仙客来(Cyclamen persicum Mill)体细胞胚的发生及组织细胞学的研究

以仙客来开花植株新生叶片为外植体,成功诱导、筛选出体细胞胚发生的胚性愈伤组织,胚性愈伤组织的形态有两种:微棕红色松软愈伤和松脆愈伤.显微镜下观察松软胚性愈伤多为含有数十个胚性细胞的胚性细胞团,而松脆胚性愈伤的胚性细胞团的胚性细胞数目只有几个或十几个.细胞学观察二者均包含前胚性细胞团、二细胞、四细胞、八细胞,进一步继代培养2周可观察到多细胞原胚、球形胚、梨形胚、心形胚、鱼雷胚的出现,大多数体胚60～90 d可发育成完整的小植株.     

仙客来(Cyclamen persicum Mill)体细胞胚的发生及组织细胞学的研究

以仙客来开花植株新生叶片为外植体,成功诱导、筛选出体细胞胚发生的胚性愈伤组织,胚性愈伤组织的形态有两种：微棕红色松软愈伤和松脆愈伤.显微镜下观察松软胚性愈伤多为含有数十个胚性细胞的胚性细胞团,而松脆胚性愈伤的胚性细胞团的胚性细胞数目只有几个或十几个.细胞学观察二者均包含前胚性细胞团、二细胞、四细胞、八细胞,进一步继代培养2周可观察到多细胞原胚、球形胚、梨形胚、心形胚、鱼雷胚的出现,大多数体胚60～90 d可发育成完整的小植株.     

仙客来种苗球茎胚性愈伤的诱导及体胚的发生

为了建立仙客来稳定的快繁增殖体系,以仙客来种苗为试材,接种于含不同浓度激素组合的I／2MS培养基上,经过初培养和多次继代培养,诱导产生胚性愈伤,结果表明：球茎是较好的诱导胚性愈伤的材料,1／2MS＋6-BA0．2mg／L＋2,4-D2mg／L＋蔗糖30g／L＋琼脂6．5g／L＋肌醇100mg／L＋酪蛋白100mg／L是较好的诱导配方,将胚性愈伤转接到不含激素的1／2MS基本培养基上,诱导产生大量球形胚和鱼雷胚,2—3周后正常成熟的体胚萌发,表明此研究可以为仙客来的快速繁殖提供技术参考．     

茴香胚性愈伤组织的诱导和再生植株

以茴香幼苗的茎和叶柄为外植体，在不同种类和浓度的植物激素处理下产生了愈伤组织，进一步诱导生成胚性愈伤组织，在分化培养基上，愈伤组织通过形态建成的两种基本方式：器官发生和胚状体发生，得到了茴香的再生植株。     

影响宁夏枸杞愈伤组织体细胞胚发生的因素

对宁夏枸杞愈伤组织体细胞胚发生的影响因素进行分析,结果表明,宁夏枸杞根外植体的年龄及其生理状态能影响胚性愈伤组织的形成和体细胞胚发生;4℃低温处理两周能明显促进愈伤组织形成体细胞胚,同时也能增加愈伤组织内源多胺的含量;添加Ag+有利于愈伤组织的体细胞胚发生,适当增加Ca2+浓度也有利于愈伤组织的生长及其体细胞胚发生;Eu3+的添加能明显促进愈伤组织生长,而低浓度的Ce2+、Eu3+作用有利于愈伤组织体细胞胚发生.     

芥菜原生质体培养和胚性愈伤组织的产生

以芥莱无菌苗下胚轴为材料游离获得原生质体,原生质体培养于含NAA1.5mg/l,6-BA0.6mg/l、和2.4-D0.5mg/l的DPD液体培养基中,约4—5周形成肉眼可见的小愈伤组织。转入MS固体培养基后,即可产生大量的愈伤组织,其中胚性愈伤组织约占50%以上。     

仙客来(Cyclamen persicum Mill) 液体培养提取物的抑菌活性

对仙客来愈伤组织进行液体培养,分别得到培养液(胞外产物)和愈伤组织(胞内产物).用石油醚、氯仿、无水乙醇对其提取,用硅胶柱层析对提取液进一步分离,利用滤纸片法对分离得到的组分进行抑菌活性研究.结果表明,从愈伤组织(胞内产物)的石油醚提取物中得到的多个组分对供试菌株有较强的抑菌活性,其中有3个组分对5种供试菌株均有较好的抑菌作用;从氯仿提取物中分离得到的组分只对革兰氏阳性菌有抑制作用;从无水乙醇提取物中分离得到的各组分均无抑菌活性.从培养液(胞外产物)的氯仿提取物中分离得到的3个组分对枯草杆菌和金黄色葡萄球菌有明显抑制效应,从无水乙醇提取物中分离得到的4个组分对供试菌株有抑菌活性,其中各组分对啤酒酵母表现出相对较弱的抑制作用.通过对比实验发现,仙客来愈伤组织经液体培养后所含活性组分要明显高于栽培植株.     

玉米叶片愈伤组织体细胞胚胎发生的细胞形态学观察

应用ＭＳ＋２．０ｍｇ．Ｌ＾－１，２，４－Ｄ＋０．５ｍｇ．Ｌ＾－１ＢＡ作为培养基，附加５００ｍｇ．Ｌ＾－１水解酪蛋白和ｗ＝３０％蔗糖、可以从玉米叶片愈 直接诱导出体细胞胚胎。观察表明，玉米胚性细胞同非胚性细胞差别显著。玉米幼叶体细胞胚胎可能起源于单细胞；发育早期的胚性细胞团与周围薄壁细胞存在着明显的界限，推测可能同体细胞胚胎发生初期的生理隔离有关，它随着胚胎发育而逐渐消失。     

仙客来愈伤组织诱导和不定芽形成

以仙客来品种"国旗红"成株的叶片和叶柄为外植体,分别接种到MS培养基(Murashige & skoog)+6-苄基嘌呤(BA) 2.0(mg/L,下同)+萘乙酸(NAA) 0.5和1/2MS+BA 2.0+激动素(KT) 0.25+2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D) 0.5两种培养基,研究外植体类型、培养基、切割方式和摆放方法对愈伤组织诱导和不定芽形成的影响.结果表明, 叶片是诱导愈伤组织和形成不定芽的理想外植体;将带主脉的叶片,以反面向上的方法接种到1/2MS+BA 2.0+KT 0.25+2,4-D 0.5中诱导效果最佳,愈伤组织诱导率达100%,不定芽形成率和平均个数分别为66.67%和4.0.此外,对不定芽的继代培养进行研究, 结果表明,不定芽可继代增殖.     

植物激素对一品红愈伤组织和胚状体的作用

以一品红幼茎为外植体,接种在培养基(MS+ZT)0.5mg·L-1、NAA0.5mg·L-1、IBA0.5mg·L-1、2,4 D1.0mg·L-1、6 BA1.0mg·L-1诱导愈伤组织,其中以NAA0.5mg·L-1时愈伤组织诱导率最高,为96.4%.将继代培养的愈伤组织,接种到(MS+ZT)1.0mg·L-1+NAA0～2.0mg·L-1、IBA0～2.0mg·L-1、2,4 D0～2.0mg·L-1;(MS+6 BA)1.0mg·L-1+NAA0～2.0mg·L-1、2,4 D0 2.0mg·L-1培养基上,进行胚状体的分化培养,其中以ZT1.0mg·L-1+2,4 D0.5mg·L-1效果最好.     

一品红离体培养及体细胞胚高频率发生的研究

一品红苞片为外植体进行离体培养,以MS+2,4-D 2.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1固体培养基愈伤诱导率及相对生长量最高。此培养基中继代的愈伤组织转入MS+2,4-D 1.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1+水解酪蛋白80 mg.L-1固体培养基时体细胞胚分化率最高。加入活性碳1 g.L-1有利于高频率体细胞胚发生。MS培养基优于N6和B5培养基,有利于高频率体细胞胚发生。胚性愈伤组织及时转入液体培养基中悬浮振荡培养有利于高频率体细胞胚发生。     

仙客来(Cyclaman Persicum,Mill)组织培养中不定芽形态发生的组织细胞学研究

分别用仙客来种苗的子叶和叶柄作为外植体,培养在附加2,4 D、细胞分裂素和细胞激动素的1/2MS培养基上诱导不定芽的发生,研究了愈伤组织和不定芽形成过程中的组织细胞学变化.对两种不同外植体不定芽发生过程中的切片观察表明,两种外植体的组织脱分化始于维管束周围的维管束鞘细胞,随后开始分裂的是与其临近的薄壁细胞并能很快形成胚性分生细胞团.经30d左右的培养,进一步分化形成芽原基.子叶愈伤的芽原基通常出现在愈伤的边缘.叶柄脱分化比子叶快,不定芽可以起源于表层的分生细胞团,也可以由愈伤深处的分生组织分化而形成.     

5种碳源对柑橘愈伤组织生长及体细胞胚胎发生能力的影响

就5种碳源对柑橘愈伤组织生长及其体细胞胚胎发生能力的影响进行了研究.结果表明:蔗糖和葡萄糖有利于柑橘愈伤组织生长,乳塘和甘油对柑橘愈伤组织的生长影响较小,而可溶性淀粉不利于柑橘愈伤组织的生长.不同碳源对具有体细胞胚胎发生能力的柑橘愈伤组织的影响各异,但对于失去再生能力的柑橘愈伤组织而言,不同碳源对其体细胞胚胎发生不起作用.     

用于“治疗性克隆”人胚胎干细胞研究面临的问题与可能的解决办法

利用培育的干细胞(SC)来实现组织再生和器官修复对于许多重大疾病如糖尿病、心脏疾病、老年性痴呆(AD)、帕金森病(PD)、神经损伤等的治疗具有重要意义,同时也是新药研发的重要工具.使用体细胞核转移技术(SCNT)克隆人类早期胚胎和提取干细胞,即所谓的"治疗性克隆"(Therapeutic cloning)技术,是目前进行干细胞个性化治疗的重要手段,具有广泛的临床应用前景.通过这种方法获得人胚胎干细胞的研究尚处于基础阶段,仍面临着许多有待解决的科学问题和技术挑战.在此主要就用于"治疗性克隆"人胚胎干细胞的研究进展做了简要综述,着重探讨了在该研究领域面临的主要困难,特别是在获得人成熟卵细胞方面,并提出了可能的解决办法.     

外源激素对牡丹胚性愈伤组织诱导的影响

为了探讨外源激素的添加对牡丹胚性愈伤组织诱导过程中生理生化特性的影响.以牡丹品种‘凤丹白’叶柄诱导的愈伤组织为材料,研究不同浓度NAA和TDZ对胚性愈伤组织诱导过程中POD(过氧化物酶)、SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(过氧化氢酶)和可溶性蛋白的影响.结果表明,抗氧化酶类活性和蛋白质含量与胚性细胞早期发育发生密切相关,在胚性愈伤组织形成时期,POD和CAT活性变化趋势基本一致,而SOD活性变化则相反;SOD活性经过短暂下降后回升,于第15天达到第二个峰值后稳步下降,表明SOD在胚性愈伤组织诱导初期起主导作用;POD与CAT活性出现峰值时间较SOD滞后,推测POD和CAT活性的升高能够促进胚性愈伤组织的形成和早期发育;可溶性蛋白含量于胚性细胞形成前一直保持较高水平,在第15天达到峰值后下降,说明其含量的升高有利于胚性细胞的形成和发育,其累积对形成胚性愈伤组织有促进作用.添加NAA 0.2 mg/L和TDZ 0.5 mg/L对牡丹胚性愈伤组织的诱导效果最好.     

水稻悬浮体细胞胚胎发生及其特异蛋白

以水稻优良品种吉农大８号成熟种子为实验材料,建立了悬浮体细胞胚胎发生体系,并获得再生植株,对其发生过程中特异蛋白的变化,以及诱导中胚性与非胚性愈伤组织的差异等问题进行了探讨,为将来深入研究体细胞胚胎发生机理奠定了基础,实验结果表明,不同培养偌上诱导的胚性愈伤组织的发生频率是不同的,基本培养基ＮＭＢ诱导形成的愈伤组织在适当激素浓度下,可由悬浮培养产生体细胞胚,转移到固体培养基上后,得到再生植株,对这一过程进行的组织学观察证实该形态发生途径是单细胞起源的体细胞胚胎发生,利用ＳＤＳ－聚合烯酰胺凝胶电泳比较体细胞胚胎发生中不同时期可溶性蛋白组分的差异,发现相对分子质量为５９０００的蛋白组分存在于分化初期的球形胚中,相对分子质量为５６０００的蛋白组分仅在早期成熟胚中出现;在分化出幼叶的晚期成熟胚中具有相对分子质量为３２０