小克银汉霉原生质体的制备与再生

目的　为了利用微生物发酵生产γ 亚麻酸,研究了小克银汉霉原生质体制备与再生的条件。方法　利用液体振荡培养法,对酶解系统、渗透压稳定剂、菌丝培养时间、酶解温度等因素对小克银汉霉原生质体制备与再生的影响等进行了实验。结果　原生质体的产量可达到5.3×106个/mL,原生质体的再生率达到1.85%。结论　①用2%的蜗牛酶酶解28℃培养24h的菌丝,以0.7mol/L甘露醇作为渗透压稳定剂,酶解前以0 3%β 巯基乙醇处理30min,便可制备大量的小克银汉原生质体;②用含0.8mol/LKCl的高渗双层培养基包埋制备的原生质体,可得到较高的原生质体再生率。     

SD—5菌株原生质体形成与再生条件的研究

探讨了培养基成分、培养时间、高渗缓冲液成分和ｐＨ、溶菌酶浓度以及酶解温度和时间对苏云金杆菌ＳＤ－５菌株原生质体形成和再生的影响；结果表明，ＳＤ－５菌株原生质形成和再生的最佳条件组合为：ＰＢＧ培养基、３０℃培养１４ｈ再活化５ｈ，以ＳＭＭｐＨ６．５作酶解缓冲液，溶菌酶浓度０．６ｍｇ／ｍｌ，３４℃处理６０ｍｉｎ。     

黄伞原生质体制备与再生条件研究

探讨了渗稳剂种类、酶种类和浓度、酶解时间、酶解温度、菌龄等因素对黄伞原生质体制备和再生的影响．结果表明,其原生质体制备和再生的最佳条件是菌龄为7d,2％溶壁酶处理2．5h,酶解温度25℃,0．6mol／L KCl为制备时的渗稳剂及0．6mol／L甘露醇为再生时的渗稳剂,其原生质体的产率为2．16×10^7个／mL,再生率为0．52％．     

金针菇原生质体制备和再生条件实验

本文采用溶壁酶(Lyuvllzyme)、蜗牛酶(Snailase)、纤维素酶(Cellulase)制备金针菇(Flammulina Velutipes)的原生质体.比较了酶的浓度、渗透压稳定剂、温度、酶解时间、菌龄等因素对原生质体形成和再生的作用.1％蜗牛酶和1.5％溶壁酶酶解金针菇菌丝获得了高产量的原生质体.无机盐(kcl,Nacl,Mgso_4)和甘露醇是制备金针菇原生质体的有效稳定剂.35℃、酶解1小时、菌龄3～4天的菌丝是制备金针菇原生质体的最佳条件.不同的再生菌丝生长速度和子实体形成的时间有很大的差异.     

绣球菌原生质体制备及再生条件的初步研究

为进一步改善绣球菌栽培特性、提高栽培产量,对绣球菌原生质体制备与再生条件进行了初步探索.以绣球菌原生质体再生量为指标,对等渗剂、酶反应温度、pH和反应时间等影响因素进行了优化.结果表明,采用2%的溶壁酶溶解绣球菌菌丝细胞壁,制备原生质体的最佳条件是,以0.6 mol/L蔗糖为等渗剂,在30℃、pH值6.0环境下反应3 h.在此条件下,原生质体的再生量为11 850个/mL.     

棘孢小单孢突变株原生质体制备及再生

以棘孢小单孢突变株（Ｍｉｃｒｏｎｏｚｐｏｒａ ｅｃｈｉｎｏｚｐｏｒａ ＪＩＭ－４０１）为出发菌株,进行原生质体制备及再生条件的研究,结合ＵＶ照射及高能电子流诱变,筛选出ＭＳ－１１６菌株,３０吨发酵罐试验,其Ｃ２ｂ组分达８５．６％。     

黄色短杆菌原生质体形成和再生条件研究

本文研究提高谷氨酸黄色短杆菌原生质体再生率的措施。按所研究的最适实验条件获得的再生率,比文献[1]报道的高150％,比文献[2]报道的高67％。     

白灵菇原生质体制备与再生研究

借助正交设计法对白灵菇原生质体制备与再生进行研究．结果表明,原生质体最佳制备体系是：液体静置培养7d的菌丝体,在20g／L的溶壁酶作用下,以0．6mol／L蔗糖为渗透压稳定剂,28℃酶解2h,最高制备率为1．34×10^7个／mL;其最佳再生体系是：以液体静置培养7d的菌丝体,0．6mol／LMgSO4·7H2O为渗透压稳定剂,在15g／L溶壁酶与10g／L蜗牛酶作用下,34℃酶解3h,最高再生率为3．7％．     

槐耳原生质体制备与再生研究

对槐耳原生质体制备与再生进行了研究,结果表明:槐耳原生质体制备最佳条件是以液体静置培养9d的菌丝体,0.6mol/L蔗糖作为渗透压稳定剂,在体积质量比2%溶壁酶、1%纤维素酶和1%蜗牛酶作用下,25℃酶解3h,制备率达2.75×106个/mL;再生最佳条件是液体静置培养12d的菌丝体,0.6mol/L甘露醇为渗透压稳定剂,在2%溶壁酶作用下,35℃酶解2h,再生率为12.7%.     

应用正交实验研究铜绿假单胞菌原生质体制备与再生

通过对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生进行正交实验,探讨各因子对铜绿假单胞菌原生质体制备与再生影响水平,得到铜绿假单胞菌原生质体制备与再生的最优条件:酶解时间 0. 5h,酶浓度 2mg/L,菌龄为 15h 此时原生质体形成率为 80. 5%,再生率为 20. 6%     

三孢布拉霉菌中辅酶Q9的分离与鉴定

从三孢布拉霉菌菌丝体中分离提取辅酶Q,经硅胶柱和制备色谱纯化后纯度达98%。样品在Craven反应中显蓝色,紫外光谱扫描在275?nm处有最大吸收,高效液相分析显示样品保留时间比辅酶Q10的略小。红外光谱谱图表明样品具有辅酶Q9的特征化学键和分子结构,电喷雾质谱（ESI/MS）确定了所分离的辅酶Q分子量［M+H］为795.8,以上结果表明,本实验室所保存的三孢布拉霉菌菌丝体内的泛醌存在形态是辅酶Q9,这为后续的发酵生产和药物合成研究奠定了重要的工作基础。     

木质素降解菌L1原生质体的形成和再生

从自然界筛选出一株降解木质素高的白腐真菌 L1,对其原生质体的形成和再生进行了研究。在 OS培养基中生长的菌丝体 ,原生质体数量较高。在液体培养条件下 ,于 OS培养基中培养 60 h的菌丝体 ,用 0 .3% β-巯基乙醇与酶液同时处理菌丝体 ,采用 p H5 .0的混合酶 (蜗牛酶∶纤维素酶∶溶菌酶的最佳浓度比为 5∶ 4∶ 1 ) ;在 30℃酶解 4h;用 0 .4mol/L NH4Cl,1 0 mmol/L Mg SO4作渗透压稳定剂时 ,原生质体数量达到 4.32× 1 0 5个 /mg。 OS双层再生培养基最适于原生质体再生     

三孢酸结构类似物对发酵生产番茄红素的影响

考察了三孢酸结构类似物α-紫罗酮、β-紫罗酮和脱落酸对番茄红素生产菌Blakeslea trispora的生长和番茄红素合成的影响。结果表明α-紫罗酮、β-紫罗酮和脱落酸对Blakeslea trispora菌体生长影响不大,但都能明显刺激番茄红素的合成。在发酵培养2d后加入α-紫罗酮、β-紫罗酮和脱落酸,番茄红素的产量最高。其中脱落酸的添加对番茄红素产量影响最为显著,在发酵2d后添加脱落酸9.36×10^-3mmol/L,番茄红素产量达到549mg/L,比对照（382mg/L）提高了44%。     

发酵法生产番茄红素培养方法的改进及优化

研究了应用三孢布拉氏霉菌生产番茄红素的发酵工艺。针对菌种生长能力的降低,首次采用了孢子悬液直接接种的方式,并对菌种孢子的生长条件进行了优化。另外,提出了直接发酵培养的一级培养工艺,该工艺稳定、简便,不仅提高了番茄红素的产量,而且缩短了发酵培养时间。     

林肯链霉菌原生质体形成、再生和融合的研究

林肯链霉菌生长在0.5%甘氨酸的S培养基中,能较好地被溶菌酶破壁形成原生质体。原生质体能在RB培养基上再生,但不能在R_2培养基上再生,这和已报道过的其他链霉菌不同。78-11菌株的再生频率约为25.7%,S-3菌株的再生频率约为20.5%。PEG(聚乙二醇)1000对诱导融合的效果较好,重组频率最高可达10~(-2)。重组子和亲本在培养特性、孢子形态方面无特殊差异,但经C_O~(60)诱变后重组子的正变率超过亲本。     

烟草和MPTA对三孢布拉氏霉合成番茄红素的影响

在三孢布拉氏霉发酵48 h添加3.6 mmol/L 2-(4-甲基苯氧)-三乙基胺(MPTA)可有效抑制96% β-胡萝卜素的合成;添加15g/L烟草可促进总类胡萝卜素的产量(170mg/L),但其对β-胡萝卜素的合成抑制作用低于MPTA。L27（3 13）正交实验从抑制剂添加时间、添加量以及两种抑制剂的交互作用等方面考察了同时添加MPTA和烟草对番茄红素产量的影响。发酵48?h同时添加烟草10g/L与MPTA 2.2mmol/L,番茄红素的产量可达205mg/L（占总类胡萝卜素产量的94%）。     

三孢布拉霉产β-胡萝卜素培养条件的优化

考察了不同的培养基成分及发酵条件对菌体生物量和β-胡萝卜素产量的影响,并通过正交实验确定了最佳条件组合。结果表明,正负菌在优化条件下,菌体生物量和β-胡萝卜素产量平均可达到61.6257mg.mL-1和147.0991 mg.mL-1,较其原始条件下发酵结果分别提高了39.7%和483.3%。