低强度脉冲超声对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响

 为了研究低强度脉冲超声促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的有效性,初步筛选频率和强度参数,分别对细胞施加不同参数(频率、强度)的超声,采取CCK-8法检测细胞的增殖情况,碱性磷酸酶检测试剂盒检测分化效果,茜素红染色观察矿化效果。发现30mW/cm²和40mW/cm²的超声对细胞产生促增殖作用,50mW/cm²抑制增殖;1.5MHz和1.7MHz的较低强度组均较对照组的ALP活性有增加;1.5MHz,40mW/cm²的超声组矿化效果较其他组好。研究结果表明,低强度的脉冲超声可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖、分化和矿化能力,可能是防治骨质疏松的可行手段之一。     

苹果原花青素对成骨细胞氧化损伤的保护作用

观察苹果原花青素对过氧化氢(H2O2)引起的成骨样细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用。培养成骨样细胞MC3T3-E1,加入不同浓度的原花青素(20,30,40,50μg/mL),及H2O2(100,200,300,400μmol/L),采用MTT比色试验法观察MC3T3-E1的增殖情况;以40μg/mL的原花青素预处理细胞30 min,后加入300μmol/L H2O24 h,采用EdU试剂盒,碱性磷酸酶(ALP)活性检测法,活性氧(ROS)检测法,超氧化物歧化酶(SOD)活性检测法以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的ELISA检测法,观察原花青素对H2O2引起的成骨样细胞MC3T3-E1氧化损伤的保护作用。H2O2作用后,MC3T3-E1细胞的增殖受到抑制,其所产生的碱性磷酸酶(ALP)活性、SOD活性降低,而ROS与TNF-α浓度明显升高,但预先30 min给予细胞原花青素,就可以有效逆转这一趋势,苹果原花青素可有效减轻过H2O2引起的成骨样细胞MC3T3-E1氧化损伤。苹果原花青素有潜在的治疗骨质疏松症作用。     

淫羊藿甙对高浓度葡萄糖抑制MC3T3-E1细胞成骨分化的保护作用*

为了探讨淫羊藿甙对高浓度葡萄糖抑制MC3T3-E1细胞成骨分化是否具有保护左右,采用含10 mmol/Lβ-磷酸甘油、50 mg/L维生素C以及10~(-8)mol/L地塞米松的α-MEM培养基诱导MC3T3-E1细胞成骨分化。根据培养基葡糖糖含量不同分别设置对照组(5. 5 mol/L葡萄糖)、高糖组(22 mol/L葡萄糖)和药物干预组(22 mol/L葡萄糖)。药物干预组各组细胞换液时分别加入0. 1μmol/L、1. 0μmol/L和10μmol/L的淫羊藿甙。通过茜素红染色、钙含量检测方法检测诱导培养25 d后细胞外钙含量,使用Real time PCR检测诱导培养7 d后成骨标志分子表达,观察各组MC3T3-E1细胞的成骨分化情况。使用活性氧检测试剂盒检测诱导培养7 d后的各组MC3T3-E1细胞内自由氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平。结果表明:22mmol/L葡萄糖组细胞钙含量最低,成骨标志分子ALP、Osteorix及Runx2表达降低,细胞内自由氧生成水平升高,MC3T3-E1细胞成骨分化受到抑制。使用不同浓度淫羊藿甙干预后,细胞钙含量升高,成骨标志分子ALP、Osteorix及Runx2表达升高,细胞内自由氧生成水平降低,MC3T3-E1细胞成骨分化抑制作用呈现浓度依赖性的减弱。可见淫羊藿甙能够通过降低细胞内自由氧水平,减弱高浓度葡萄糖对成骨细胞分化的抑制作用。     

氧化石墨烯/磷酸钙生物水泥体外生物相容性研究

等摩尔的Ca_3(PO_4)2-CaHPO_4-CaCO_4(CPCs)水泥系为固相,不同质量浓度的氧化石墨烯(GO)水分散液(0~24mg/mL)为液相,按一定的固液比固化,得到复合材料GO/CPCs.以成骨细胞MC3T3-E1为对象,初步探究该复合材料试样的体外生物相容性.扫描电镜观察细胞贴壁形态,MTT法评价细胞活力,碱性磷酸酶(ALP)活性检测探讨材料的骨诱导性.结果显示:MC_3T3-E1细胞在材料表面状态良好,产生胞质突;GO的添加能够增强MC3T3-E1细胞活力;GO/CPCs在短期内(1d)促进MC3T3-E1细胞早期分化.GO/CPCs有望成为一种新型骨组织替代材料.     

匀浆法提取-高效液相色谱法测定金银花中的绿原酸

分别用3种前处理方法对金银花中的绿原酸进行提取,用高效液相色谱法进行检测.结果表明,用匀浆法提取所需时间明显少于热回流提取法和超声波提取法,采用80%的甲醇匀浆法提取金银花中的绿原酸,提取液中的绿原酸以W aters X terra RP18(3.9 mm×150 mm,5μm)色谱柱为固定相,1%醋酸为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL/m in,检测波长345 nm.在该色谱条件下,绿原酸质量浓度在5.0~200μg/mL内成良好的线性关系,样品平均加标回收率为118%,相对标准偏差(RSD)为4.5%(n=6),结果令人满意.     

匀浆法提取、离子色谱法测定烟草中的糖

研究了用匀浆法提取、离子色谱法测定烟草中的糖.烟草样品用水匀浆法提取;提取液中的糖以CarboPac PA1(4×250 mm,5μm)阴离子交换柱为固定相,0.2 mol/L氢氧化钠溶液为流动相分离,脉冲安培检测器检测;1次进样可同时测定烟草样品中葡萄糖、果糖、蔗糖.方法加标回收率在96%～103%之间,相对标准偏差均小于2.6%.检测限均小于50μg/L,结果满意.     

扩展青霉(Penicillium expansum)PF898基因组DNA提取方法的比较

利用CTAB法、SDS改进法和SDS快速法3种DNA提取代表性方法,对扩展青霉(Penicillium expansum)PF898基因组DNA的提取进行比较研究.CTAB法提取的DNA样品纯度最高,SDS裂解法制备的DNA得率最高;CTAB法和SDS改进法所得DNA都可直接应用于限制性酶切分析;3种方法所提取的DNA均能满足扩展青霉PF898脂肪酶基因和18S rRNA的PCR扩增.总体而言,SDS法简便、快速、得率高,是一种理想的扩展青霉基因组DNA提取方法.     

桑叶多糖的提取工艺研究

研究了水浸提法提取桑叶多糖的工艺条件,比较了超声法、酶法和微波法等不同的前处理方法对桑叶多糖提取效率的影响．结果表明：（1）水浸提法提取桑叶多糖的较优方案为：温度80℃、时间1h、料液比1：40,桑叶多糖的得率约为11．50％．（2）超声法辅助提取桑叶多糖的较优方案为：超声功率300W,超声处理10min,之后水浸提多糖的得率为12．25％．（3）纤维素酶为桑叶多糖的最佳酶提取剂,其酶解的较优方案为：酶用量为桑叶量的1．5％,酶解时间2h,酶解温度50℃,酶处理后水提多糖得率为12．49％．（4）微波辐射时间以8min为宜,微波法辅助提取多糖得率为11．68％．（5）比较4种处理方法提取桑叶多糖的得率,依次为：酶辅助法〉超声辅助法〉微波辅助法〉水浸提法,综合考虑成本、工作效率等因素,以超声法前处理、水浸提桑叶多糖得率较高．     

梅花鹿茸中胶原蛋白提取制备工艺研究

本研究对梅花鹿茸不溶于任何中等极性溶剂的组分,选取木瓜蛋白酶对不溶性组分进行酶解提取制备梅花鹿茸胶原蛋白,通过单因素和正交试验以梅花鹿茸胶原蛋白提取率为指标确定最优酶解条件为:在10℃条件下,最适酶用量2%、PH值6.0、体积比1:20、酶解时间66h.按此条件提取得到的梅花鹿茸胶原蛋白提取率为54.59%。     

匀浆法提取-离子色谱法测定烟草中阴离子的研究

研究了用匀浆法提取,离子色谱法测定烟草中阴离子.烟草样品中的阴离子用0.1mol/L的氢氧化钠溶液匀浆法提取,提取液中的阴离子以YSA8型 8164A-8 阴离子交换柱为固定相,0.003mol/L Na2CO3 和0.006mol/L NaHCO3 混合液为流动相分离,流速为1.0mL/min,样品中F-、Cl-、NO-2、HPO2-4、NO-3和SO2-4 6 种阴离子在12min内可达到完全分离;方法加标回收率在95.2%~103.5%之间,相对标准偏差均小于2.8%,检测限均小于22μg/L,结果满意.     

刺老苞根皮黄酮对H_2O_2诱导的MC3T3-E1成骨细胞损伤改善

在H2O2胁迫下,研究刺老苞根皮(Aralia echinocauIis)黄酮增强MC3T3-E1成骨细胞抗自由基损伤的作用.为此用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型.培养的成骨细胞分为对照组、模型组、刺老苞根皮黄酮低剂量组(1×10-8mol/L)、刺老苞根皮黄酮中剂量组(1×10-7mol/L)和刺老苞根皮黄酮高剂量组(1×10-6mol/L).测定不同处理组细胞活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性自由氧(reactive oxygen species,ROS)含量、脂质过氧化物(lipid oxygen,LPO)含量,同时利用荧光偏振法测定细胞膜流动性.结果显示与模型组相比,刺老苞根皮黄酮组细胞活力、SOD活性、细胞膜流动性均显著升高(P<0.01),而ROS含量、LPO含量则显著降低(P<0.01),并呈现一定的量效关系.可以认为H2O2摄入会导致MC3T3-E1成骨细胞的氧化损伤,而刺老苞根皮黄酮可以预防或降低此类损伤对细胞的影响.     

白玉菇多糖提取方法的比较和优化

优选白玉菇多糖的提取工艺.采用热水浸提法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法和碱提法4种方法提取白玉菇多糖,并采用响应面法优化超声波辅助提取法.热水浸提法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法和碱提法提取多糖得率分别为2.90%、5.48%、4.86%、4.71%.超声波辅助提取法提取白玉菇多糖的得率与其他3种方法比较有显著差异.响应面法优化超声波辅助提取法的最优条件为:液料比23∶1,超声时间28 min(300 W),在92℃下热水浸提2 h,重复3次,测定白玉菇多糖的得率为6.03%.超声波辅助提取法可以显著提高白玉菇多糖得率.     

绞股蓝皂苷提取工艺的研究

采用正交设计试验研究了浸提条件(乙醇浓度、提取温度、提取时间、料液比),得到最佳的冷凝回流法提取条件是以30倍量浓度为80%乙醇在90℃水浴中回流提取3次,每次1h,最高得率为0.1646%,超声提取法的最佳提取条件是以20倍量的80%乙醇超声提取1次,每次30min,最高得率为0.4344%。     

匀浆辅助水浴法提取雪莲果低聚糖的工艺研究

研究了匀浆预处理在从雪莲果中提取低聚糖的应用,详细考察了传统水浴浸提中浸提时间、浸提温度、料液比以及匀浆转速和匀浆时间对低聚糖提取率的影响,并对这5个工艺参数进行了优化。结果表明,匀浆辅助水浴法提取雪莲果中低聚糖的最佳工艺条件为：匀浆转速2500 r/min,匀浆时间90 s,提取温度80℃,提取总时间3 h,液料比1∶20.     

连钱草总黄酮的超声辅助提取研究

通过正交试验和中心复合设计试验优化了水浴法和超声辅助法提取连钱草总黄酮的提取工艺,并对两种方法进行比较.结果表明,水浴法提取的最优工艺是:液固比20∶1(mL/g)、时间90 min、温度40℃、乙醇浓度85%;超声辅助法提取的最优工艺是:液固比23∶1(mL/g)、超声功率170 W、超声时间11 min、乙醇浓度85%.对两种方法的比较可以得出:超声辅助提取的平均得率为(8.63±0.25)%,而水浴法提取的平均得率为(6.07±0.12)%,黄酮提取率提高了42.17%,因此,超声辅助提取连钱草总黄酮产量高于传统的水浴法,而且还具有节能、省时的优点,该研究为连钱草总黄酮提取的工业化生产提供了理论基础.     

平菇多糖提取方法的比较

以平菇为原料, 分别采用破碎、 超声波和超声辅助复合酶3种提取方法提取平菇水溶性多糖. 正交优化结果表明： 提取温度90 ℃, 剪切速率11 350 r/min, 提取时间20 min, 提取3次, 破碎法提取多糖得率为11.20%; 提取温度60 ℃,  超声功率450 W, 提取时间60 min, 提取3次, 超声法提取多糖得率为9.75%; 提取温度30 ℃, 超声功率350 W, 提取时间60 min, 溶液pH=5, 超声辅助复合酶法提取多糖得率为12.05%. 综合考虑提取得率、 节能环保、 操作方法等因素, 选用破碎法提取平菇多糖较理想.     

响应面法优化超声波水提马齿苋黄酮的工艺

为优化超声波辅助水提马齿苋黄酮的提取工艺.在超声提取温度、超声提取时间、液固比3个单因素实验基础上,采用响应面法(RSM法)优化马齿苋黄酮的超声辅助提取条件.利用中心组合设计,研究以上3个自变量对响应值马齿苋黄酮得率的影响,用SAS 8.1进行结果分析.结果表明:超声波辅助提取马齿苋黄酮的最佳工艺条件为超声温度73℃,超声时间49 min.液固比(mL:g)41:1;在此条件下黄酮得率为8.24 mg/g,与理论预测值的误差为2.02%,说明采用RSM法优化得到的提取条件可靠.     

气-质联用法研究水溶性茯苓多糖提取方法

为研究水溶性茯苓多糖提取方法,分别采用热水提取法及超声提取法提取水溶性茯苓多糖,并以杂多糖的得率为指标设计正交试验,采用BSTFA(双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺)和DM F(N,N-二甲基甲酰胺)对杂多糖进行衍生化,采用D-果糖作内标进行气相色谱-质谱联用(GC-M S)定量分析.实验表明:热水浸提的最佳条件为固液比1∶40,提取时间3 h,提取温度90℃;超声波法最佳条件为固液比1∶40,提取时间60 m in,超声功率为100 W.热水提取和超声提取水溶性茯苓多糖的平均提取率分别为13.0%,8.6%,热水浸提法的多糖得率较高.均高于现有文献值报道.     

银杏花粉不同破壁方法的比较分析

试验比较了匀浆机破壁、高压细胞破碎仪破壁、温差破壁、酶法破壁等4种破壁方法对银杏花粉的破壁效果。结果表明：匀浆机破壁法优于其他破壁方法,且操作简单,能达到破壁要求。匀浆机破壁的最佳工艺参数为：转速15 000 r/min、花粉(g)与水(mL)的配比即料液比1∶50、时间10 min,破壁率达99.6%。     

蚕丝蛋白仿生多肽RAGA16的纳米结构与性能研究

利用天然蛋白质氨基酸序列设计生物仿生材料是近年来兴起的一个热门研究领域.本文中将蚕丝蛋白特征氨基酸序列(Gly-Ala-Gly-Ala-Gly-Ser)部分引入离子互补型多肽RA-DA16-Ⅰ中,设计了新型多肽RAGA16.采用原子力显微镜(AFM)、旋转流变仪(Rheometer)、傅立叶变换红外光谱仪(FTIR)、倒置荧光显微镜等技术对多肽RAGA16的自组装结构、肽链的二级结构、流变学性能以及细胞相容性等进行研究.结果表明,蚕丝蛋白多肽序列引入后,多肽RAGA16具有自组装特性,能够自组装形成致密的纳米级三维网络结构,所形成的水凝胶力学性能明显提高,通过分析得知这可能是由于多肽二级结构中Silk Ⅰ结构成分比例增加所致.荧光染色显示,绝大多数接种于多肽水凝胶中的小鼠前成骨细胞MC3T3-E1能存活,且在不同的三维平面上生长增殖.综上,利用蚕丝蛋白特征序列对RADA16-Ⅰ进行仿生改性后,对拓展多肽材料在生物医学领域的应用具有重要意义.