雄激素受体与P21活化激酶6在前列腺癌组织中的表达及意义

应用免疫组织化学SP法检测PCa组织及前列腺增生(BPH)组织中AR、PAK6的表达,探讨了雄激素受体(AR)、P21活化激酶6(PAK6)与前列腺癌(PCa)发生的关系。结果表明:AR、PAK6在BPH和PCa组织中均有阳性表达,BPH和PCa前列腺组织中AR阳性表达率无显著性差异(P0.05),而BPH和PCa前列腺组织中PAK6阳性表达率有显著性差异(P0.05)。70例高、中、低分化前列腺癌中AR、PAK6表达阳性率逐渐升高,PCa组织中AR与PAK6二者表达呈现明显的正相关性。这说明,PAK6和AR阳性表达程度与PCa分级有关,提示二者在PCa的发病中可能扮演重要角色,检测PAK6和AR的变化对判断PCa的生物学行为有参考价值。     

MG-132诱导宫颈癌细胞表达HPV病毒蛋白E6和E7

使用不同浓度的蛋白酶体抑制剂MG-132处理官颈癌细胞系CaSki和HeLa S3细胞,WesternBlot检测发现2-5 mg/L MG-132 37℃处理3 h明显增强CaSki细胞中人类乳头瘤病毒HPV E6和E7蛋白的表达量,增加MG-132浓度或延长处理时间并未见E6和E7蛋白量的增加.用相同的方法处理HeLa s3细胞,也观察到HPV E7蛋白的增加.XTT活细胞分析和台盼蓝死细胞检测显示2 mg/L MG-132处理癌细胞3 h,其细胞死亡率10%.这一发现将有可能协助提高以E6、E7蛋白作靶位点的生物导弹疗法的效果.     

58型HPV E6蛋白的原核表达与分离纯化

宫颈癌是一种在女性人群中的常见肿瘤,严重威胁着女性的生理和心理健康;而人类乳头瘤状病毒(HPV)的长期感染是宫颈癌发生的主要诱因.因此,HPV病毒的研究对于我们了解和防治宫颈癌有着十分积极的意义.目前,国外的研究比较多的针对于16型和18型的HPV病毒;但是对于我国比较常见的58型HPV病毒却研究甚少.所以,本试验依据实验室现有的表达纯化平台和噬菌体展示多肽筛选平台,设计并构建了HPV58 E6蛋白的原核表达体系,并对E6重组融合蛋白进行了诱导表达.通过对表达获得的包涵体蛋白进行反复的洗涤、亲和层析以及复性等纯化步骤,得到了纯度较高的E6融合蛋白.     

胞外ATP对VK2/E6E7细胞胞内pH的影响

 利用激光扫描共聚焦显微镜（Confocal microscope）采用pH依赖的荧光探针Snarf-4F测量细胞胞内pH(pHi)方法,发现胞外ATP能剂量依赖（10~1 000 μmol/L）地降低人阴道上皮细胞株VK2/E6E7细胞pHi。当胞外加入200 μmol/L ATP时,能快速地使VK2/E6E7细胞pHi降低,此降低的pHi在洗脱ATP后可迅速恢复。这些结果表明胞外ATP能引起VK2/E6E7细胞胞内酸化。     

拟南芥肌动蛋白相关蛋白基因AtARP5和AtARP6共同参与DNA复制

染色质重塑因子是一类利用ATP水解的能量主动重塑染色质结构的蛋白质,其中的INO80亚家族包括两个在进化中高度保守的重要成员,INO80和SWR1.两者通过结合包括肌动蛋白相关蛋白(Actin-Related Protein,ARP)在内的多个亚基,以复合物的形式对染色质结构动态调控,在真核生物的多个表观遗传调控途径中...     

人乳头瘤病毒16及18型E6与p53表达的关系

采用ＳＰ免疫组织化学方法,比较了６８例宫颈癌组织中ＨＰＶ－１６、１８Ｅ６和ｐ５３蛋白的表达及其相互关系。结果表明,６８例宫癌中有６０例ＨＰＶ－１６、１８Ｅ６蛋白和１７例ｐ５３蛋白呈阳性表达,阳性率分别为８８．２％和２５．０％;在５９例ＨＰＯＶ－１６、１８Ｅ６蛋白过度表达的宫颈癌中有５４例ｐ５３蛋白为阴性或弱阳性表达,二呈负相关（Ｐ〈０．０１）．ｐ５３蛋白阳性表达与组织学类型有关,其阳性率在宫颈腺     

与m6A修饰和免疫基因相关的长链非编码RNA在前列腺癌中的作用

前列腺癌是男性癌症死亡的第二大原因,前列腺癌患者五年生存率仅为30%。m6A修饰和长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)在前列腺癌的预后中起着非常重要的作用。因此,研究m6A与lncRNA之间的关系对改善前列腺癌患者的预后生存将有所帮助。本文研究了与m6A相关的lncRNA和与免疫基因相关的lncRNA,通过LASSO分析构建了基于六个lncRNA基因的预后模型,将前列腺癌样本分为高、低风险组,KM生存分析显示高风险组患者预后较差。通过单因素和多因素分析发现该模型可能是预测前列腺癌患者的独立因素。通过突变数据分析发现肿瘤突变负荷与该模型存在密切联系;免疫浸润分析得出高、低风险组中免疫细胞浸润存在差异;GO和KEGG分析结果发现m6A修饰主要富集在肌肉收缩、离子通道活性上。这些研究结论有望提高前列腺癌患者的预后生存率。     

泛素连接酶Nedd4调控人前列腺癌细胞的增殖与凋亡

为了研究泛素连接酶Nedd4对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,利用小RNA干扰技术,通过慢病毒包装,侵染前列腺癌细胞DU145,达到下调Nedd4表达的目的.MTT检测表明,下调Nedd4表达可以抑制DU145细胞的增殖;DAPI染色发现,下调Nedd4表达的DU145细胞对星形孢菌素诱导的细胞凋亡更加敏感.这些结果都说明,下调Nedd4的表达不仅可以抑制DU145肿瘤细胞增殖,而且可以促进细胞凋亡.     

转录因子KLF7高表达与前列腺癌发生的相关性及其靶基因预测

目的 探讨KLF7高表达与前列腺癌(PCa)发生的相关性,并对其可能的下游靶基因进行筛选.方法 比较前列腺增生(BPH)患者(n=22)以及PCa患者(n=30)血糖、血脂及一般资料的差异;调取石蜡包埋的前列腺组织标本,运用免疫组织化学法检测组织中KLF7及其下游因子IL-6,以及肿瘤发生相关因子E-钙粘蛋白、Ki67...     

叶绿体CrFtsZ2蛋白对E.coli形态的影响

FtsZ蛋白在细菌的分裂中担任着重要作用,能够在分裂位点形成一个环状结构而控制细菌的分裂过程。胞内FtsZ蛋白浓度的异常升高或降低均可阻断正常的细胞分裂过程进而形成分裂异常的丝状菌体。我们为了进一步研究衣藻FtsZ蛋白的生物学活性,建立了CrFtsZ2-EGFP融合蛋白原核表达的对照体系。结果表明：低浓度IPTG促进转化有表达质粒pLGZ2的大肠杆菌JM109伸长,高浓度IPTG则抑制其伸长;融合表达质粒的过量表达导致宿主菌形成了丝状菌体,不但菌体长度随浓度梯度而有规律性的变化,而且CrFtsZ2-EGFP融合蛋白沿着宿主菌体的纵轴方向有规律地聚集成荧光点或荧光带。更进一步验证了衣藻CrFtsZ2蛋白的功能。     

利用昆虫-杆状病毒表达系统制备HPV16E6蛋白

目的利用昆虫-杆状病毒表达系统高效表达HPV16E6蛋白。方法将HPV16E6基因克隆入供体质粒pFastBac-HTb,然后再重组入杆状病毒基因组;用带有目的基因的杆状病毒转染昆虫（Sf-9）细胞,27℃培养72 h,收集被转染细胞,SDS-PAGE,Western-blot分析鉴定表达蛋白。结果SDS-PAGE分析显示所表达蛋白分子量约为24KD,Western-blot结果表明表达产物为HPV16E6蛋白。结论利用昆虫杆状病毒表达系统获得HPV16E6蛋白的高效表达。     

有氧间歇训练对心肌梗死大鼠心肌细胞的增殖作用及相关机制

目的:通过建立SD大鼠心肌梗死模型,观察间歇训练对心梗大鼠心肌细胞的增殖作用并探讨其内在作用机制.方法:成年雄性SD大鼠40只,造模后,随机分为3组:假心梗组(CON);心梗组(MI);心梗+间歇训练组(MI+AIT),每组12只.间歇训练共计8周.结果:免疫组化结果提示,正常心肌组织鲜见细胞增殖现象;心肌梗死可造成梗死边缘区细胞代偿性增加;间歇训练可显著性增加细胞增殖核抗原PCNA,BrdU和ki-67的表达水平.另外,心梗还可引起细胞增殖核抗原调节蛋白p70S6K及其上游调节蛋白mTOR显著性降低(P<0.05);而mTOR的上游调节蛋白PI3K,Akt也具有相似的变化趋势.相对地,间歇训练可增加心肌细胞膜IGF-R1水平(非IGF-R2),上调PI3K-AKt-mTOR信号通路活性,增加p70S6K磷酸化水平(P<0.05).结论:间歇训练介导的细胞增殖作用与其上调IGF-R1表达水平,激活细胞PI3K-Akt介导的增殖通路相关.     

GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用

目的探讨GRIM-19基因对前列腺癌DU145细胞的促凋亡作用,并分析相关机制.方法将构建成功的pGRIM-19重组质粒转染DU145细胞株,应用MTT法检测其对细胞增殖能力的影响,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,应用半定量RT-PCR检测GRIM-19及caspase-3 mRNA转录水平.结果流式细胞术结果显示:与对照组比较,pGRIM-19重组质粒明显抑制DU145细胞增殖,并使细胞周期发生改变,多数细胞抑制在G0/G1期,细胞凋亡率增加明显;通过RT-PCR电泳结果证实:pGRIM-19重组质粒明显促进GRIM-19的表达,同时激活caspase-3.结论重组质粒pGRIM-19可明显抑制DU145细胞增殖,并促进其凋亡,其凋亡的发生机制与激活caspase-3有关.     

Brd4在HPV E2蛋白转录调节中的作用

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）引起的宫颈癌患者日益增加,而HPVE2蛋白在宫颈癌发生和发展过程中起着重要作用,对其功能尚在研究中,本文就近年对Brd4在HPVE2蛋白转录调节中的作用研究作一综述。     

小鼠T细胞发育相关基因RS21-C6的表达谱及其编码蛋白的细胞内定位

研究了小鼠T细胞发育相关基因RS21-C6的表达谱及其在细胞内的定位.提取小鼠8种组织及处于5个发育阶段的胸腺细胞总RNA,逆转录成cDNA后,利用RS21-C6基因特异性引物,观察了RS21-C6基因的表达;同时构建pEGFP-N3/RS21-C6重组表达载体,在激光共聚焦荧光显微镜下观察了细胞内荧光分布.RT-PCR结果表明RS21-C6基因在所检测的组织和细胞中除骨骼肌和CD4SP胸腺亚群外均有不同程度的表达.激光共聚焦荧光显微镜观察结果表明,RS21-C6-GFP(绿色荧光蛋白)融合蛋白表达在胞浆内,RS21-C6-GFP融合基因的瞬间和稳定表达均获得了相同结果.     

超临界萃取维生素E对Hela细胞凋亡作用

为了探讨超临界萃取V。对Hela细胞凋亡效果及其作用机理,以Hela细胞作为实验材料,从细胞生长抑制率、细胞形态学、TUNEL等方面研究超临界萃取Ve对Hela细胞凋亡效果和作用机理。实验结果表明,超临界萃取维生素E对人子宫颈癌Hela细胞生长有抑制作用,且呈时间和剂量效应。超临界萃取Ve影响Hela细胞的主要机理是下调癌基因Bcl-2。     

泛素连接酶E6AP敲减及过表达稳转细胞株的构建与鉴定

目的旨在筛选出能稳定敲减及过表达泛素连接酶E6AP的细胞株,在这两种情况下比较已知底物Arc的泛素化修饰区别,以期进一步阐明E6AP通过调控底物的泛素化进而影响底物下游功能的机理。方法从人胚肾293细胞中提取RNA再反转录成cDNA,以c DNA为模板通过PCR扩增得到E6AP目的条带,将E6AP基因克隆至p LVXIRES-mCherry质粒,构建过表达质粒;同时,合成可特异性结合E6AP mRNA的shRNA,并克隆至GIPZ质粒,构建敲减质粒。结果通过嘌呤霉素筛选得到敲减及过表达稳转细胞株,通过免疫共沉淀实验比较底物的泛素化修饰区别。结论成功构建E6AP敲减及过表达稳转细胞株,并能相应影响HEK-293细胞中底物Arc的泛素化修饰水平。     

乳腺癌中肿瘤相关巨噬细胞的浸润与eIF4E表达的关系

目的:探讨乳腺癌组织中CD163~+肿瘤相关巨噬细胞的浸润情况与eIF4E表达及其与临床病理特征的关系,并分析两者的相关性.方法:收集乳腺癌组织92例及癌旁正常乳腺组织74例,应用Maxvision法进行免疫组化染色检测eIF4E及CD163表达,并分析其与乳腺癌临床病理特征的关系.结果:乳腺癌组织中的CD163表达量高于癌旁正常组织(P0.001),乳腺癌组织中的eIF4E表达量高于癌旁正常乳腺组织(P0.001),CD163的表达与ki67表达相关(P0.05),CD163与eIF4E的表达呈正相关(r=0.273,P0.05).结论:乳腺癌中CD163和eIF4E的表达明显高于癌旁组织,CD163的过表达与ki67的表达相关,同时与eIF4E呈正相关,提示CD163与eIF4E的共同作用可能参与了乳腺癌的发生与发展.     

增强型绿色荧光蛋白表达对鼠C6细胞生物学特征影响的研究

脂质体包裹质粒pEGFP-N1转染C6细胞,经G418筛选,得到稳定表达绿色荧光的C6-EGFP细胞.细胞计数,MTT,流式细胞术分别测定C6细胞在转染绿色荧光蛋白后增殖性,细胞活力以及细胞周期等生物学特性.C6细胞在转染了绿色荧光蛋白基因后细胞增殖性降低,细胞活力降低,细胞周期也发生了一些改变.