丹参法呢基焦磷酸合酶基因(SmFPPS1)的表达模式

克隆了丹参中萜类物质合成相关的法呢基焦磷酸合酶基因(farnesyl diphosphate synthase,SmFPPS1,HQ687768),并对其序列特征进行了分析,发现该基因编码产物含有异戊烯基转移酶的特征结构域定位于细胞质中.功能互补分析显示,SmFPPS1不具有牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合酶(geranylgeranyldiphosphate synthase,GGPPS)活性.实时荧光定量PCR分析结果显示,SmFPPS1在丹参生长的各个时期具有一定的组成性表达,在其花期的各器官中主要在花中表达,而且其表达受到茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)和真菌诱导子信号的诱导.     

配合物Eu(NO3)3(phen)2的晶体结构和性质

通过X射线单晶衍射测试了配合物Eu(NO3)3(phen)2的晶体结构(phen=1,10 -邻菲NB035罗啉).该配合物以单核分子形式存在,中心离子Eu(Ⅲ)分别与硝酸根上的氧原子和1,10 -邻菲NB035罗啉上的氮原子以双齿螯合方式配位,配位数为10.荧光光谱表明该配合物有Eu(Ⅲ)的特征发射光谱,其中5D0→7F2(615nm)跃迁发射强度最高.该配合物具有良好的热稳定性.     

乙酰基取代的酮和酚酮化合物与芳醛缩合反应的研究

为寻找具有生理活性的Troponoids,选择3-乙酰基NFDA1酚酮1和2-乙酰基-7-甲胺基NFDA1酮6与3,4,5-三甲氧基苯甲醛等取代醛反应得到缩合产物2～5,7～9;缩合产物3-(3,4,5-三甲氧基)肉桂酰基NFDA1酚酮2和3-(3,4-亚甲二氧基)肉桂酰基NFDA1酚酮4与羟氨和苯肼进行缩合成环得到苯乙烯基取代的缩杂环NFDA1酮化合物10～13;化合物1与3,4,5-三甲氧基苯甲醛在原甲酸三乙酯和高氯酸存在下反应一步得到2-(3,4,5-三甲氧基)苯基-4,9-二氢环庚并吡喃-4,9-二酮14。以上化合物2～5,7～14的结构经光谱分析和元素分析予以证实。     

暴马桑黄GPS基因克隆及响应茉莉酸甲酯诱导表达研究

【目的】对参与暴马桑黄(Sanghuangporus baumii)三萜合成途径的关键酶牻牛儿基焦磷酸合酶(GPS)基因进行克隆及诱导表达分析，以期深入探究暴马桑黄三萜合成分子机理。【方法】采用PCR扩增技术克隆暴马桑黄GPS基因cDNA全长及启动子，利用生物信息学软件对序列进行分析；采用qRT-PCR技术分析不同浓度茉莉酸甲酯(MeJA)对暴马桑黄GPS基因转录水平的影响，并用分光光度计测定不同浓度MeJA诱导下暴马桑黄三萜含量的变化。【结果】将克隆得到的暴马桑黄GPS基因和启动子分别命名为SbGPS和SbGPS启动子。基因分析发现SbGPS基因cDNA序列全长1 617 bp,共编码538个氨基酸，没有信号肽和跨膜结构。SbGPS启动子分析结果显示，除了含有CAAT-box、TATA-box等典型的启动子作用元件，还含有茉莉酸甲酯响应元件。荧光定量分析及三萜含量测定结果表明，SbGPS基因表达和三萜含量均随着MeJA浓度增加而呈现出先上升后下降的趋势，并且二者变化趋势基本一致，呈显著正相关。【结论】通过对SbGPS基因的克隆及诱导表达分析发现，该基因在暴马桑黄三萜生物合成途径中具有...     

基于过表达技术的烟草NtGGPPS1基因功能的研究

将NtGGPPS1-T质粒和spCAMBIA1300载体分别双酶切(SalⅠ和KpnⅠ)后连接,转化,挑取单克隆,筛选得到植物超量表达载体spCAMBIA1300-NtGGPPS1,并通过农杆菌介导侵染栽培烟草K326,在获得阳性转基因烟草后,进行定量RT-PCR以定量分析烟草牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶基因NtGGPPS1在转基因植株中的转录积累.同时,通过LC-MS和GC-MS检测转基因植株中质体色素和萜类化合物含量的变化.结果显示,与对照组相比,NtGGPPS1基因在编号为Nt1-OE1、2、3、4、7植株中表达上调,阳性转基因烟草中新黄质、紫黄质、叶黄素、叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素6种质体色素,以及烟叶中代表性二萜类物质α-西柏三烯二醇(α-CBD)和β-西柏三烯二醇(β-CBD)的含量明显增加.以上结果表明,NtGGPPS1基因参与了烟草中质体色素和二萜类化合物的生物合成.     

抗癌药物——紫杉醇合成和应用研究进展

紫杉醇是目前最新的具有很好疗效的抗癌药物,本文对紫杉醇发现以来的最新研究进展进行了比较详尽的综述。包括以下几个部分:1.紫杉醇的发现和历史;2.紫杉醇的药效;3.紫杉醇的来源;4.紫杉醇的生物合成途径及其相关酶基因的研究。     

二水合·吡啶二甲酸合铜(II)的结构表征

目的研究含氮、氧三齿配体的配位性能和金属配合物结构,合成三齿配体吡啶二甲酸与铜(II)和水的配合物{[Cu(pydca)(H2O)]3}(pydcaH2 吡啶二甲酸). 方法采用X射线衍射法对配合物进行了晶体结构的测定. 结果结构简式C21H21Cu3N3O18,相对分子质量Mr=794.03, 三斜晶系,空间群为P1, 晶胞参数a=4.7200(10)AAU(1AAU=10-10m),b=10.355(4)AAU,c=26.837(11)AAU;α=98.190(7)°,β=93.290(5)°,γ=94.250(10)°,Z=2,V=1291.7(8)AAU3,F(000)=798,Dc=2.042 mg/m3, μ=2.545 mm-1.结果晶体分子中含3个类似结构的配合物单元. 结论每单元中心都以CuNO4五配位方式形成扭曲的四方锥构型.     

庆大霉素生物合成关键酶基因在E.coli中的克隆与表达

从庆大霉素产生菌?棘孢小单孢菌基因组中扩增出参与庆大霉素生物合成的关键酶基因——2-脱氧青蟹肌糖合成酶基因GntB,将其分别克隆到克隆载体pBS-T和表达载体pET-22b(+)上,并将pET-gntB转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),用IPTG诱导使GntB基因实现表达.GntB基因大小为1 193 bp,其编码的氨基酸含397个残基,约为42 kD的多肽链.     

一种连续型野值的识别与修正滤波算法

通过对量测数据新息序列的统计数学特性的分析,利用服从wishart分布的AA^U(k)=(N-1)·AS^U(k)随机矩阵的最大特征值提出了一种检测量测数据中是否含有野值的判别方法.此基础上,修正了Kalman滤波器的状态估计算法.使该算法在出现连续型野值时,能明显地降低误差,提高滤波精度.仿真结果证明了该方法的有效性.     

法呢基焦磷酸合酶基因的克隆及双元载体的构建

以留兰香(MenthaspicataL)为材料,利用RT PCR方法克隆法呢基焦磷酸合酶基因(fps)的cDNA,核酸序列分析表明,该基因的编码区长1050bp,编码349个氨基酸.进一步将fps基因插入植物表达载体BinAR,酶切鉴定及测序结果都证明fps的植物双元表达载体构建成功,为fps基因在烟草中的异源表达奠定了基础.     

红豆杉细胞培养生产紫杉醇粗品制备紫杉醇原料药的研究

通过考察紫杉醇提纯的多种方法,优化结晶析出法和柱层析法的工艺参数,首次将红豆杉细胞培养生产的65%的紫杉醇粗品分离纯化为符合美国药典USP标准的紫杉醇原料药.以红豆杉细胞培养生产的65%的紫杉醇粗品为原料提纯制备紫杉醇原料药的方法,重复性好、工艺合理、操作简单、绿色安全,有望解决紫杉醇原料药的药源供应严重不足的问题.     

东北红豆杉紫杉醇的提取纯化与HPLC检测

对东北红豆杉中紫杉醇的提纯与检测技术进行了研究，确立了固相萃取、液．液萃取、正己烷沉淀、硅胶柱层析分离、4℃、V（甲醇）：V（水）=3：1相中冷却放置48h的紫杉醇提取纯化技术，经高效液相色谱法检测，产品纯度达93％以上．     

高效液相色谱法测定紫杉醇的含量

建立用高效液相色谱法测定紫杉醇含量的方法.以贝克曼ODS 4.6‘250mm为色谱柱,乙腈-甲醇(30:70)为流动相,流速为1.0mL/min.紫杉醇在10-25μg/mL范围内线性良好,平均回收率为99.9%,RSD=0.97%.本法所用材料经济,测定结果准确,精度高.     

紫杉醇生物合成代谢调节方法的研究

通过实验研究了紫杉醇生物合成代谢调节方法及一些相关调节因子的作用效果.结果表明,5＇-AMP对紫杉醇生物合成有显著抑制作用,而外加一定水平ATP(50mg/L)对紫杉醇合成有促进作用.因此,蛋白质磷酸化要比其去磷酸化调节更有利于紫杉醇合成.在生产培养基中加入2.5mg/L的三十烷醇使培养体系中紫杉醇产量提高了14倍,而加入13.4mg/L的苹果酸使培养体系中紫杉醇产量提高了15.2倍.此外,α-蒎烯与松油醇及樟脑三种物质同时添加对紫杉醇生物合成的促进作用比各物质单独使用效果更好.     

抗紫杉醇抗体的制备方法

用化学方法将紫杉醇（Ｔａｘｏｌ）与牛血清白蛋白（ＢＳＡ）偶联制成全抗原Ｔａｘｏｌ－ＢＳＡ．以Ｔａｘｏｌ－ＢＳＡ免疫家兔后收集抗血清，分离纯化抗体，经酶联免疫吸附法测定证实抗血清中有特异性抗紫杉醇抗体，将纯化的抗体进行免疫双扩散鉴定，结果表明其有较高滴度（３．２×１０２）．     

高效液相色谱法测定样品中紫杉醇的含量

建立了反相高效液相色谱法测定样品中紫杉醇含量的方法。色谱柱采用中国科学院大连化学物理研究所生产的YWQC18柱（4．6X250mm,5μm）,流动相为乙腈：水：三氟乙酸（40：60：0．1）,检测波长227um,紫杉醇浓度在40μg／ml～1400μg／ml内呈解性关系。回收率98．2～99．3％,变异系数0．75～3．39％。     

细胞悬浮培养制备紫杉醇的研究进展

紫杉醇具有很强的抗癌活性,药用价值很高.综述了生物合成、微生物发酵和细胞悬浮培养制备紫杉醇的研究进展,重点阐述细胞培养过程中外植体的选取、培养基的组成和诱导因子等对紫杉醇产率的影响.     

细胞培养生产紫杉醇研究进展

紫杉醇是红豆杉植物所含有的最为有效的抗癌药物．介绍了对当前国内外利用红豆杉细胞培养生产紫杉醇的最新研究进展,其中着重介绍了提高紫杉醇含量的各种研究方法和研究技术,同时对细胞培养生产紫杉醇的规模化生产做出展望．     

模拟移动床分离紫杉醇

以东北红豆杉树叶为原料,采用无毒、无污染的乙醇作为提取溶剂．在高分子树脂柱和模拟移动床色谱(SMBC)系统上逐级提纯紫杉醇,除去大量非紫杉烷与紫杉烷类杂质,得到了高纯度的产品、同时,对紫杉醇前处理过程中洗脱液条件,随后的SMBC系统实验中的切换时间等条件进行了优化,并总结出一套优化操作条件,为纯化紫杉醇提供了合理的工艺路线．     

非小细胞肺癌细胞A549对紫杉醇耐药机理研究

目的利用非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的耐药株A549/taxol,研究其对紫杉醇耐药性的分子机理.方法通过长时间低浓度的紫杉醇处理A549细胞的方法获得其耐药细胞株A549/taxol,提取细胞总RNA并逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR观察其凋亡基因的表达情况,并通过不同siRNA处理细胞进行基因沉默,研究其在不同遗传背景下对紫杉醇的耐受情况.结果发现非小细胞肺癌细胞对紫杉醇的耐药株A549/taxol的基因表达紊乱,表现为ING5的高表达抑制了凋亡基因Bcl-2的表达水平,而Bcl-2是紫杉醇诱导细胞凋亡所必需的.结论以上结果初探了A549对紫杉醇耐药性的机制,为探寻紫杉醇化疗新策略提供了新的思路.