高温链霉菌与细菌的相互作用及其自溶和分枝机制

链霉菌（Streptomyces sp.2)与金黄色葡萄球苏，枯草杆菌之间有相互抑制作用，链霉菌对大肠杆菌有抑制作用，但大肠杆菌则对链霉菌无抑制作用，细菌的存在能诱导链霉菌提前产生可溶性紫色色素，Streptomyces sp.2在5度下，YM，YG，YA培养基上产生细胞自溶的最短培养时间为2天，全部细胞自溶需要5天，在37度下及培养基上全部自溶的时间为8天，Streptomyces SP.1在55度或37度，培养基上细胞全部自溶的时间超过14天，Streptomyces SP.2孢子萌发的时间为4小时左右，产生的菌丝有分节现象，其细小分枝产生在菌丝及孢子的任何部位，低浓度（4mg/L)氨苄青霉素对链霉菌的孢子萌发及生长无影响，链霉菌菌丝在生长延伸时表现出相互靠扰和吸引，形成网络结构，各细胞间相互直辖市，形成一定形状，大小的菌落，在菌落的特定部位产生孢子，表现出一定的社会性。     

一株具抗菌活性放线菌菌株YIM31249~T的分离和鉴定

从云南洱源采集的土壤样品中分离到1株链霉菌YIM31249TT.该菌株具有很强的抗菌活性.通过对其进行的包括形态、生理生化特性、细胞壁化学组份以及16SrDNA序列等方面的研究,确定其为链霉菌属的一个亚种,我们将其命名为生黑孢链霉菌洱源亚种(Streptomycesmelanosporofacienssubsperyuanensis).菌株YIM31249T气生菌丝和基内菌丝均很丰富,孢子链较长且为螺旋状,部分孢子链螺旋成假孢囊,孢子表面粗糙不带刺,基丝不断裂.     

天蓝色链霉菌中S-adenosylmethionine依赖性甲基转移酶同源基因sco1162调控孢子发育及抗生素合成

利用大肠杆菌-链霉菌穿梭质粒pDZY101携带的转座子Tn101随机插入到天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)M145构建的插入突变库,从中分离到一株孢子色素及抗生素合成明显发生变化的菌株BZ100.测序发现,该突变株中Tn101插入到了链霉菌的sco1162基因中.序列分析表明,该基因编码S腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)依赖的甲基转移酶.为了验证该插入突变与表型的对应关系,构建了能在突变菌株中表达sco1162基因的互补质粒pFDZ16-1162,将该质粒转化突变株后,突变菌株的孢子形态和抗生素合成水平得到完全恢复.     

Sanglifehrin A产生菌Streptomyces flaveolus DSM 9954遗传转化系统的建立

Sanglifehrin A的产生菌淡黄色链霉菌Streptomyces flaveolus DSM 9954,通过筛选,得到其菌丝培养基为TSB, 生孢培养基为ISP-4,抗性实验显示淡黄色链霉菌Streptomyces flaveolus DSM 9954对所选抗生素都较敏感. 利用原生质体转化和接合转移都成功地构建了两种遗传转移系统,并且从接合转移成功的链霉菌转化子中回收质粒pKC 1139,经EcoR Ⅰ单酶切电泳,验证了质粒确实通过接合转移从大肠杆菌转移至宿主链霉菌, 这为研究Sangl     

3个链霉菌新种的多相分类

在筛选产生活性物质的过程中，发现4株具有抑菌、杀虫等生物活性的链霉菌．利用形态学、生理生化、化学及分子生物学程序进行了分类鉴定，并与链霉菌属已知相关菌种进行了比较，将YIM32065^T和YIM33176定名为多形链霉菌新种(Streptomyces polyformus sp．nov．)，YIM35551^T定名为抗霉链霉菌新种(Streptomyces antifungus sp．nov．)，YIM30823^T定名为灰白链霉菌新种(Streptomyces griseoalbus sp．nov．)．     

3种海藻的粗蛋白对植物病原真菌的抑制作用

以圆弧青霉(Penicillium cyclopium)、绿色木霉(Trichoderma viride)、红色链孢霉(Neurcsporacrassa)、玉米大斑病菌(Helminthosporium turcicum)、稻瘟病菌(Piricularia oryzae)和黄曲霉(Aspergillusflavus)等6种植物病原真菌为供试菌,检测了3种海藻(铁钉菜Ishige okamurae、羊栖菜Sargassum fusiforme、冈村凹顶藻Laurencia okamurai)的粗蛋白对它们的菌丝生长及孢子萌发的影响.实验表明,3种海藻的粗蛋白对6种真菌的菌丝生长及孢子萌发的作用效果不同,其中冈村凹顶藻粗蛋白对红色链孢霉菌丝的生长,羊栖菜粗蛋白对稻瘟病菌孢子的抑制作用最明显,而羊栖菜和铁钉菜粗蛋白对红色链孢霉的菌丝生长,冈村凹顶藻粗蛋白对绿色木霉及黄曲霉的孢子萌发均无抑制效果.3种海藻的粗蛋白能凝集兔血红细胞,表明它们当中含有凝集素.     

链霉素抗性突变理性筛选链霉素高产菌株

以灰色链霉菌(Streptomyces griseus) CICC11002为出发菌株,采用紫外诱变并结合链霉素抗性筛选法育种,以期获得高产菌株.灰色链霉菌孢子悬液经90％紫外致死剂量诱变后,在含有链霉素最小抑制浓度(0.8μg/mL)的培养基平板上,分离得到105株链霉素抗性突变菌.其中链霉素产量高于出发菌株的有19株,正突变率高达18.1％,同时获得了产链霉素能力约为出发菌株2倍的突变株SM-55.     

夹竹桃和链霉菌复合颗粒剂灭螺研究

用夹竹桃(Nerium indium)和紫红链霉菌(Streptomyces violaceoruber)复合颗粒剂进行灭螺实验,并与单独使用夹竹桃灭螺和紫红链霉菌的灭螺效果对照,探讨夹竹桃和链霉菌的协同或拮抗作用.研究结果表明:夹竹桃和紫红链霉菌复合灭螺具有一定协同增效作用.复合颗粒剂在不同温度下对钉螺毒杀效果有较大的差异,在15℃下,钉螺7 d死亡率为64.2%;在25℃下,钉螺7 d死亡率为83.2%;在35℃下,钉螺7 d死亡率49.9为%.     

一株产抗菌物质链霉菌的筛选及鉴定

从土壤中分离到一株对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)有较强拮抗作用的链霉菌菌株HCCB10124,研究其拮抗性表明,对10种常见的病原真菌和部分细菌有拮抗作用,但对植物病原性真菌的抑制效果高于细菌.其形态特征、培养特性、生理生化特性、细胞壁组分与链霉菌属中的白网链霉菌(Streptomyces albireticuli)相同,16S rDNA序列的同源性达99%.根据多项分类原则和系统进化树的构建分析,将该菌株初步归属于白网链霉菌.     

放线菌F401菌株杀虫活性研究

从江苏茅山地区竹林土壤中分离筛选到一株具有杀虫活性的放线菌F401号菌株。在扫描电镜下,该菌株的孢子丝呈紧密和松敞的小螺旋形,孢子椭圆形及圆柱形,表面光滑。气生菌丝灰褐色,菌落薄绒状,基内菌丝无色,不产生可溶性色素。摇瓶发酵菌丝抽提物稀释后对桑蚕(Bombyxmori)、大叶黄杨尺蠖(Abraxasmiranda)、褐刺蛾(Setorapostornata)及松褐天牛(Monochamusalternatus)等昆虫进行测试,均具有较强的杀虫活性。试验研究表明,此菌株是一种具有杀虫活性的链霉菌(Streptomicessp.)。     

链霉菌属一新种的多相分类

 从云南西双版纳分离到的1株中温放线菌N-98-1272(以下简称1272).对其形态,生理生化特性,细胞壁化学组分以及16SrDNA序列进行了研究分析,并与链霉菌属的已知种进行了比较,认为这是链霉菌属的1个新种,命名为版纳链霉菌(Streptomyces bananensis sp.nov.).     

一株高效抑藻放线菌的分离筛选及鉴定

从福建云霄国家红树林自然保护区滩涂沉积物样品中,共分离获得521株纯培养物.通过检测球形棕囊藻(Pha-eocystis globosa)荧光强度计算抑藻率,从521株菌中筛选到27株具有抑藻活性的菌株.在27株抑藻菌中,菌株O3-26对球形棕囊藻具有最高的抑藻率(高达96.71%).菌株O3-26的抑藻谱实验显示,该菌株抑藻活性表现出一定的种属特异性,对硅藻门(Bacillariophyta)的三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)和中肋骨条藻(Skeletonema costatum)2株测试藻株没有抑制作用,而对绿藻门(Chlorophyta)盐生杜氏藻(Dunaliella salina)和自养小球藻(Chlorella autotrophi-ca)2株藻株具有较强抑藻作用.扫描电镜观察显示,该菌株孢子丝直至螺旋状且孢子表面带刺.生理生化实验显示,该菌株在所得到的大多数培养基上生长良好,在营养琼脂培养基中可以产生水溶性色素;不能在棉子糖作为唯一碳源的培养基上生长.16SrRNA基因相似性分析表明,菌株O3-26属于链霉菌属(Streptomyces),并与灭癌素链霉菌(Streptomycesgancidicus)15412菌株具有最高的同源性(99%).生理生化实验表明,二者之间生理特征存在一定差异.综合形态特征、生理特征以及系统发育分析的结果,鉴定该菌株为灭癌素链霉菌.     

一株高产抗菌活性物质链霉菌的初步分类鉴定

对一株土壤中筛选出的可以产抗菌活性物质的链霉菌进行了研究，测定了该菌的抗菌谱，发现该菌株对多种植物病原性真菌及细菌有拮抗作用，但对植物病原性真菌的抑制效果低于植物病原性细菌.通过形态特征、培养特征、生理生化特性及抑菌谱等系列比较，发现该链霉菌菌株与链霉菌属的黑胡桃链霉菌(Streptomyces nogalater)的特征基本相符；通过16S?rDNA序列比对，发现该菌株16S?rDNA与黑胡桃链霉菌的16S?rDNA同源性达99％.根据多项分类原则和系统进化树的构建分析，将该菌株暂归入黑胡桃链霉菌类.     

链霉菌S1的抑菌活性及其对植物病害的防治

摘要： 为了探明链霉菌S1的抑菌活性及其对植物病害的防控作用,通过抑菌圈法研究了链霉菌S1对不同病原菌的抑制作用并分析了菌株S1是否合成几丁质酶和葡聚糖酶,筛选了菌株S1的最佳发酵培养基、发酵时间和最佳接种量,进一步优化发酵培养条件。通过温室防效实验,研究了链霉菌S1发酵液对桃核腐病和番茄根结线虫的防治作用。结果表明：链霉菌S1对多种病原菌有较好的抑菌作用,其中对桃褐腐病原真菌（Monilinia fructicola）和平菇褐斑病原细菌（Pseudomonas tolaasii）的抑制效果最佳。菌株S1能够合成几丁质酶,不能合成葡聚糖酶。链霉菌S1的最佳发酵培养基为G117,最佳发酵时间为3 d,最佳接种量为8%。链霉菌S1的发酵上清液和发酵液对桃核腐病具有显著的防治作用,防效可到达80.66%。发酵代谢产物对番茄根结线虫的杀线活性最高可达90%,发酵原液对番茄根结线虫的防治效果最高到达71.02%。可见链霉菌S1具有较好的防治作用,为植物病害生物防治提供了优良的菌种资源。     

生防菌株A-29的鉴定及其活性成分分析

生防菌株A-29分离自山东省科学院中试基地内的番茄根际土中。利用通用引物27f和1492r扩增A-29的基因组DNA获得1492bp的16SrDNA序列片段,登录号为EU430264,同源性与直丝紫链霉菌（Strep-tomyces viridocyaneus）YIM30997（AF513223）达98.9%。生理生化特性测定中,除吲哚反应和木糖利用2项不同外,其它指标A-29与S.viridocyaneus完全相同,故将菌株A-29鉴定为S.viridocyaneus。菌株A-29的无菌发酵滤液具有广谱抗性,在PDA平板上对供试的8种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对黑斑链格孢的抑制效果最好,抑菌圈半径为7.0mm。分别利用二氯甲烷和乙酸乙酯浸提法提取发酵上清液中的活性成分,采用气相色谱-质谱联用仪对提取液进行定性分析,菌株A-29各提取液中可检测到的化学成分种类主要有：有机酸类、酯类、苯及其衍生物、烷烃、酮类、杂环化合物等,结合文献报道：上清乙酸乙酯提取液中可能的活性成分为：（S）-（＋）-2′,3′-Dideoxyribonolactone、2-Vinyl-9-[3-deoxy-.beta.-d-ribofuranosyl]hypoxan-thine;上清二氯甲烷提取液中可能的活性成分为：2-（Phenyl-piperidin-1-yl-methyl）-cyclohexanol、10-Methoxy-nb-.alpha.-Methylcorynantheol。     

产广谱高效多烯类抗真菌抗生素的纺锤链霉菌SD 07(Streptomyces netropsis)的分离及鉴定

从山东省济南市南部山区土壤中分离得到1株具有广谱抗真菌活性的链霉菌SD 07菌株。根据形态特征、生理生化反应和16S rDNA序列分析结果,链霉菌SD 07为定为纺锤链霉菌(Streptomyces netropsis)。分离纯化了SD 07?产生的抗真菌活性成分并获得其结晶CA SD07。抗真菌活性检测结果发现： CA SD07对酵母菌、担子菌、接合菌等多种真菌具有广谱抗菌作用。对CA SD07进行性质研究发现,抗真菌活性成分CA SD07抗菌谱广且抗菌活性高(约等于两倍的两性霉素B),是戊烯和七烯混合的多烯大环内酯类抗真菌抗生素。     

Molecular cloning of the whole biosynthetic pathway of a Streptomyces antibiotic and its expression in a heterologous host

The application of molecular cloning to antibiotic-producing microorganisms should lead to enhanced antibiotic productivity and to the biosynthesis of novel antibiotics by in vitro interspecific recombination. To allow such approaches, the genes for antibiotic synthesis must be isolated, analysed and perhaps modified. Certain Streptomyces species produce nearly two-thirds of the known natural antibiotics; the recent development of cloning systems in the genus makes it possible to isolate and analyse Streptomyces genes. However, antibiotics are metabolites which require sets of several enzymes for their synthesis and attempts to isolate the corresponding genes have so far yielded clones carrying either individual genes of the set, or only incomplete gene sets. We describe here the isolation of a large continuous segment of Streptomyces coelicolor DNA which apparently carries the complete genetic information required for synthesis of an antibiotic, actinorhodin , from simple primary metabolites. Not only can the cloned DNA 'complement' all available classes of actinorhodin non-producing mutants of S. coelicolor but, on introduction into a different host, Streptomyces parvulus , it directs the synthesis of the antibiotic. The tendency for the genes for antibiotic synthesis to be clustered together on the chromosomes of Streptomyces species and the availability of plasmid vectors which can carry stable inserts of DNA larger than 30 kilobase pairs (kb) and which can be introduced efficiently into Streptomyces protoplasts, suggest that the experiments described have general significance for this area of biotechnology.     

壮观链霉菌的衰退和复壮

将壮观链霉菌Ｌｕ－８０－２突变株的单孢子悬液涂布在淀粉平板培养基上培养，发现其群体模式由三种类型菌落组成，即梅花型、园型和光秃型。所占比例分别为８７．３％、１２．４％和０．３％。梅花型菌落抗菌活性最高，产孢子量最多；园形菌落次之；光秃型菌落没有抗菌活性。采用适中的接种量和石蜡油胶塞封藏法保藏菌种能有效防止菌种退化；马铃薯－燕麦培养对Ｌｕ－８０－２菌株具有明显的复壮作用。