高致病性猪蓝耳病防控知识

猪蓝耳病，又称猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS），是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起猪的一种接触性传染病。高致病性猪蓝耳病是以变异的猪蓝耳病病毒株为主要病原，其它多种病原混合感染发生的一种急性传染病。[第一段]     

江南星蕨化学成分的分离与鉴定

采用硅胶、Sephadex LH-20、中压、半制备高效液相和其他色谱技术对江南星蕨（Lepisorus fortunei）的化学成分进行分离,通过理化性质和核磁共振（NMR）数据鉴定化合物的结构.从90%（体积分数）乙醇提取物中分离得到15个化合物,分别鉴定为反式咖啡酸（1）、反式乌毛蕨酸（2）、迷迭香酸（3）、5-O-咖啡酰莽草酸（4）、（R）-3-（3,4-dihydroxyphenyl）-2R-lactic acid （5）、polybotrin（6）、苏铁蕨酸（7）、羊齿烯（8）、羊齿烯酸（9）、β-谷甾醇（10）、胡萝卜苷（11）、尿嘧啶（12）、豆甾-4-烯-3,6-二酮（13）、麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮（14）和牡荆素（15）.其中,化合物2、4、5、7、9、13、14和15为首次从江南星蕨植物中分离得到. 本研究为阐明江南星蕨药用价值提供了化学基础.     

排风藤中化学成分的分离与鉴定

利用溶剂提取法、正相和反相硅胶柱层析、Sephadex LH-20、RP-HPLC等色谱方法,从排风藤95%乙醇提取物中分离得到6个化合物.通过理化性质和1 H NMR、13 C NMR等光谱数据鉴定化合物的结构为β-谷甾醇(1),β-胡萝卜苷(2),N-反式-香豆酰酪胺(3),N-反式-对羟基苯乙基阿魏酰胺(4),N-反式阿魏酰基-3-甲氧基酪胺(5),N-trans-feruloylo-ctopamine(6).其中化合物2～6为首次从该植物中分离得到.     

蒙药森登-4有效部位化学成分分离与鉴定(Ⅱ)

采用硅胶柱层析法、Sephadex LH-20柱层析法进行分离与纯化,通过理化性质及波谱分析技术(1 H-NMR、13 C-NMR)鉴定化合物的结构,从蒙药森登-4有效部位中分离、鉴定出7个单体化合物,分别为:西红花苷-3(1)、没食子酸(2)、齐墩果酸(3)、胡萝卜苷(4)、棕榈酸(5)、β-谷甾醇(6)、豆甾醇(7).其中化合物1、3、4和5为首次从森登-4中分离得到,为阐释蒙药森登-4药效物质奠定了基础.     

漆叶化学成分的分离鉴定

为研究漆树(Toxicodendron vernicifluum)叶中的化学成分,利用硅胶柱色谱、C18中压柱色谱、高压制备色谱对漆树叶乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行分离纯化,根据化合物的波谱数据鉴定其结构.从中分离出8个化合物,分别鉴定为：没食子酸(1)、1,3,6-O-三没食子酰葡萄糖(2)、 1,2,4,6-O-四没食子酰葡萄糖(3)、紫云英苷(4)、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖(5)、β-谷甾醇(6)、莽草酸(7)、黄杞苷(8).其中,化合物2、3、4、7、8是首次从该种植物中分离得到,化合物1、5、6为首次从该植物的叶中分离得到.     

猪圆环病毒2型与猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的诊断

2007年4月,龙岩市某存栏母猪达200头的规模化猪场,保育栏仔猪出现体温升高,呼吸困难,咳嗽,耳、鼻端、四肢及下腹部皮肤发紫,经临床剖检及病理观察大体判断为圆环病毒2型与猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染,为进一步确诊,进行了实验室诊断.分别设计了PCv2及PRRSV的扩增引物,结果从病例中扩增出相应的产物.通过临床、病理诊断及实验室检测.确诊为猪繁殖与呼吸综合征病毒与圆环病毒2型混合感染.     

蓬子菜化学成分的分离与鉴定

对蓬子菜的化学成分进行分离和结构鉴定.通过大孔吸附树脂柱色谱、凝胶柱色谱、硅胶柱色谱、制备HPLC技术进行蓬子菜化学成分分离,根据理化性质和核磁共振氢谱、碳谱对所得化合物进行结构解析.鉴定的化合物为:diosmetin-7-O-β-D-xylopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside(1)...     

Sinularia sp.中化学成分的分离与结构鉴定

利用硅胶色谱、凝胶色谱等分离方法从软珊瑚Sinularia sp.中分离得到6种化学成分.通过一维核磁共振波谱、二维核磁共振波谱和质谱等分析方法对化合物进行结构解析,确定为西松烷二萜类成分:lobocrassolide,lobo-hedleolide,(7Z)-lobohedleolide和2-epi-11Z-lobohedleolide;邻笨二甲酸酯类成分:1,2-benzenedicarboxylic acid di-isobutyl ester;甾醇类成分:ergosta-5-en-3β-ol.其中4种西松烷二萜类化合物为首次从该样品中获得.     

猪繁殖与呼吸障碍综合征的RT-PCR诊断

根据猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）的全基因组序列,设计合成一对特异性引物,建立检测PRRSV的RT-PCR方法。对两份疑似病料进行检测,结果两份均为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒阳性。结合流行病学,临床症状以及病理解剖变化,诊断为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染。     

石松生物碱和三萜成分的分离与鉴定

云南宣威产石松(Lycopodium japonicum)干燥全草用甲醇提取,利用硅胶柱层析和Sephadex LH-20柱层析进行化学成分分离纯化,从中分离得到12个生物碱和3个三萜化合物,根据现代波谱技术和理化性质对化合物结构进行鉴定,鉴定结构为:lycodoline(1),acetyllycoposerramine M(2),lycoposerramine-M(3),6α-hydroxylycopodine(4),12-epilycodoline(5),12β-hydroxy-acetylfawcettiine(6),lucidioline(7),α-obscurine(8),des-N-methyl-α-obscurine(9),lycopoclavamine-A(10),fawcettimine(11),lycoflexine N-oxide(12),α-onocerin(13),26-nor-8-oxo-α-onocerin(14)和diepiserratenediol(15).化合物4、5、12和15为首次从石松中分离得到.     

金银花中绿原酸的分离与测定方法

用正交试验法对金银花中绿原酸分离的醇提工艺进行优化,用紫外分光光度法测定了金银花提取物中绿原酸的含量,利用薄层色谱,对不同的展开剂进行了比较筛选,找出了一种能较好的分离出绿原酸的展开剂.从正交试验中得出醇提的最佳工艺:乙醇浓度75%,溶剂量为10倍,提取时间为2小时,提取次数为2次.利用薄层色谱法,用硅胶H,0.7%的CMC板,乙酸丁脂:甲酸:水:乙醇(1∶1∶1∶0.2)上层液为展开剂能较好的分离出金银花提取物中的绿原酸.     

苦绳中木脂素类化学成分的分离与结构鉴定

为明确苦绳Dregea sinensis Hemsl中的主要化学成分,采用AB-8大孔吸附树脂、硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶和反相制备液相等色谱方法从苦绳中首次分离得到5个木脂素类化合物. 通过一维和二维核磁共振波谱、有机质谱等方法确定它们分别为4',4"-二羟基-3,3',3",5,5',5"-六甲氧基-7,9':7',9-二环氧-4,8"-氧-8,8'-倍半新木脂素-7",9"-二醇(1),4',4"-二羟基-3,3',3",5,5'-五甲氧基-7,9':7',9-二环氧-4,8"-氧-8,8'-倍半新木脂素-7",9"-二醇(2),(+)-异落叶松树脂醇(3),赤式-愈创木酚基甘油基-β-O-4'-松柏醇(4),diasyringaresinol (5).      

金银花中产绿原酸的内生细菌的分离与鉴定

以金银花的根、茎、叶为材料,采用组织块法开展内生细菌的分离筛选,并依次借助薄层层析(TLC)、高效液相色谱(HPLC)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)对内生细菌的发酵产物进行分析,最终从金银花的叶中获得一株具有产绿原酸能力的细菌B3.菌株B3的绿原酸产量为5.653 mg/L.根据形态特征和16SrDNA序列分析鉴定该内生菌株为Bacillus amyloliquefaciens,并通过构建进化树对B3进行了系统发育分析.B3对几种细菌和真菌具有较强的抑菌作用,其抑菌活性物质主要来自于胞外分泌物.     

蓬子菜中酚酸类成分的分离与鉴定

对茜草科拉拉藤属植物蓬子菜(Galium verum L)全草的乙醇[Ф(乙醇)=95%]提取物进行分离和鉴定.经反复纯化制备化合物,并根据化合物的理化性质分析、波谱解析、对照品比较及与文献报道对比鉴定化合物的化学结构.从蓬子菜全草的乙醇[Ф(乙醇)=95%]提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为芥子酸(1)、丁香酸(2)、咖啡酸丁酯(3)、原儿茶酸(4)、4-羟基苯甲酸(5)、咖啡酸(6)和绿原酸(7),化合物1～5为从该属植物中首次分离得到.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N基因原核表达产物的检测应用

利用猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的原核表达产物,分别建立了检测猪繁殖与呼吸综合征抗体的间接ELISA方法及乳胶凝集试验．对200份血清样品分别应用建立的间接ELISA方法和乳胶凝集试验,及由IDEXX公司生产的EUSA检测试剂盒进行抗体检测,结果显示,乳胶凝集试验及间接ELISA方法与IDEXX公司试剂盒相比,检出符合率分别达78％和91％．建立的乳胶凝集试验还需改进,而N蛋白-ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,是一种有应用前景的检测方法．     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白基因疫苗的构建及在小鼠的免疫试验

从PRRSV野毒株细胞培养上清提取RNA，用RT-PCR的方法扩增出M蛋白基因片段（525bp），并将该基因克隆到pMD18-T载体，测序结果与PRRSV BJ-4等株同源性最接近．以pIRES-neo为载体，构建表达PRRSVM蛋白的基因疫苗，按100μg／只的DNA量免疫小鼠，二免后二周抗体水平显著高于同期免疫空载体pIRES～neo组，于免疫后14、28、42天后均能检测到较高的细胞免疫水平．这说明表达M蛋白的基因疫苗能够刺激机体产生免疫应答．     

蒙药森登-4有效部位化学成分的研究

采用硅胶柱层析、制备薄层层析、pharmadex LH-20柱层析法分离,通过理化性质和波谱法鉴定化合物结构,从蒙药森登-4的有效部位中分离得到8个单体化合物,分别为:大黄酚(1)、大黄素甲醚(2)、β-谷甾醇(3 )、豆甾醇(4)、大黄素(5)、2,5-二甲氧基苯醌(6)、槲皮素(7) 、栀子苷(8),对蒙药森登-4有效部位的化学成分进行研究,其中化合物1-6为首次从森登-4中分得,并且化合物1、2和5是首次从森登-4中分得蒽醌类成分,为阐释蒙药森登-4药效物质基础奠定了基础.     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒RT-PCR检测方法的建立

设计了一对特异性引物,对16头临床症状、病理变化和ELISA检测呈阳性的猪繁殖与呼吸障碍综合征疑似病例的肺脏、脾脏和淋巴结以及种公猪的精液进行了RT-PCR扩增。结果显示16头样品的相应组织及精液都扩增出特异性基因片段,阳性符合率为100%,8头猪繁殖与呼吸障碍综合征血清ELISA检测为阴性的对照样品中有2头扩增出阳性片段,检出率为25%。RT-PCR检测方法的建立为猪繁殖与呼吸障碍综合征的准确诊断提供了技术手段。     

仔猪腹泻病原的分离与鉴定

针对承德某猪场发生的仔猪腹泻,为了鉴定病原,无菌采集死亡仔猪的肺脏、肝脏、心血、淋巴结等病料组织,通过胶体金试纸条检测、PCR鉴定、细菌学鉴定、致病性试验等方法进行病毒及细菌鉴定。结果显示,圆环病毒2型检测为阳性,沙门菌对小白鼠具有很强的致病性。本例仔猪腹泻病原为圆环病毒2型和沙门菌混合感染。     

闽西地区猪繁殖与呼吸综合征的血清流行病学调查

从2005至2007年上半年.分别对闽西地区七个县市区和漳州、三明等地部分规模化猪场猪群采血,应用美国IDEXX公司生产的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)ELISA检测试剂盒,检测血清疫苗免疫抗体和PRRS野毒株感染抗体.调查结果显示:该地区母猪免疫抗体阳性率2005年为72.4%,2006年为69.3%,2007(1-6月)为68%;小猪PRRS免疫抗体阳性率为48.20%,生长猪免疫抗体阳性率为30.30%,差别较大,说明PRRS疫苗免疫猪群(母猪、仔猪和菜猪)效果不理想.非免疫猪群PRRS野毒株感染抗体2005母猪阳性率为44.3%,2006年为60%,2007(1-6月)为61.5%,生长猪为61.9%,对10个非免疫猪场母猪PRRS野毒株抗体检测,所有猪场均为阳性.调查结果表明:该地区无论是母猪还是生长猪,PRRS野毒株感染比较严重,应该引起足够的重视.