黏细菌分离纯化的研究进展

黏细菌属于原核生物,作为一种可产生丰富而有用的次级代谢物的微生物类群而受到研究者青睐,由于分离纯化黏细菌相当困难和耗时,并且难于培养,同时方法特殊,极大地限制了对这类微生物物种资源的开发,其应用研究较其他的微生物类群更为落后.所以,探索更好的分离纯化黏细菌的方法非常重要.对黏细菌的分离、纯化、纯度检验和菌种保藏等方面已有研究做了较为全面的综述,希望能对研究黏细菌者有一些帮助.     

硫酸盐还原细菌的分离纯化和鉴定

从山西运城盐湖及太原市殷家堡污水处理厂等地采样,共分离到５株硫酸盐还原细菌纯菌株,对它们分别进行了形态学观察及生理生化特性测定,并结合现代分子遗传学方法其中一株鉴定到种,为Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏｄｅｓｕｌｆｕｒｉｃａｎｓ,其余罩株鉴定到属,均归入Ｄｅｓｕｌｆｏｖｉｂｒｉｏ属。     

活性污泥中细菌的分离、纯化与培养

建立精品实验项目＂细菌纯种分离和培养＂,以污水处理厂的活性污泥为实验样品,利用浇注平板法、平板划线法对活性污泥中的细菌进行分离、纯化并得到纯菌菌种。通过精品实验项目的研究与探索,丰富了实验教学内容,激发了学生的学习兴趣,巩固了学生的基本实验技能,加深了学生对微生物基础理论知识的理解,促进了学生创新能力的培养和提高。     

光合细菌中氢化酶的分离纯化及其性质研究

以光合细菌为出发菌株,离心得到的菌体经超声破碎后,得到的粗酶液经硫酸铵沉淀、透析、DEAE-52离子交换层析和Sephadex G-200分子筛凝胶层析分离纯化获得电泳纯的氢化酶,且该酶的分子量为62.0 ku和37.0 ku的两个亚基组成的分子量为99.0ku的二聚体,对该酶进行酶学性质的研究得到酶催化最适温度和pH值范围分别为30℃和pH=7.5,且在25～35℃和pH=7.0～8.0范围内催化放氢活力较稳定.     

嗜热产甲烷杆菌YT—7菌株的分离和特征

采用严格的 Hungate 厌氧技术,从云南省腾冲高温温泉污泥样品中分离一株嗜热自养产甲烷杆菌 YT-7菌株。该菌株细胞呈长杆状,不运动,不形成芽孢,革兰氏染色阳性。在65—70℃下培养时菌体为0.3-0.4×1.5-13μm。分离物仅能利用 H_2/CO_2为能源和碳源,在无机盐液体培养基中生长,细胞最小倍增时间为3.2小时。滚管菌落呈灰白色,半透明,近圆形;落射荧光显微镜检查呈蓝绿色或黄绿色荧光。YT-7菌株的最适生长温度为65—70℃,低于45℃或高于75℃不生长。最适生长 pH 为6.5—7.0。根据形态和生理性状的研究,分离物暂定嗜热自养产甲烷杆菌 YT-7(Methanobacterium thermoautotrophicumYT-7)。     

5株产甲烷细菌的产气效能研究

采用气相色谱法,分析从贵阳青岩沼气池中分离纯化后的5株产甲烷细菌的产气效能,发现5株产甲烷细菌所产生的气体中只含有CH4和CO2气体,并且CH4含量在97.9%以上,而CH4和CO2含量的总和在99.99%以上.     

生孢噬纤维细菌的分离纯化及鉴定

采用纤维素琼脂糖双层平板的方法，由土壤中分离纯化出一株好氧性纤维素降解菌。通过对形态学特征及生理生化学特征的研究，初步鉴定该菌为生孢噬纤维(Sporocytophaga)。     

一种分离纯化厌氧细菌的新方法——平皿夹层厌氧法

结合常规好氧细菌和严格厌氧细菌分离纯化方法的优点,设计了一种稳妥简便、快速灵活、能有效克服操作中可能带来的污染,且适合分离各种类型严格厌氧细菌及兼性厌氧细菌的新方法———平皿夹层厌氧法。并将之成功地运用于硫酸盐还原细菌（严格厌氧）和脱氮硫杆菌（兼性厌氧）菌株的分离纯化。     

枯草芽孢杆菌LL18-4产类细菌素的分离纯化及特性研究

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）LL18-4菌株分泌物中的类细菌素通过(NH4)2SO4盐析法粗提后,经过SephadexG-75、DEAE-Sephadex A 50和Sephacryl S-200HR分步柱层析,经SDS-PAGE电泳检测到单一蛋白质条带,分子量约为60KD. 该类细菌素在酸性条件下及80%饱和度的(NH4)2SO4溶液中具有较高的稳定性,可4℃放置3个月仍保持大部分活性;对有机溶剂也有一定的耐受性：Mg2+能提高蛋白的抑菌活性.     

好氧堆肥中高温纤维素分解菌的筛选及性状研究

从规模化好氧堆肥的高温阶段筛选获得6株具有较高纤维素降解能力的高温菌。这些菌株的生长速率、温度稳定性以及纤维素酶活性检测结果表明,它们能在45～65℃的温度下生长,最适生长温度为50～60℃;在普通细菌培养基和以羧甲基纤维素钠（CMC）为唯一碳源的限制性培养基上均能够快速启动并旺盛生长,分别在培养14h和36h左右达到最大活菌数。纤维素酶活性检测结果表明,获得的菌株均具有较高的 C_x 酶活和滤纸崩解能力,能够在2～3d内快速启动滤纸条崩解,并显著降低滤纸条中纤维素含量。     

直链烷基苯磺酸钠优势降解细菌的筛选及其降解特性的初步研究

直链烷基苯磺酸钠是一种广泛使用的合成洗涤剂，在工农业生产中具有重要价值，但它亦是一种有毒物质，大量使用会污染环境。我们从受ＬＡＳ长期污染的土壤中筛选到三株优势降解菌，它们可利用ＬＡＳ为唯一碳源生长，经鉴定分属于邻单胞菌（Ｐｌｅｓｉｏｍｏｎａｓ）和黄单胞菌属（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ）．混合培养几株优势菌可获得更高的降解率，说明菌株间有协同作用存在。     

苯酚降解菌JS-1的筛选及降解特性的初步研究

从上海金山区第二工业园区的污水池淤泥中分离出一株能够降解苯酚的菌株JS-1,该菌株能够在以苯酚为唯一碳源和能源的无机盐培养基上生长,经16S rDNA分子比对及其形态、生理生化分析,初步鉴定该菌为粪产碱菌(Alcaligenes faecalis).该菌在30℃时的降解率最高,达93%,在25～35℃范围内的降解率均达70%以上,在苯酚浓度低于500 mg/L时,降解率达75%以上,接种量在0.5～1.5 mL时苯酚的降解率最为明显,达93%以上,在有外加碳源葡萄糖加入时可以相对提高菌株的降解效率,从而缩短降解周期.为污染土壤的微生物修复提供理论指导.     

6株光合细菌的富集分离及初步鉴定

从保定市护城河及白洋淀底泥中富集分离出6株光合细菌,分别编号为PSB-1、PSB-2A、PSB-2B、PSB-3、PSB-4、PSB-5.通过形态学观察及生理生化特性试验,以伯杰细菌鉴定手册第九版为依据,鉴定认为PSB-1、PSB-2B、PSB-3、PSB-5属于红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)的成员,PSB-2A属于红细菌属(Rhodobacter)的成员,PSB-4属于蓝细菌(Cyanobacteria).     

6株光合细菌的富集分离及初步鉴定

从保定市护城河及白洋淀底泥中富集分离出6株光合细菌,分别编号为PSB-1、PSB-2A、PSB-2B、PSB-3、PSB-4、PSB-5。通过形态学观察及生理生化特性试验,以伯杰细菌鉴定手册第九版为依据,鉴定认为PSB-1、PSB-2B、PSB-3、PSB-5属于红假单胞菌属(Rhodopseudomonas)的成员,PSB-2A属于红细茵属(Rhodobacter)的成员,PSB-4属于蓝细菌(Cyanobacteria)。     

哈密瓜内生细菌的分离及拮抗菌的筛选

对新疆不同品种和不同种植地区的健康哈密瓜植株组织中内生细菌进行分离,共得到252个菌株.经鉴定分属于芽孢杆菌属(Bacillus spp.)、黄单胞菌属(Xanthomonas spp.)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.)、欧文氏菌属(Erwinia spp.)、葡萄球菌属(Staphylococcus spp.)及短小杆菌属(Curtobacterium),其中芽孢杆菌为优势种群.对内生细菌数量测定表明,不同品种、组织及种植地,内生细菌的数量不同,品种间内生细菌的数量变化为3.15×103～2.01×105CFU/g鲜重;各组织中以种子中最多,平均含量在6.18×106CFU/g鲜重;其次为根,再次为叶片,茎和叶柄中较少;对分离菌株进行哈密瓜叶斑病和果斑病菌拮抗菌的筛选表明,252株内生细菌中有71个菌株对叶斑病菌有拮抗作用,占菌株总数的28.2%,抑菌圈半径最大的可达8mm;6.7%的菌株对果斑病菌有拮抗作用.     

一株苯胺蓝降解菌的分离鉴定及其降解特性

从河水中驯化、筛选、分离得到一株对染料苯胺蓝有降解能力的菌株WZR-B,该菌能以苯胺蓝为唯一碳源、能源生长.通过对菌株WZR-B的形态特征、生理生化,以及16Sr DNA序列分析,初步鉴定为铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa).研究苯胺蓝的质量浓度、pH值和温度等因素对该菌株生长,以及对降解苯胺蓝的影响.结果表明,菌株生长和脱色的最适pH值为6.5,最适合温度为30℃,苯胺蓝的最适脱色质量浓度为200 mg·L-1.此外,总有机碳(TOC)残留量测定结果表明,该菌株对苯胺蓝的脱色率可达83%,TOC去除率为80%以上,不仅能对苯胺蓝脱色,而且还能进行矿化降解.     

几株异养硝化细菌与好氧反硝化细菌的分离与鉴定

从海水养殖场的生物膜,逛荡河口淤泥,烟大三元湖底泥中分离筛选出8株异养硝化细菌和8株好氧反硝化细菌.分别对16株细菌的异养硝化性能和好氧反硝化性能进行测定,结果表明,异养硝化细菌Y-3、Y-6、Y-7的72 h NH4+-N去除率分别为95.65%、96.60%、96.09%,好氧反硝化细菌F-3、F-5、F-7的72 h NO3--N去除率分别为76.20%、75.87%、76.00%.选择性能较高的3株异养硝化细菌和3株好氧反硝化细菌进行传统生理生化鉴定,并对各菌株的16S r DNA序列进行测定及分析,结果表明,Y-3和F-3为除烃海杆菌(Marinobacter hydrocarbonoclasticus),Y-6为溶藻孤菌(Vibrio alginolyticus),Y-7和F-7为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida),F-5为海洋单胞菌属(Oceanimonas sp.).     

光合细菌的分离与生长特性初探

从淡水、海水和厌氧生物反应器污泥中分离光合细菌,探讨其分离方法和生长特性．结果表明,平板涂布法有氧下培养适用于红螺菌科类光合细菌的分离,该类细菌在光照有氧下培养７ｄ以上,大多能合成色素物质．光合细菌生长的适宜光照强度约为３０００ｌｘ．由海水、淡水等分离源中分离的光合细菌,均能在０．１％-３％ＮａＣｌ基质中较好生长．