金钗石斛DnMSI1-like基因的克隆和表达分析

MSIL(MSI1-like)是一类在真核生物中保守的蛋白质,在动物和植物的发育过程中具有多种的功能.本研究从金钗石斛花芽中分离了一个MSIL蛋白的c DNA序列,长度为1 640 bp,含有一个长度为1 206 bp的开放阅读框;预测其编码的蛋白质在序列、结构域组织和空间结构上均与拟南芥At MSI1蛋白相似,故命名为Dn MSI1-like.Dn MSI1-like基因的表达具有明显的组织差异性,在金钗石斛的根、花和腋芽中表达较高,但在叶和假鳞茎中表达较低;低温处理时,花芽中Dn MSI1-like的表达急剧升高.研究结果为深入探索金钗石斛的生长发育如低温相关的开花调控机制提供基础.     

金钗石斛转基因体系的建立

以金钗石斛种子为外植体建立组织培养体系,在含1.5 mg/L 6-BA MS培养基中添加0.5 mg/L NAA和2%蔗糖有效地诱导原球茎,诱导率达91.67%;添加0.25 mg/L NAA和3%蔗糖则更适于原球茎分化形成不定芽;添加0.1 mg/L NAA和2%蔗糖适宜于不定根的诱导. 同时建立了根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)转化金钗石斛的方法和体系:使用根癌农杆菌EHA105侵染30 min,共培养3 d时,金钗石斛根段、根尖和组培幼苗的转化率最高,而含腋芽的茎节则需要共培养5 d. 本文所建立的组培体系与转基因体系将为探讨金钗石斛的基因功能和调控机制等生物学问题,及建立稳定转化的再生植株提供技术手段.     

生长调节物质对金钗石斛器官分化的影响

在植物的组织培养和快速繁殖过程中,外源激素对植株的器官分化有着非常重要的作用.作者采用了不同种类和浓度的激素对金钗石斛的试管苗进行了对比研究,结果表明:低浓度的6-BA、NAA和IBA均有利于诱导金钗石斛试管苗芽的分化,高浓度激素则起抑制作用;NAA和IBA具有促进试管苗根分化的作用,6-BA则抑制根的分化;6-BA和2,4-D能诱导试管苗开花,NAA和IBA则抑制开花;2,4-D能诱导原球茎的分化,而6-BA却抑制愈伤组织的形成.     

金钗石斛茎段诱导原球茎增殖的研究

以金钗石斛茎段诱导出健壮的原球茎为材料,研究培养基中不同激素组合及不同有机物质对原球茎增殖的影响.结果发现以MS 2mg/L6-BA 0.5mg/LNAA的增殖效果最好,50d后统计,其增殖倍数在6倍以上;在添加不同有机物质的研究中,发现10%椰汁有利于金钗石斛原球茎的增殖,而10%香蕉汁则有利于原球茎的分化.     

海水养殖真鲷肝CYP1A基因的克隆与表达

根据国外已发表野生真鲷（Pagrus major）肝CYP1A cDNA同源序列，利用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）从我国海水养殖真鲷（Pagrus major）的肝脏中扩增出P4501A基因全长cDNA序列（1548bp）．用基因重组技术将P4501A cDNA克隆于pTrc-CKS载体，在大肠杆菌TOP10F＇诱导表达，将细菌总蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析；其表达产物为89ku，获得了表达融合蛋白CKS-CYP1A．该项研究将为利用免疫学技术研究有机污染物的毒性效应机制以及探讨P450酶作为毒性效应的生物标志物奠定基础．     

新疆小拟南芥ApCBF1基因的克隆及其过量表达转基因的研究

利用同源克隆法,克隆了小拟南芥的CBF1基因的cDNA（FJ491244）,比对分析结果表明,ApCBF1的cDNA序列的A252,在拟南芥的AtCBF1的cDNA是T252,但翻译的氨基酸均是Ala,表明ApCBF1和AtCBF1翻译的氨基酸序列完全一致。构建了过量表达载体：p35S：ApCBF1,通过花滴法转入小拟南芥中。RT-PCR检测结果表明,转基因T0代AtCBF1基因过量表达。     

从诸葛菜cDNA文库中筛选过氧化物酶基因

在200mmol／L NaCl诱导下构建诸葛菜苗期的cDNA文库，并从cDNA文库中筛选到一个新的过氧化物酶基因OvRCI，该基因cDNA全长1220bp，包含了一个1128bp的开放阅读框．通过同源分析比较及RT-PCR实验等对该基因进行了分析．结果显示该基因是一个诱导型表达的基因。     

甘蓝型油菜BnFAD8基因编码序列的克隆和表达谱分析

通过比对拟南芥等同源基因,克隆了甘蓝型油菜FAD8基因中的保守序列.以得到的FAD8（Fatty Acid Desaturase 8）保守序列片段为信息探针,在GenBank的EST数据库中检索高度同源的EST,并通过人工拼接及RTPCR得到油菜该基因的全长为1299 bp的cDNA序列,命名为BnFAD8.序列分析结果中发现该基因符合质体定位的ω3脂肪酸脱饱和酶序列特征.通过比较22 ℃和8 ℃处理的甘蓝型油菜的BnFAD8基因表达谱,发现该基因在常温下仅存在痕量表达;而在低温条件下在叶中表达出现     

大鼠小脑特异基因Zic的克隆、序列分析和初步表达

EST（AW055732）片段是SD大鼠脑内一特异表达基因cDNA的3‘-端片段,与小鼠和人的Zic基因同源。基于小鼠及人的Zic基因的同源序列,设计引物用PCR方法从SD大鼠中克隆得到该基因的编码区序列（rZic)。该基因编码一锌指蛋白,其锌指结构域与线虫的tra-1基因,果蝇的ci^D基因。人的Gli癌基因和果蝇的opa基因的锌指结构域高度同源,用RT－PCR方法分析了rZic基因在大鼠脑区分布状况。结果表明,rZic基因在小脑中高表达。将该rZic基因克隆至带有6个组氨酸的表达载体pET-32a( )中,用IPTG诱导rZic融合蛋白在大肠杆菌BL21菌株中表达,诱导后重组蛋白质占菌体总蛋白的20．8％。     

人生长激素基因在昆虫细胞中表达的初步研究

将人生长激素hGH的cDNA片段克隆在转移载体pVL1393的多角体蛋白基因启动子下游,构成重组转移载体pVL1393hGH,将该质粒DNA与昆虫杆状病毒（AcNPV）DNA共转染秋粘虫（Spodopterafrugiperda）细胞Sf9,通过体内同源重组,hGH基因取代多角体蛋白基因,从而整合到病毒基因组上,经感染昆虫细胞后表达外源hGH基因,通过反复病毒空斑纯化,获不含多角体的重组病毒,利用免疫化学发光法测定hGH表达量达40μg／mL．     

Vernalization requires epigenetic silencing of FLC by histone methylation

To ensure flowering in favourable conditions, many plants flower only after an extended period of cold, namely winter. In Arabidopsis, the acceleration of flowering by prolonged cold, a process called vernalization, involves downregulation of the protein FLC, which would otherwise prevent flowering. This lowered FLC expression is maintained through subsequent development by the activity of VERNALIZATION (VRN) genes. VRN1 encodes a DNA-binding protein whereas VRN2 encodes a homologue of one of the Polycomb group proteins, which maintain the silencing of genes during animal development. Here we show that vernalization causes changes in histone methylation in discrete domains within the FLC locus, increasing dimethylation of lysines 9 and 27 on histone H3. Such modifications identify silenced chromatin states in Drosophila and human cells. Dimethylation of H3 K27 was lost only in vrn2 mutants, but dimethylation of H3 K9 was absent from both vrn1 and vrn2, consistent with VRN1 functioning downstream of VRN2. The epigenetic memory of winter is thus mediated by a 'histone code' that specifies a silent chromatin state conserved between animals and plants.     

金钗石斛花芽蛋白质提取及其双向电泳体系优化

通过对蛋白质提取方法、水化方式、等点聚焦程序、IPG胶条选择等方面的优化，建立金钗石斛花芽蛋白质双向电泳体系.结果表明，采用酚抽提法提取蛋白，样品与水化液1∶〖KG-*2/3〗40复溶；被动水化，等点聚焦程序B2；选用24 cm pH 3～10NL 胶条和12% 的凝胶；采用考马斯亮蓝G-250染色，获得了可识别1 422个蛋白质斑点的双向电泳图谱，且重复性好、分辨率高，为进一步开展金钗石斛花芽在蛋白质组学水平上的分析提供了技术支持.     

金钗石斛茎段培养再生绿色植株

报道了用金钗石斛 (DendrobiumnobileLindl)的茎段作离体培养和快速繁殖 ,已诱导出丛生芽并发育形成试管苗 ,试管苗经过“炼苗处理” ,移栽成活。同时还试验了 3种培养基对试管苗生长的影响     

木茼蒿SOC1同源基因的克隆及表达分析

SOC1基因是整合各种成花途径信号，启动植物成花转变的关键基因之一.以木茼蒿为材料，利用RT-PCR技术，克隆了木茼蒿SOC1同源基因AfSOC1;利用qRT_PCR技术，对其时空表达模式进行了分析.结果表明:木茼蒿AfSOC1 cDNA长为648bp，编码216个氨基酸，与拟南芥SOC1和金鱼草DEFH68的同源性分别为63.1%和62.1%.该蛋白含有典型的MADS-box，K-box和SOC1转录因子特异性识别序列DVETELFIGP.AfSOC1在木茼蒿的根、茎、叶、花芽及花中均有表达，在叶中和花芽中高表达.在系统进化树中AfSOC1与所有菊科植物SOC1聚在一起.该研究为了解木茼蒿的成花机制及通过分子生物学技术进行木茼蒿的遗传改良提供了理论基础.     

滇产金钗石斛植株与细胞培养产生总生物碱含量分析

选用滇产金钗石斛(Dendrobium nobileLindl)植株不同生长时期和细胞培养不同阶段,采用碱性氯仿提取生物碱,用溴甲酚绿酸性染料比色法测定其含量,最终研究结果表明:金钗石斛茎中总生物碱含量前3年逐年递增,从各部位来看,都呈现叶>茎>根的分布规律,宜3年采收;细胞不同生长阶段中1月至6月总生物碱含量都基本呈现逐月递增。金钗石斛细胞培养具备直接提取替代原药成分的可能性。     

黑节铁皮石斛原球茎诱导、再分化以及腋芽萌发和生根的初步研究

对黑节铁皮石斛的原球茎诱导、再分化以及腋芽萌发和生根进行了初步的研究,以期为黑节铁皮石斛的人工繁殖提供理论指导。采用植物组织培养和单因子试验的方法,获得了黑节铁皮石斛带芽茎段最佳的消毒方式为70%酒精处理30s后再用0.1%HgCl2处理20min。黑节铁皮石斛带芽茎段原球茎诱导的最佳培养基为MS＋KT1mg/L＋NAA0.1mg/L。黑节铁皮石斛带芽茎段原球茎再分化的最佳培养基为MS＋KT2mg/L＋NAA0.5mg/L。黑节铁皮石斛带芽茎段腋芽萌发的最佳培养基为MS＋KT2mg/L＋NAA0.5mg/L。黑节铁皮石斛带芽茎段生根的最佳培养基为1/2MS＋NAA0.5mg/L。这些实验结果为黑节铁皮石斛试管苗的工厂化生产奠定了技术基础。     

区域物流供需耦合多主体系统协同发展研究

随着物流服务在生产性服务中作用的凸显,区域物流已成为区域经济发展的重要支撑力量．基于供需耦合的多主体物流系统作为物流企业可持续发展的目标,对于物流企业增加市场竞争力,带动物流产业经济发展具有重要作用．通过对创新区域物流多主体系统协同的构造、机理和应用的研究分析,有利于促进区域物流供需耦合系统协同向更加合理的方向发展,为物流企业的创新实践提供借鉴．     

苏云金芽孢杆菌aiiA基因载体构建及石斛兰转化

 细菌性软腐病是石斛兰及其它兰花栽培和生产中的一大危害。苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis（Bt）中含有aiiA基因,该基因转入一些植物可赋予植物表现出软腐病抗性。从Bt菌中克隆出aiiA基因,并装载入植物表达载体pCAMBIA1301,构建出可用于转入石斛兰的pSAN载体;首次利用根癌农杆菌EHA105将pSAN载体转入石斛兰,并获得潮霉素抗性苗。这些抗性苗经GUS组织化学染色和PCR检测证实为转基因苗, 这将为获得具有软腐病抗性的石斛兰品种打下基础。