋白产物的免疫组化分析

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂我及免疫组化等方法同步研究２５例胃癌标本的ｐ５３基因突变，杂合性丢失及蛋白持表达，在２２例胃癌中同时获得有关ｐ５３基因突变和杂合性丢失的检测结果，被检出ｐ５３基因突变的５例胃癌中，２例伴有杂合性丢失，３例仅有ｐ５３基因突变。     

Study on the specific interaction between angiogenin and aptamer by atomic force microscopy （AFM）

The specific interaction between angiogenin and aptamer has been investigated by using AFM. The specificity of the interaction is revealed by comparing the binding probability of aptamer to other elements in a series of control experiments. The results have shown that there is specific interaction force between angiogenin and aptamer. Moreover, the single molecular pull-off force between angiogenin and aptamer has also been determined using the Poisson statistical method to be 133.7±11.7 pN. These findings obtained are helpful to the better revelation of recognition mechanism between angiogenin and aptamer, which provided basis for further understanding the inhibition of the aptamer to angiogenic activity.     

Dynamic modeling of cellular response to DNA damage based on p53 stress response networks

Under acute perturbations from the outside, cells can trigger self-defensive mechanisms to fight against genome stress. To investigate the cellular response to continuous ion radiation (IR), a dynamic model for p53 stress response networks at the cellular level is proposed. The model can successfully be used to simulate the dynamic processes of double-strand breaks (DSBs) generation and their repair, switch-like ataxia telangiectasia mutated (ATM) activation, oscillations occurring in the p53-MDM2 feedback loop, as well as toxins elimination triggered by p53 stress response networks. Especially, the model can predict the plausible outcomes of cellular response under different IR dose regimes.     

盐酸川芎嗪与牛血清白蛋白相互作用的研究及共存金属离子的影响

在优化的实验条件下,利用光谱法研究盐酸川芎嗪(LH)和牛血清白蛋白(BSA)的相互作用和共存金属离子(Mg2+、Cu2+、Zn2+、Ni2+、Fe3+)对LH与BSA相互作用的影响.结果表明:LH对BSA的荧光有猝灭作用,其猝灭过程属于静态猝灭.通过计算得出LH与BSA的结合常数Kb及结合位点数n.根据热力学参数确定了LH与BSA之间的作用力类型主要为疏水作用力.结合位点位于BSA的亚结构ⅡA中,Hill系数nH1,表明LH有弱的负协同作用.同步荧光光谱显示两者的结合位点更接近于色氨酸,同时也研究了金属离子对二者作用的影响.为后续吡嗪类药物的研发和进一步探讨LH在生物体内与蛋白质的作用机制和生物学效应提供了理论依据.1     

高脂饮食及耐力训练对大鼠腓肠肌p53和IL-6表达的影响

目的:探讨高脂饮食和耐力训练对大鼠腓肠肌p53和IL-6表达的影响.方法:28只大鼠随机分成4组:高脂对照组(H)、高脂耐力组(R)、普通对照组(C)和普通耐力组(E),每组7只,训练8周;末次训练后24h,各组大鼠在安静状态下处死,取腓肠肌.采用ELISA法测定腓肠肌胞浆中p53和IL-6的含量.结果:(1)E组大鼠肌浆中p53的表达显著低于C组(p<0.05),H组与C组比较无显著性差异,R组与E组比较也无显著性差异;(2)H组大鼠肌浆中IL-6的表达显著高于C组(p<0.05),R组也显著高于E组(p<0.05),但 C组与E组比较无显著性差异.结论:高脂饮食不仅会引起大鼠在安静状态时的炎症反应,还会促进大鼠运动时出现的运动性机体改善;耐力训练对大鼠骨骼肌的衰老具有一定的延缓作用,IL-6对长时间的耐力运动具有一定的适应性.     

光谱法研究三磷酸腺苷二钠与牛血清白蛋白的相互作用及共存金属离子的影响

在模拟人体生理条件下,用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法研究三磷酸腺苷二钠(ADT)和牛血清白蛋白(BSA)的相互作用及共存金属离子Mn~(~(2+)),Co~(2+),Cr~(3+),Mg~(2+),Fe~(3+)对两者结合作用的影响.结果表明:ADT对BSA的荧光有猝灭作用,其猝灭过程属于动态猝灭.通过计算得出ADT与BSA的结合常数Kb及结合为点数n.根据热力学参数确定了ADT和BSA之间的作用力类型主要为静电引力.ADT在BSA中的结合位点主要位于亚螺旋域ⅡA.Hill系数nHill≈1,表明ADT对两者的结合几乎无协同作用.用同步荧光光谱法研究了ADT对BSA构象的影响.此外还详细探讨了共存金属离子对ADT与BSA结合作用的影响.     

金属离子与DNA碱基对间相互作用的理论研究

在B3LYP 6-31G(d,p)水平,全优化Li+、Na+、K+、Cu+、Mg2+、Ca2+、Cu2+、Zn2+、Cd2+、Ba2+、Hg2+(Cd2+、Ba2+和Hg2+用有效实势(ECP)方法处理)与鸟嘌呤(G)-胞嘧啶(C)碱基对配合物的气相结构,通过相互作用能和能量分解分析得出配合物的稳定性顺序和内在规律以及其作用机制和影响因素;后采用Onsager模型,计算在水溶液(ε=78.39)中的单点能量,讨论溶剂效应对各配合物相互作用能及各能量分解项的影响.通过分析表明主族金属离子与GC碱基对间的作用以静电相互作用为主,而副族金属离子与GC对间相互作用中共价作用的成份较大,甚至还可能占主导作用,这可能是配合物间性质及变化规律差异的根源.电荷布居及轨道分析结果均与上述结论一致.