应用免疫印渍法检测猪和鱼卵透明带抗原的免疫交叉反应性

为了研究猪和鱼卵透明带抗原的免疫交叉反应性，应用免疫印渍术对其抗原组分进行了检测．实验结果表明，鱼卵透明带抗原与已知具有精子受体活性的猪ＺＰ３抗原，甚至猪全ＺＰ抗原均没有交叉反应．提示鱼卵透明带不含有与猪和人等哺乳类的透明带免疫学相类似的抗原决定簇．     

应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析猪和鱼卵透明带抗原的生化特性

鱼卵透明带免疫哺乳动物的抗生育作用和猪卵透明带组分免疫的抗生育作用相似,然而,抗鱼卵透明带血清与猪卵透明带的交叉反应性结果却不能确认。为进一步研究鱼卵透明带抗原的生化组成及其可能的抗生育作用机理,我们用双向聚丙烯酥胺凝胶电泳（2D－PAGE）对鱼卵透明带抗原和猪卵透明带抗原作比较分析。2D－PAGE的第一向电泳为等电聚焦电泳（IEF）,所用两性载体pH3．5～10;第二向为SDS－PAGE,采用10％浓度胶。热溶性猪卵透明带样品在2D－PAGE图谱上显示出典型的糖蛋白电泳图谱,可看到3列有很宽PI范围的主要蛋白区带,其表…     

55K猪卵透明带抗原(ZP3)的分离纯化

高分辨双向聚丙烯酰胺凝胶电泳（2D－PAGE）研究表明，猪卵透明带是由相对分子质量分别为82000、61000、55000和21000的4个系列蛋白组分组成，其中55000组分含量丰富，是免疫显性的，同时又具有精子受体活性，是研究卵透明带避孕疫苗的重要抗原组分。为深人研究猪卵透明带55K组分的抗生育机制、生化和免疫学特性，本研究建立了一套从猪卵巢分离纯化ZP3组分的方法。猪卵巢于室温解冻后用自制排刀逐一切割，用卵巢处理液（2InlnOUL柠檬酸钠，0．ofmoUryBS，PH7．2）充分泡洗，泡洗液用不同孔径的尼龙网过滤，收集75ap和45mp网上的卵子…     

应用2D-PAGE分析猪卵透明带抗原的酶解特性

猪卵透明带的来源相对比其他动物卵透明带丰富，又与人卵透明带有共同的抗原决定簇，是目前国内外卵透明带抗原研究的主要材料。寻找能诱发特异性阻止精卵结合的抗原组分是目前研究的重点。参与精卵相互作用的酶主要是透明质酸酶和顶体酶（类胰蛋白酶）。本研究拟通过ZD－PAGE图谱的改变分析胰蛋白酶和透明质酸酶对透明带抗原组分的影响，以及酶解过程中抗ZP血清所起的作用，为特异性抗原的分离纯化提供依据，并探讨ZP血清阻止精卵结合作用的机制。从实验结果可看出，透明带经酶处理后，尽管光学显微镜下尚未见任何变化，但ZD－PAGE…     

去糖基猪卵透明带抗原DGZPB和DGZPC的分离纯化及免疫特性

目的：为发展避孕疫苗研究制备去糖基猪卵透明带抗原ＤＧＺＰＢ和ＤＧＺＰＣ并研究它们的免疫反应性。方法：从阉割小母猪采集的猪卵巢分离猪卵透明带,经热溶解,Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ－４００和ＨＴＰ柱的分离纯化抗原ＺＰ３,经β－半乳糖苷酶消化,用反相ＨＰＬＣ分离得部分去糖基的ｐＺＰＢ和ｐＺＰＣ,再用ＴＦＭＳ处理,制备去糖基猪卵透明带抗原ＤＧＺＰＢ和ＤＧＺＰＣ。以ＭＤＰ为佐剂,用ＤＧＺＰＢ和ＤＧＺＰＣ分别免疫     

用酶联免疫印渍技术分析绵羊东毕血吸虫成虫抗原

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、电泳转印技术和固相免疫标记技术结合的酶联免疫印渍技术（ＥＴＩＢ），首次分析东毕血吸虫成虫抗原。抗原蛋白组分显示：ＳＤ－ＰＡＧＥ共将绵羊东毕血吸虫成虫抗原分离出４２条带；经ＥＴＩＢ分析，与阳性血清反应有１２条带，其中主带有４条，分子量分别为３５、８０、９２和９４ｋＤ，试验表明，这四个分子量的蛋白质具有较强的反应原性，可做为东毕血吸虫的诊断抗原。     

用猪卵透明带55KDa糖蛋白抗原（ZP3）免疫恒河猴的…

用猪卵透明带５５ＫＤａ糖蛋白抗原和胞壁酰胺二肽佐剂免疫３只雄性恒河猴，研究猪ＺＰ３免疫的抗生育作用及其对卵巢正常结构与功能的影响，评价用恒河猴作卵透明带生育调节疫苗研究动物模型的合适性。     

几种寄生虫抗原组分的SDS-PAGE电泳比较分析

通过提取制备猪带绦虫、猪囊尾蚴虫体、猪囊虫囊液、多房型束球绦虫、肝片吸虫、细颈囊尾蚴、细颈囊尾蚴囊液和羊绦虫等8种寄生虫抗原，运用SDS－PAGE电泳法比较各种抗原的蛋白质的组成，不连续SDS－PAGE电泳结果显示猪带绦虫、猪囊尾蚴虫体、猪囊虫囊液、多房示绦虫、肝片吸虫、细颈囊尾蚴、细颈囊尾蚴囊液和羊绦虫等几种抗原的蛋白质在凝胶中分别有31，23，18，17，21，22，8和24条带，分子量在13kD-134kD之间，8种抗原的电泳带之间既有相似性又有特异性，其抗原的共同蛋白质亚基带的分子量为63kD,38kD和24kD。     

应用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳分析猪和鱼卵透明带抗原的生化特性

应用高分辨率的双向聚丙烯酞胺凝胶电泳（２Ｄ—ＰＡＧＥ）对猪和鱼卵透明带（ＺＰ）抗原蛋白的生化特性进行了比较分析．实验结果表明，热溶性猪卵透明带在２Ｄ—ＰＡＧＥ图谱上显示出三个主要的ＺＰ蛋白（ＺＰ１、ＺＰ２、ＺＰ３）．其表观相对分子质量分别为：ＺＰ１：９．３×１０４～１．２×１０５；ＺＰ２：７．０×１０４￣９．５×１０４；ＺＰ３：５．５×１０４￣９．３×１０４这３组蛋白都有广泛的电荷和相对分子质量上的不均一性，这是翻译后修饰的结果．热溶性鱼卵透明带在２Ｄ—ＰＡＧＥ图谱上也可见三个主要ＺＰ蛋白，其表观相对分子质量分别为ＦＺＰ１：８．２×１０４；ＦＺＰ２：３．１５×１０４；ＦＺＰ３：２．４５×１０４．它们也与猪ＺＰ一样，具有电荷不均一性，但其变化范围窄得多，说明鱼ＺＰ的翻译后修饰比较少．     

用猪卵透明带55KDa糖蛋白抗原（ZP3）免疫恒河猴的初步研究

用猪卵透明带５５ＫＤａ糖蛋白抗原（ＺＰ３）和胞壁酰肢二肽佐剂（ＭＤＰ）免疫３只雌性恒河猴，研究猪ＺＰ３免疫的抗生育作用及其对卵巢正常结构与功能的影响，评价用恒河猴作卵透明带生育调节疫苗研究动物模型的合适性。实验观察持续４４０天，三只免疫猴中，两只产生高滴度抗ＺＰ３抗体并导致不孕（免疫组怀孕率为３３％，对照组为８０％）．血清Ｅ＿２和Ｐ测定结果表明，抗体滴度高的两只猴Ｅ＿２和Ｐ的水平极低，且不呈周期性变化，组织学观察表明两只不孕猴的卵巢缺乏生长卵泡和成熟卵泡，揭示ＺＰ３免疫阻断了卵泡的发育，这些结果与用猪ＺＰ３免疫其它灵长类动物报导的相似，它进一步证实ＺＰ３免疫的抗生育作用，并支持用恒河猴作动物模型，研究用合成肽段或基因重组产物作免疫原的卵透明带生育调节疫苗。     

抗鱼卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及初步鉴定

详细介绍了抗鱼（花鲢Anstichthysnobilis）卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的制备及鉴定方法，用佛氏佐剂乳化热溶花鲢鱼卵透明带，然后免疫雌性BALB／C小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤Sp2／0融合产生杂交瘤，经3次再克隆后，用间接ELISA方法筛选出一株抗鱼卵透明带的单克隆抗体杂交瘤，经免疫双扩散试验测得该种单克隆抗体为IgG1，经过染色体检查知其染色体数目在86～108之间，为93.6±3.81，杂交瘤细胞染色体经检查发现有中间和亚中着丝点染色体，符合杂交细胞染色体特征。     

魚卵透明带分离纯化方法及其对小白鼠抗生育效应的比较研究

前言早在1928年前曾有人证实卵组织皮下移殖可以引起不妊,但未引起人们重视。直到五十年代初期perlmann和他的同事对受精卵、精子和胶质的匀浆注射兔子所获得的抗血清的作用进行了广泛的研究,证明其中存在着一系列的抗原抗体反应,指出卵子的皮层具有一系列高度复杂而又与胶膜不同的抗原结构。到六、七十年代由于免疫技术的突破性进展,先后发现这些抗原位于卵的表面、卵泡的内膜和闭锁卵泡之中。1976年国外已报导应用哺乳类透明带作兽用抗生育疫苗专利。近年来,对非哺乳动物中的鱼卵透明带在哺乳类的抗生育效应开展了研究,并初步从透明带中分离提取出有抗生育作用的热溶性蛋白组分。国外对哺乳动物卵透明带的分离提取多用热溶解法,日本有报导应用植物凝集素作亲和层析分离提纯,1980年美国有报导用物理和化学相结合的分离提纯方法。鱼卵透明带的分离纯化方法及其理化性质一直未有报导。     

昆虫细胞杆状病毒表达人生长激素的纯化及性质研究

在昆虫细胞杆状病毒中表达的人生长激素，经CM－52离子交换柱层析和Phenyl-Sepharose CL-4B疏水柱层析后，去除了93％杂蛋白。再用CNBr-activated Sepharose 4B亲和柱层析的方法，获得高纯度的生长激素样品。SDS－PAGE结果表明，纯化样品在SDS－PAGE图谱呈现一条带，分子量为22kD。Western杂交结果表明，纯化样品与生长激素标准品有相似的免疫活性。胰肽图谱分析结果显示纯化样品和标准品具有相同的一级结构。DNS－CL测N末端表明，纯化样品的N末端为苯丙氨酸，所有这些性质均与天然人生长激素相同。     

家猪精子单倍染色体及其G—显带的研究

用体外获能的家猪精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验（ＳＰＡ），制备出了长白猪和成华猪的精子单倍染色体，出现精子单倍染色体的百分率为２５．１％。对家猪精子单倍染色体自然畸变率进行了分析，畸变率为６．４％，其中亚单倍体率为４．１％，超单倍体率为２．３％，并对家猪精子单倍染色体进行了Ｇ－显带的探索，取得了初步结果。     

家猪精子单倍染色体及其G－显带的研究

用体外获能的家猪精子穿透去透明带金黄地鼠卵试验（ＳＰＡ），制备出了长白猪和成华猪的精子单倍染色体，出现精子单倍染色体的百分率为２５．１％，对家猪精子单倍染色体自然畸变率进行了分析，畸变率为６．４％，其中亚单倍体率为４．１％，超单倍体率为２．３％，并对家猪精子单倍染色体进行了Ｇ－显带的探索，取得了初步结果。     

R0(SS-A)抗原的纯化

本文以猪脾细胞浆为原料,采用制备电泳方法纯化了RO抗原。纯化的样品在PAGE上呈现单条区带,通过凝胶过渡测定分子量约为80KD,在SDS-PAGE上主要表现为60KD多肽带,Western blotting证明此60KD即为RO抗原的活性多肽。     

受精前后卵透明带糖蛋白的生化特性差异

探讨受精后卵透明带糖蛋白的生化特性变化．用SDS-PAGE分析未受精卵和2-细胞胚胎的透明带成分的差异．研究结果表明，受精前后卵透明带的主要带型相似，但2-细胞胚胎透明带在还原电泳中有一条特异的小肽，分子质量在15000～30000之间，约为22000．进一步用HPLC分析两种样品的O-侧糖链的不同，分析显示，两种样品的O-糖链中有3种单糖基的保留时间值很相似，但有些寡糖基明显不同．小鼠透明带精子受体失活的分子机制主要在于O-寡糖链的修饰，O-单糖与精子受体失活没有明显的关系。     

猪白细胞介素-6基因的原核表达及其活性研究

用DNA重组技术，将已克隆的猪IL－6 cDNA片段插入pGEX-1λT质粒，转化大肠杆菌，以BamHI和Pst I酶切鉴定重组子，以IPTG诱导融合蛋白表达，并作RT－PCR及SDS－PAGE分析表达情况，从聚丙烯酰胺制备凝胶中回收融合蛋白，用MTT法测定重组蛋白刺激小鼠脾淋巴母细胞增殖反应的活性，并免疫家兔制备高免血清，得到高效表达猪IL－6的质粒pGPIL-6,RT-PCR确证pGPIL-6在大肠杆菌中能正确转录，经SDS－PAGE分析表达蛋白分子量为49kD，融合蛋白具有较高的促小鼠淋巴细胞增殖反应活性，以此免疫家兔，可制备滴度为1：128 000的兔高免血清。     

鱼卵透明带免疫对恒河猴肾脏组织的病理学研究

本研究是用光镜及电镜探讨鱼卵透明带粗提品对恒河猴进行兔疫后肾脏组织病理学变化。光镜(LM)和电镜(EM)观察免疫猴肾。发现肾小球大多数毛细血管管腔均被增生的系膜细胞堵塞,增生细胞胞浆呈中等度的PAS阴性反应,个别肾小球出现有PMN侵润。基底膜呈灶性增厚,在基底膜与上皮细胞足突之间,可见有电子致密度高的物质形成“小丘”,上述结果说明这是典型的急性弥漫性肾小球肾炎。抗体效价测定结果说明,鱼卵透明带粗提物有强的抗原性,对恒河猴能激发抗体产生。免疫猴出现的急性弥漫性肾小球肾炎与免疫反应有关。     

精子膜抗原提取、纯化及SDS—PAGE分析

目的：分析正常生育男性精细胞膜抗原，以便进一步应用精子抗原于其抗体的检测。方法：1．精子膜抗原粗制方法，按“全国临床检验操作规程”(第二版，1998年，P398)描述的方法进行，即收集20名正常生育男性精子样品，用含0．5％NP—40的Tris—Hcl缓冲液抽提。2．粗提液蛋白含量测定采用紫外分光光度法。3．蛋白抗原纯化方法，采用冰冷乙醇沉淀法，以粗提液：冰冷95％乙醇(—20℃)＝1：9(v/v)混合，并按1／50容量加入饱和乙酸钠混匀，于—20℃放置48h。取出后于—10℃，1800g离心30分钟，弃上清，例放试管，沥干沉淀，—20℃保存备用。4、SDS—PAGE分析，步骤3所获样品，以NS溶解，通过紫外分光光度计测定含量，并调节到6mg/ml。SDS—PAGE分析条件的点样量25μl，分离胶17．5％，隔层胶5％，电泳缓冲液用甘氨酸—Tris，PH18．6，电压20v过夜，次日再150V4h。电泳后凝胶经考麦斯亮兰染色、乙酸—甲醇洗脱，直至显示清晰电泳图谱。结果：1、粗提液经紫外分光光度计测定，其原液含蛋白质为24mg/ml，最大吸收峰值280nm。2．纯化的精子膜抗原溶液经SDS—PAGE分析，图谱显示2个蛋白斑，与标准蛋白比较，其分子量一个为35—45KD，另一个为15—25KD；75—85KD处出现微量痕迹。结论：我们成功地进行了精子膜抗原提取、纯化及SDS—PAGE分析实验，结果有清晰记录，为进一步应用精子抗原检测精子抗体的研究提供物质基础。