用流式细胞术研究PKC及VRP,CsA对多药抗性细胞的…

利用流式细胞术检测抗药性细胞内Ｒｈｏ－１２３的荧光强度作为检测抗性细胞性程度的指标，研究了蛋白激酶抑制剂Ｈ７，肿瘤促进剂佛波酯对多药抗性细胞的调节；钙离子通道阻断剂维拉帕米，免疫抑制剂对多药抗性的逆转作用。     

茶多酚对肿瘤细胞多药耐药性逆转作用的研究

用免疫组化法和流式细胞仪对肿瘤细胞系MCF－7和MCF－7／Adr的P－糖蛋白表达水平进行定性定量研究。用噻唑蓝比色法（MTT）研究茶多酚的细胞毒性及其对耐药性的逆转作用,并与Pgp抑制剂－奎尼定进行了比较。免疫组化法检测P－糖蛋白表达水平,MCF－7／Adr呈强阳性,而CF－7呈阴性;流式细胞仪定量检测结果MCF－7／Adr细胞系细胞阳性率为15％,MCF－7细胞系细胞阳性率为1.8%。MCF－7／Adr细胞系存在Pgp的过度表达。噻唑蓝比色法（MTT）检测结果茶多酚、奎尼定的加入对阿霉素对MCF－7的细胞毒性几乎没有影响。而茶多酚、奎尼定的加入明显增加了MCF－U／Adr对阿霉素的敏感性。免疫组化与流式细胞技术结合,可用于肿瘤细胞系P－糖蛋白表达水平的定性定量检测。茶多酚不仅具有一定的抗癌活性,还与奎尼定一样具有多药耐药性逆转作用。     

HL-60多药抗性细胞抗HT诱导凋亡机制的研究

用1mg·L-1三尖杉酯碱(Harringtoning,HT)处理人早幼粒急性白血病HL-60细胞2h,诱导细胞出现明显的凋亡(Apoptosis,Apo)形态学和生化特征,包括染色质凝集、Caspase-3(天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白水解酶-3)活化、DNA断裂等.来自HL-60的多药抗性细胞HR20和HT9抗HT诱导的凋亡,一般认为是P-糖蛋白(P-GP-170)对药物的外排作用引起细胞对凋亡的抗性.但用2mg·L-1 CsA(Cysclosporine A)逆转抗性细胞对药物的外排作用,1mg·L-1 HT作用48h仍不能诱导HR20和HT9细胞凋亡,说明HR20和HT9多药抗性细胞抗HT诱导凋亡的机制不仅仅在于细胞膜上的P-糖蛋白对药物的外排作用,可能还有凋亡相关因子或其他因素参与作用.Caspase-3是细胞凋亡通路中的一个中心环节,HR20和HT9抗HT诱导的Caspase-3活化,这可能是HR20和HT9不能凋亡的一个重要原因.     

反义核酸对肿瘤细胞多药抗性的抑制--作用靶点及作用方式的研究

为了用反义寡聚ＤＮＡ调控要霉素肿瘤细胞ＫＢ－Ａ－１的多药抗性,对反义核酸的预作用位点、作用方式和硫代化类似物进行了研究。筛选得到两段对应于翻译起始区（３）和Ｐ－糖蛋白ＡＴＰ结合位点（９）的２０聚反义片段,发现反义核酸的使用次数对结果的检测有很大影响,采用５μｍｏｌ／Ｌ５μｍｏｌ／Ｌ的反义片段９连续处理４ｄ,实现了将近５０％抑制效果,而其正义和错义链在１０μｍｏｌ／Ｌ沈度的同样处理条件下则没有检测到     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性和诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）性的方法,提高化疗效果。本文采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡,发现ＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ１,促进阿霉素诱导ＭＤＲ＋１Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,为其临床应用提供理论依据     

PMA对人肝癌细胞中Ha-ras基因启动子活性的影响及与PKC活性的相关性

为探讨佛波脂PMA的生物作用与癌基因ras表达及与PKC信号通路的相关性,用人肝癌细胞BEL-7402为模型,以荧光素酶为报告基因观察了PMA对Ha-ras启动子活性的影响.当用100μg/L PMA长期处理人肝癌细胞BEL-7402时,可明显抑制肿瘤细胞生长.通过RT-PCR和Western Blot分析发现,PMA处理后的BEL-7402细胞中Ha-ras mRNA和蛋白水平均明显下降.进一步观察了PMA对Ha-ras基因启动子活性的影响.通过构建含有Ha-ras启动子序列的、以荧光素酶为报告基因的pGL3-ras真核表达载体,利用脂质体瞬时转染技术将其转入BEL-7402细胞中,并通过荧光素酶活性的检测,发现PMA作用48和72h后的BEL-7402细胞中,Ha-ras启动子活性分别被抑制了55%和54%,同时PKC活性分别下降了76.7%和75.7%.并进一步观察到PKCα和βⅠ蛋白水平明显降低.实验结果表明,PMA长期处理的人肝癌细胞可通过抑制Ha-ras启动子的活性使Ha-ras基因表达被抑制,并且可能与PKC信号通路有关.     

增强型绿色荧光蛋白表达对鼠C6细胞生物学特征影响的研究

脂质体包裹质粒pEGFP-N1转染C6细胞,经G418筛选,得到稳定表达绿色荧光的C6-EGFP细胞.细胞计数,MTT,流式细胞术分别测定C6细胞在转染绿色荧光蛋白后增殖性,细胞活力以及细胞周期等生物学特性.C6细胞在转染了绿色荧光蛋白基因后细胞增殖性降低,细胞活力降低,细胞周期也发生了一些改变.     

石墨靶材电流对Ti(C, N)多层膜微观组织及力学性能的影响

采用反应非平衡磁控溅射技术制备了Ti（C,N）多层膜,其中以石墨靶材作为镀层生长所需的碳源。实验研究了石墨靶材电流变化对Ti（C,N）多层膜微观组织、力学性能以及摩擦性能的影响。采用X射线衍射仪及透射电子显微镜观察分析了多层膜的相组成与微观组织;使用维氏显微硬度计及销盘试验机分别测试了多层膜的显微硬度与摩擦系数。研究结果表明,所制备的Ti（C,N）镀层不仅具有多层结构而且镀层内还存在大量的纳米柱状晶粒。Ti（C,N）镀层内晶粒尺寸随石墨靶材电流的增加而逐渐减小而多层周期厚度随着石墨靶材电流的增加而增大。镀层...     

白花蛇舌草体外对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402抗肿瘤活性的研究

目的探讨白花蛇舌草在体外对肝癌多药耐药细胞Bell-7402生长活性的抑制作用.方法 MTT法检测白花蛇舌草提取物对Bel-7402生长的抑制作用,有无逆转Bel-7402的多药耐药性;用淋巴细胞转化实验检测白花蛇舌草提取物能刺激T淋巴细胞增殖,并筛选出药物的安全剂量范围;集落形成实验观察体外抗癌药物的敏感性.结果白花蛇舌草提取物对肝癌多药耐药细胞Bel-7402的生长具有明显的抑制作用,且这种作用是剂量依赖关系.结论白花蛇舌草提取物在体外对人肝癌多药耐药细胞Be1-7402有抑制作用.     

4′-苯基-2，2′：6′，2″-三吡啶镍配合物的合成、结构及其与DNA键合作用的光谱研究

用多吡啶配体L（L=4′-苯基-2,2′：6′,2″-三吡啶）合成了两个镍配合物[Ni（L）2]（NO3）2（1）和[Ni（L）2]Cl2·10H2O（2）,其单晶结构均属于三斜晶系．中心镍离子与两个配体上的六个氮原子配位构成变形八面体结构．配合物2中由Cl2A…O6A…O5A… Cl2B…O6B…O5B构成的六员氢键环呈椅式构象．用电子光谱、荧光光谱研究了它们与小牛胸腺DNA之间的相互作用．随着DNA的加入,电子光谱的最大吸收峰明显红移（14nm）并伴随有减色效应;同时配合物也能较大程度淬灭EB—DNA复合物的荧光,表观键合常数疋,,分别为1．34×10^6和1．27×10^6mol^-1L．结果表明,两配合物均以较强的插入方式与DNA作用．     

抗三尖杉酯碱的HL60细胞蛋白质磷酸化

研究了抗三尖杉酯碱的ＨＬ６０细胞蛋白质磷酸化的变化。经差速离心得到纯膜蛋白，抗性细胞有一高度磷酸化的１１０ｋｕ的蛋白质存在，免疫沉淀ｃ－ＫＡＦ－１蛋白激酶，抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，其活性被蛋白激酶Ｃ抑制剂ＣａｌｐｈｏｓｔｉｎＣ明显地抑制。结果表明：ＨＬ６０细胞对三尖杉酯碱的抗药性与蛋白质高度磷酸化有关；抗性细胞内ｃ－ＲＡＦ－１蛋白激酶磷酸化程度明显提高，可能与多药抗药性和抗细胞调亡有关。     

葡萄抗羟脯氨酸变异细胞系和抗盐变异细胞的生化特性比较研究

对抗HYP和抗盐的葡萄变异细胞系进行了比较分析，结果表明抗HYP变异系细胞的脯氨醛含量是抗盐变异系的2.86倍．在盐胁迫下，抗HYP变异系吸收的K+和Na+含量高于抗盐变异系，但二者的K+/Na+比值相近抗HYP变异系的耐盐和耐PEG的能力，明显比抗盐变异系强。实验表明在筛选葡萄抗逆变异系过程中。以HYP作为选择压力更为适合。     

葡萄抗羟脯氨酸变异细胞系和抗盐变异细胞系的生化特性比较研究

对抗ＨＹＰ和抗盐的葡萄变异细胞系进行了比较分析，结果表明抗ＨＹＰ变异细胞的脯氨酸含量是抗盐变异系的２．８６倍。在盐胁迫下，抗ＨＹＰ变异系吸收的Ｋ＾＋和Ｎａ＾＋含量高于抗盐变异系，但二者的Ｋ＾＋／Ｎａ＾＋比值相近。实验表明在筛选葡萄抗逆变异系过程中，以ＨＹＰ作为选择压力更为适合。     

v-src,Ca~(2+),PKC和cAMP对3T3-tsLA90细胞间隙连接通讯的调节

以3T3-tsLA 90细胞为正常和转化细胞模型,采用划痕标记染料示踪技术,初步研究了 v-src 基因及 Ca~(2+)-钙调素,蛋白激酶 C,cAMP 等细胞内信号物质对细胞间隙连接通讯的调节作用.40℃时正常表型的细胞间隙连接通讯正常,33℃时转化表型的细胞间隙连接被阻断.用 v—src 基因产物抑制剂、钙通道抑制剂、钙离子载体、钙调素和蛋白激酶 C 抑制剂及 cAMP研究了对细胞间隙连接的作用.当3T3-tsLA 90细胞由40℃转移到33℃时,v-src 基因活化,其产物 pp 60~(v-s c)通过 Ca~(2+)-CaM 和 DG-PKC 通路及 cAMP 系统相互作用对细胞间隙连接通讯功能起下降调节作用,从而导致细胞呈转化表型状态.     

抗B.t.制剂昆虫细胞品系的选择及其酯酶同工酶的初步研究

逐代以９０％的选择压力选择对Ｂ．ｔ．抗性的昆虫细胞品系,结果表明：５Ｂ１细胞对Ｂ．ｔ．抗性的发展是相当缓慢的．第２３代选择细胞的抗性水平突然由原来的３倍上升到１０倍以上,此后抗性在８～１０倍间波动,一直到第３２代．被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）和正常细胞（Ｓ５Ｂ１）酯酶同工酶的分析结果表明两种品系细胞有３条共同的酶带．另外,二者也分别拥有２条特异性酶带．被选择细胞（Ｒ５Ｂ１）的细胞酯酶同工酶有些酶带的活力明显高于正常细胞（Ｓ５Ｂ１）的酯酶同工酶活力,证明了抗性细胞品系在生理和代谢上已经发生了一些变化．     

溅射效应对离子注入聚合物表面形貌的影响

采用MEVVA离子注入机引出的离子进行了聚酯薄膜改性研究,考虑到注入离子对表面溅射的强弱与离子的质量密切相关,所以选用质量大小不等的3种离子Cu,Si和C为注入离子,注入后的聚酯膜表面结构发生了很大的变化,用原子力显微镜观察了注入样品表面形貌的变化,表面粗糙度与注入离子质量密切相关.实验结果表明,注入前聚酯薄膜表面粗糙,表面突起密集地分布在表面,其高度可达20～25 nm,C和Si注入后表面突起高度下降到5 nm,随注入离子质量的增加,在注入层粗糙度增加,Cu注入后在表面形成了弥散分布Cu原子的析出纳米颗粒.Cu颗粒起伏高度可达到50 nm.这些变化对聚酯薄膜表面物理化学特性有着重要的影响.     

用^211At和^131I标记蛋白质的研究

报道了砹—211和碘—131标记蛋白质的方法.通过过氧化氢或氯胺T直接氧化制备,使用凝胶色谱从反应产物中分离标记蛋白质,相对法比较放射性计数测定标记产率,过氧化氢适用于~(211)At标记蛋白质,氯胺T有利于~(131)I标记蛋白质.8次实验的结果表明,用过氧化氢氧化标记的~(211)At牛血清白蛋白产率96.4％,氯胺T氧化标记的~(?)I牛血清白蛋白产率66.1％.间接法标记蛋白质,放射性核素~(211)At同对氨基苯甲酸反应获得对—~(211)At—苯甲酸,经乙醚萃取和高效液体色谱分离,然后再偶联到免疫球蛋白或牛血清白蛋白上。动物实验结果表明,此种结合的标记蛋白质在体内稳定,标记率不低于初始~(211)At放射性活度的40%.     

江西恒湖农场生态农业建设研究——Ⅰ.鄱阳湖圩区农业生态系统能量流动和养分循环分析

对鄱阳湖圩区生态农业建设过程中农业生态系统的能量流动、养分循环进行分析比较,结果表明,通过生态农业建设,合理调控农业生态系统的能量流动及养分循环,可提高系统生产力,增加经济效益,改善农业生态环境.