细胞外基质对体外培养兔关节软骨细胞增殖及基质代谢的影响

目的：观察软骨组织的主要细胞外基质成分：Ⅱ型胶原、蛋白多糖、透明质酸对体外单层培养的兔关节软骨细胞的增殖及基质合成的影响。方法：原代分离、培养兔关节软骨细胞,分别向其中添加Ⅱ型胶原、蛋白多糖和透明质酸。采用改良MTT法检测细胞的增殖情况,Aleian Blue法检测基质蛋白多糖含量及羟脯氨酸法测定软骨细胞胶原产量。结果：单独添加Ⅱ型胶原（50μg／mL）组、蛋白多糖（50μg／mL）组和透明质酸（100μg／mL）组及三者联合添加实验组与对照组相比,对关节软骨细胞的增殖及胶原、蛋白多糖的合成未见明显统计学差异（P〉0．05）。结论：正常软骨组织的主要基质成分对体外培养的兔关节软骨细胞增殖、蛋白多糖和胶原的合成无明显影响。     

碱性成纤维细胞生长因子对无血清培养大鼠生长板软骨细胞的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）用于无血清培养扩增软骨细胞的可行性及最适质量浓度。方法：分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞（rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC）。细胞化学和免疫细胞化学染色的方法检测第1代RGC中蛋白多糖和Ⅱ型胶原的表达。观察0．1、1．0、10．0和100．0μg/L bFGF对无血清培养RGC形态的影响,并分别用^3H—TdR和^3H—Proline掺入法检测上述质量浓度bFGF对无血清培养RGC增殖和胶原合成的影响。结果：第1代RGC表达蛋白多糖和Ⅱ型胶原,保持了软骨细胞的分化表型。随着bFGF质量浓度的增加RGC的形态由多角形变为梭形和圆形。与无血清对照组相比,上述4个质量浓度的bFGF均显著促进RGC的增殖和胶原合成（P〈0．05）,其中1．0和10．0μg／L bFGF促RGC增殖的作用与10％胎牛血清（FBS）对照组差异无显著性意义（P〉0．05）,但促胶原合成作用较弱,相当于10％FBS对照组的印％左右（P〈0．05）。结论：bFGF可用于无血清扩增软骨细胞,1．0～10．0μg/L是适宜的质量浓度范围,但其促胶原合成作用较弱,还需添加其他因子以弥补促胶原合成作用的不足。     

腺病毒介导ERK-2基因在生长板软骨细胞中的表达

目的:构建ERK-2基因重组腺病毒载体,检测构建的腺病毒感染原代大鼠生长板软骨细胞的效率以及目的基因的表达。方法:将ERK-2 cDNA亚克隆到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共同转染E.Col.i B J5183,将筛选、鉴定的重组腺病毒质粒线性化后转染HEK293细胞进行病毒颗粒的包装;流式细胞术检测不同感染复数(MO I)ERK-2重组腺病毒感染原代培养的大鼠肋生长板软骨细胞的效率,W estern b lot检测腺病毒感染的生长板软骨细胞中ERK-2蛋白的表达。结果:成功构建ERK-2重组腺病毒,MO I 50的腺病毒感染原代生长板软骨细胞的效率大于90%,感染的生长板软骨细胞中ERK-2表达显著增加。结论:构建的重组腺病毒可介导ERK-2基因在原代大鼠生长板软骨细胞中高表达。     

瞬态电磁脉冲对细胞增殖的影响

实验采用有丝分裂指数测定法及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法,研究瞬态电磁脉冲对人外周血淋巴细胞及艾氏腹水癌细胞增殖的影响。结果发现,没有植物凝集素ＰＨＡ时,１００ｋＨｚ和２００ｋＨｚ瞬态电磁脉冲对淋巴细胞有丝分裂指数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量无显著影响;有ＰＨＡ时,１００ｋＨｚ瞬态电磁脉冲促进淋巴细胞摄取＾３Ｈ－ＴｄＲ,细胞有丝分裂指数增加,２００ｋＨｚ瞬态电磁脉冲抑制淋巴细胞摄取＾３Ｈ－ＴｄＲ,细胞有丝分裂指     

干旱胁迫对枣树组培苗生长的影响

在组培条件下,研究了不同浓度的聚乙二醇(PEG-6000)胁迫对木枣(Zizyphus jujube millMUZAO)和骏枣(Zizyphus jujube millJUNZAO)组培苗生长的影响。结果表明:随胁迫浓度的提高,苗木高生长增量呈现下降趋势,叶片数量生长表现出先促进后抑制,但叶片受害程度逐渐增加,分蘖数增加呈现出先升后下降趋势,表明适当的胁迫有利于芽的分蘖。     

MicroRNA-25对大鼠骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡调节作用

探讨miR-25对白细胞介素1β(IL-1β)促进OA软骨细胞凋亡和增殖的影响。以木瓜蛋白酶膝关节腔注射诱导骨性关节炎动物模型和SD大鼠骨性关节炎软骨细胞原代培养。IL-1β体外刺激OA软骨细胞,模拟骨性关节炎体外环境。MiR-25mimic或inhibitor转染至OA软骨细胞。利用Annexin V-FITC/PI和CCK-8法检测软骨细胞细胞凋亡和细胞增殖。miR-25过表达明显抑制软骨细胞凋亡而miR-25低表达促进软骨细胞凋亡(P0.05);miR-25 mimic促进软骨细胞增殖,而miR-25 inhibitor抑制软骨细胞增殖(P0.05)。miR-25介导OA发病发生,进展中发挥着保护性调节作用,抑制OA软骨细胞凋亡和促进其增殖作用,可能对OA发病机制有新的认识和提示OA新治疗策略。     

活性初乳素对喉癌细胞增殖的影响

采用活性初乳素替代血清培养细胞的方法，观察了不同浓度的活性初乳素对喉癌细胞（ＨＥｐ－２）增殖的影响，并观察了细胞生长曲线的变化。结果表明：活性初乳素浓度较低时，随其浓度的增高对细胞增殖的刺激作用增大，当活性初乳素浓度为２％时刺激作用最大（ｐ〈０．００１），而高浓度的活性初乳素（４％、８％、１６％）对细胞增殖有明显的抑制作用（ｐ〈０．０１）；培养在无血清培液中的细胞不增殖，在含１０％血清或０．２％活     

雌二醇对血管平滑肌细胞增殖的影响

1材料和方法1．1体外培养小牛胸主动脉SMC[4]1．2SMC48小时增殖率的测定[5]加药情况如下：0．1ng／mlE2组,lng／mlE2组,10ng／mlE2组,100ng／mlE2组,E2溶剂（DMSO,终浓度＜0．05％）对照和培养液对照;每组两种血清浓度2％,15％,各8孔,继续培养48小时;MTT法检测增殖率。1．3SMC集落形成率的测定[6]分组：0．1ng／mlE2,1ng／mlE2,10ng／mlE2,培养液对照和溶剂对照,12天后计算集落形成率。2结果2．1体外培养SMC形态特征贴决后3－4天SMC自组织块边缘萌出（图版a,b）,原代细胞形状多样,有星形、带状三角形、梭形等…     

血小板体积对血小板聚集功能影响的研究

通常人群中血小板平均体积8.65±1.44fl超过这一范围被称为大血小板。在实验中发现,平均血小板体积较大者一分钟聚集率,五分钟聚集率,最大聚集率,到达最大聚集率的时间以及Ⅱ相聚集出现的时间均与正常人群血小板的聚集程度有显著的差异。     

阿维A对HaCaT细胞增殖的影响

目的:探讨阿维A对角质形成细胞(HaCaT)增殖的影响及其发挥作用的适宜浓度.方法:分别以浓度为1×10-7mol/L、1×10-6mol/L、5×10-6mol/L阿维A作用于HaCaT细胞,用四氮唑盐类化合物(MTS)比色法检测每组12、24、48和72 h HaCaT细胞的增殖情况.结果:与空白对照组相比,大于或等于1×10-6mol/L阿维A可以抑制HaCaT细胞增殖,并且在作用24 h后随着阿维A浓度的增加,其对HaCaT细胞增殖的抑制作用增强.结论:阿维A抑制HaCaT细胞增殖适宜浓度为5×10-6mol/L.     

DiI荧光标记的软骨细胞与支架材料复合后的观察

目的:通过Dil荧光染料标记观察软骨细胞在聚乳酸/乙醇酸共聚物支架(PLGA)体外和体内培养环境中的生长状态,为研究组织工程化软骨探索一种理想的软骨细胞示踪方法.方法:体外分离培养大鼠剑突软骨细胞,应用DiI标记软骨细胞,通过MTT法测定细胞的增殖活性.DiI荧光标记的软骨细胞种植于PLGA支架上分两组:一组体外培养1周,另一组体外培养1周后,再植入同系大鼠大网膜体内培养1周.分别取出细胞一支架复合物,在荧光显微镜下观察体外和体内条件下软骨细胞的荧光表达情况.结果:应用DiI标记不影响软骨细胞的增殖,MTT测定结果显示标记组和对照组的A值未见显著性差异(P>0.05).标记后的软骨细胞显示环状红色荧光,胞核未着色.体外培养和体内培养的软骨细胞一支架复合物,均可在荧光显微镜下观察到红色荧光表达.结论:DiI荧光染料能够有效标记软骨细胞,标记的细胞一支架复合物可直接在荧光显微镜下进行观察,可作为体外和体内构建组织工程软骨的较好的示踪方法.     

人牙髓细胞三维生物打印的初步研究

通过生物打印方法构建含人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)的组织工程三维结构体。探讨对hDPCs进行三维生物打印的可行性。用常规体外培养hDPCs至第4代。将细胞悬液与海藻酸钠-明胶水溶胶混合,制备hDPCs-海藻酸钠-明胶水溶胶共混物。细胞终密度为2×106/mL。用生物打印机根据预先设计的参数进行生物打印,构建组织工程三维结构体。对结构体进行肉眼观察和倒置相差显微镜观察。用钙黄绿素-AM和碘化丙啶双荧光染料对结构体进行染色,激光共聚焦显微镜观察分析结构体中hDPCs的活性。通过生物打印技术的结果可按照预先设计的参数打印出含有hDPCs的网格状的水凝胶结构体,该结构体的大小约为5 mm×5 mm×1.5 mm。倒置相差显微镜下可见结构体内微丝的直径约300μm,微丝间的孔隙相互通连,孔隙大小约350μm×350μm,hDPCs在结构体中呈球形均匀分布。激光共聚焦显微镜观察证实结构体中大部分细胞存活。初步证明hDPCs可耐受生物打印过程。通过研究说明三维生物打印技术构建出了含人牙髓细胞的组织工程三维结构体,实现了hDPCs的生物打印,为生物打印技术应用于牙组织工程奠定了基础。     

麝香百合组培快速繁殖技术研究

通过对百合球茎鳞片离体组织培养的研究,探讨了丛生芽诱导、继代增殖培养、生根培养及移栽等方面的组培快速繁殖以及生产上实用的组培技术,结果表明,MS 6-BA3.0mg\L NAA0.5mg\L KT0.14mg\L 2.4-D0.3mg\L 蔗糖35mg/L为适宜的诱导培养基,其诱导率为92%;MS 6-BA2.5mg/L NAA0.5mg/L KT0.1mg/L 2.4-D0.2mg/L 蔗糖65g/L为最佳的继代增殖培养基,其繁殖倍数为10.9倍,1/2MS NAA1.0mg/L 蔗糖35g/L的培养基诱导生根效果较好, 其生根率为86.7%,移栽成活率为100%,这为麝香百合大规模工厂化育苗提供了理论依据和技术保证。     

电刺激促进成骨细胞粘附特性的实验研究

针对骨组织工程中成骨细胞与基质材料间促粘附这一重要问题,研究微量直流电刺激对成骨细胞粘持性的影响。方法取兔骨髓基质干细胞来源的成骨细胞体培养,于接种即时行微量直流电刺激,刺激电流密度为１００μＡ／ｃｍ＾２,观察电刺激后１、２、６、１２ｈ及２４ｈ各时间点接种成骨细胞粘附情况、体视学计量粘附细胞数量。结果１００μＡ／ｃｍ＾２微量直流电刺激下,阳极区细胞粘附数量与阴极区相比,各时间点均寺加;无直流电刺激     

Effects of simulated microgravity on the alkaline phosphatase activity and intracellular calcium concentration of cultured chondrocytes

The effects of simulated microgravity on matrix mineralization of chondrocytes were examined using cultured chicken embryonic chondrocytes as the model. In four days, there was a time course decrease in alkaline phosphatase activity of chondrocytes, a marker of matrix mineralization. Meanwhile, in two days, there was a significant drop in intracellular calcium concentration in contrast to the control. These results indicate that simulated microgravity can suppress matrix calcification of cultured chondrocytes, and intracellular calcium may be involved in the regulation of matrix calcification as the second messenger. Yang Shuzhang made the same contribution to this work as the first author     

人血小板生成因子（TPO）的cDNA克隆及促血小板生成效应

用ＲＴ－ＰＣＲ方法，从人胎肝总ＲＮＡ中扩增得到约１．１ｋｂ人ＴＰＯｃＤＮＡ编码顺序，并进行分子克隆．将其中一个克隆（ｐＴＰＯ４７）亚克隆到Ｍ１３载体，测定全部ＤＮＡ顺序．它的碱基顺序与已报道的顺序完全相同，有一个１０５９ｂＰ的开放阅读框架可编码３５３个氨基酸．ｐＴＰＯ４７亚克隆到哺乳动物表达载体ｐＣＥＰ４，在哺乳动物２９３细胞系瞬时表达后，进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交，结果显示有约１．４ｋｂ的转录产物．瞬时表达培养液腹腔注射小鼠后，可提高血小板计数４２．３％．血小板生成因子的克隆对进一步研究血小板生成调节以及该因子作用的分子机理具有重要意义．     

CPP/PLLA软骨组织工程支架复合材料制备及其性能表征

采用溶媒浇铸/粒子滤取技术与气体发泡相结合的方法制备了三维、连通、微孔网状结构的CPP/PLLA软骨组织工程支架复合材料.测试了CPP/PLLA软骨组织工程支架复合材料的物理、力学性能并借助扫描电镜对其微结构进行了观察.结果表明,支架复合材料的初始物理、力学性能和微结构满足软骨组织工程对其支架材料的要求.     

鸟氨酸脱羧酶及多胺对细胞增殖影响

鸟氨酸脱羧酶(Ornithinedecarboxylase,ODC)是多胺生物合成中的限速酶,ODC活性和多胺水平对细胞增殖起关键作用.本文就近年来的有关报道,对它们的结构、对细胞增殖的影响及其作用机理加以综述.