无卵黄型人类精液冷冻保护剂试验与临床初步应用

不含卵黄的“改良 Tyrode’s液—甘油”型冷冻保护剂(简称 T—G 保护剂)与含卵黄的“甘油—卵黄—柠檬酸钠”型冷冻保护剂的试验比较表明,两者的精子复苏率、膜低渗肿胀率、Kremer’s 精子宫颈粘液穿透试验、去透明带地鼠卵穿透试验没有显著性差异(P>0.05);T-G 保护剂的甘油浓度分别为15%、10%,6%时,精子复苏率没有显著性差异(P>0.05);应用 T-G 保护剂冷冻保护的精液,人工授精已使1名丈夫无精子症的妇女受孕,并足月分娩1男婴,生长发育正常,提示 T-G 保护剂能有效地保护精子的受精能力。此外,对“TES-Tris-甘油-卵黄”型冷冻保护剂去除卵黄后的效果观察,精子的复苏率显著低于对照组(P<0.01)。     

山羊精子电穿孔转染外源DNA影响因素及最适条件的研究

本文以山羊精子为材料用电穿孔导入法转染外源基因,为生产转基因山羊奠定基础。用血细胞计数器在显微镜下记数死亡精子数检测精子活力,并用原位杂交实验检测电击精子消化前、后阳性率,以探讨山羊精子电穿孔转染外源DNA的方法及影响因素,摸索并优化电穿孔转染程序和条件。结果显示:电穿孔导入法可用于山羊精子介导转染外源DNA;电场强度、电击时间和电击次数同时影响精子活力,其中电击时间显著影响外源DNA的内化转运(P<0.05),山羊精子最适电穿孔条件为400V、200μs、电击1次,该条件下电击后精子活力和消化前、后阳性率分别为0.45和27.6%、22.5%;最适电穿孔条件下电击洗涤精子比未洗涤精子的消化后阳性率提高14%(P<0.01),将洗涤精子与外源DNA共孵育后再电击比不孵育处理组的消化后阳性率提高5.8%(P>0.05);电穿孔处理消化后阳性率在个体间无显著差异,且电击转染的精子被内化转运到精细胞内的外源DNA分布不规则。结果表明,山羊精子电穿孔转染外源DNA的最适转染条件为对精子充分离心洗涤并与外源DNA共孵育后,在400V/200μs条件下电击1次。     

山羊精子电穿孔转染外源DNA影响因素及最适条件的研究

本文以山羊精子为材料用电穿孔导入法转染外源基因,为生产转基因山羊奠定基础.用血细胞计数器在显微镜下记数死亡精子数检测精子活力,并用原位杂交实验检测电击精子消化前、后阳性率.以探讨山羊精子电穿孔转染外源DNA的方法及影响因素,摸索并优化电穿孔转染程序和条件.结果显示:电穿孔导入法可用于山羊精子介导转染外源DNA;电场强度、电击时间和电击次数同时影响精子活力,其中电击时间显著影响外源DNA的内化转运(P＜0.05),山羊精子最适电穿孔条件为400V、200μs、电击1次,该条件下电击后精子活力和消化前、后阳性率分别为0.45和27.6%、22.5%;最适电穿孔条件下电击洗涤精子比未洗涤精子的消化后阳性率提高14%(P＜0.01),将洗涤精子与外源DNA共孵育后再电击比不孵育处理组的消化后阳性率提高5.8%(P＞0.05);电穿孔处理消化后阳性率在个体间无显著差异,且电击转染的精子被内化转运到精细胞内的外源DNA分布不规则.结果表明,山羊精子电穿孔转染外源DNA的最适转染条件为对精子充分离心洗涤并与外源DNA共孵育后.在400V/200μs条件下电击1次.     

直肠内多普勒法和直腹肠壁触诊、对山羊怀孕诊断的比较试验

比较了两种妊娠诊断法——直肠腹壁触诊和直肠内多普勒法——在母山羊中的准确性。给三名兽医使用这些器械的短期训练,此后每个兽医用这两种诊断方法检查38只母山羊,使用直肠内多普勒法的检查者,对孕羊的正确诊断百分率是94%—100%。直肠腹壁触诊的正确诊断百分率是94%—97%。多普勒法对未孕羊的正确检查百分率是25%—75%,直肠腹壁触诊为75%。但是,未孕羊的头数甚少,因而不能做出肯定的结论。这些结果说明,这两种方法在母山羊配种后的55天或55天以上进行怀孕诊断是相当准确的。只要经过短期的训练也是能够掌握的。不过直肠腹壁触诊在直肠损伤和流产方面似有更大的危险性。因此,不是一个受欢迎的方法。     

巯基乙酸-巯基甘油共包覆的CdTe纳米微粒的合成

合成了巯基乙酸（TGA）-巯基甘油（TGOL）共包覆的胶体CdTe纳米微粒.采用FT-IR、荧光光谱和紫外光谱等现代测试手段对样品进行表征,并与巯基乙酸或巯基甘油单独稳定的CdT e纳米微粒进行比较.结果表明：两种巯基化合物稳定的CdTe微粒中同时具有羧基和羟基两种官能基,对于相同尺寸的TGOL和TGA共同稳定的CdTe微粒比单独采用TGA、TGOL稳定的CdTe纳米微粒尺寸均一,有相对高的荧光效率和较窄荧光半峰宽.     

大黄鱼精子冷冻复苏后活力和超微结构的变化

大黄鱼精子以甘油为冷冻保存剂,经冷冻-解冻复苏后观察精子的活力和超微结构变化,并进行人工授精,观察冻精的受精能力.实验结果表明,冷冻精子的活力较高(83.1±6.2)%.大部分冷冻精子结构完整,进行人工授精可以获得较高的受精率(71.5±11.6)%.与鲜精对照组比较,仍存在差异(P<0.05).部分冷冻-解冻后的精子结构出现异常,畸形率达到29.3%(P<0.01).较常见的异常是精子质膜膨胀或破损,核膜消失,染色质解体,线粒体嵴消失,轴丝断裂成许多段等.冷冻精子结构异常可能是冻精解冻复苏后精子活力和受精力下降的主要原因.     

我国首例体外获能异体受精山羊降生

据《中国科学报》1990年5月29日报道。我国首例精子体外获能异体受精山羊一胎三羔最近在西北农业大学降生,经观察生长良好。精子体外获能异体受精是生物工程的重要研究课题之一,是实现家畜繁殖工厂化的重要技术。精于体外获能异体受精山羊问世,标志着我国生物工程技术又获得了新进展,它不仅有助于揭示受精的本质和机理,而且有助于胚胎分化和发育的研究,对于开辟大量的胚胎来源、促进胚胎分割、卵核移植、性别鉴定以及基因导入等胚胎工程的研究和发展都具有重要意义。     

冬虫夏草抑制诱变效应的初步研究

在环磷酰胺诱导下,小鼠精子畸形率显著增高。本文以精子畸形率为检测指标,观察冬虫夏草抗环磷酰胺的诱导。发现冬虫夏草本身无诱变活性且对诱发的小鼠性细胞的遗传损伤有很好的保护作用。     

功能化磁性微粒的合成与表征

以3 氨丙基三甲氧基硅烷与Fe3O4纳米粒子反应,制备了超顺磁性、表面修饰—NH2的功能化磁性微粒,带有氨基的磁性微粒进一步与戊二酸酐反应,可转化为—COOH修饰的功能化磁性微粒.利用X射线衍射、红外光谱、激光粒度散射仪等对磁性Fe3O4粒子以及两种功能化磁性微粒进行定性表征,建立了线性电位滴定和电导滴定的方法分别对磁性复合微粒表面—NH2和—COOH的量进行定量分析.结果表明,功能化磁性复合微粒的平均粒径为3～5μm,红外光谱分析结果中显示了功能基团—NH2和—COOH的特征峰谱,线性电位滴定测定功能化磁性微粒—NH2含量为400±50μmol/g,电导滴定法测定—COOH含量为380±50μmol/g.     

波尔山羊的特征及快速育肥技术

1.对波尔山羊的认识要全面近年来,我国部分省区为了发展肉羊生产,先后从国外引进了肉用波尔山羊品种,进行纯繁和杂交改良工作,有力地推动了我国山羊饲养水平的提高。但应走出波尔山羊改良的误区。1.1波尔山羊的优点和缺陷波尔山羊具有体格大、生长快、屠宰率高的优点。但波尔山羊并不是完美无缺的,除毛色、耳型遗传不稳定外,最大的缺陷是繁殖性能较差,主要表现为性成熟晚、发情季节性强,表现不明显。波尔山羊性成熟年龄在5月龄～6月龄,发情70%以上集中在秋季,发情时不鸣叫,仅有摇尾,阴道流粘液表现,产羔率一般不超过200%;公羊性欲较差,一只公羊每天仅可配种1只～2只母羊。据笔者观察,波尔山羊杂交一代羊70%左右发情时不鸣叫,杂交二代90%左右发情不鸣叫,这对于广大农区绝大多数农户分散饲养的羊     

山羊胚胎的体外发育及冷冻保存研究

采用体外培养的方法，对山羊２～８细胞胚进行培养以后将体外发育至囊胚的胚胎进行冷冻保存，以便探讨山羊早期胚的体外培养方法和冷冻方法对体外发育胚冷冻效果的影响。将胚胎分别放入Ｍ１９９、Ｍ１９９＋输卵管上皮细胞和Ｍ１９９＋输卵管上皮细胞＋ＥＧＦ的培养液中进行培养，选取发育至囊胚期的胚胎分别以甘油和乙二醇为冷冻保护剂进行冷冻保存。结果体外培养胚的囊胚发育率在三个处理组中分别为１２．５％、７０．６％和７６．９％。使用Ｍ１９９处理组与添加输卵管上皮细胞、添加输卵管上皮细胞和ＥＧＦ的处理组之间具有极显著性差异（Ｐ＜０．０１）。冷冻解冻胚的形态正常率和发育率在以甘油和乙二醇为防冻剂的处理组中分别为６８．７、５８．３％和７８．６％、７２．８％。两组之间无明显差异，结果表明，采用与输卵管上皮细胞共同培养的方法能够提高山羊胚胎体外培养的发育率，以甘油和乙二醇为冷冻防冻剂均适合于山羊体外发育胚的冷冻保存，两者相比乙二醇的效果略优于甘油。     

冷冻保存对精子运动的影响

目的：观察精子运动状态,其中包括精子折断现象与冷冻损伤的关系。方法：对精液标本进行一步冷冻保存和分步冷冻保存,并用鉴别精子形态湿片法对冷冻前后精子运动状态及折断率进行评价。结果：冷冻保存复温后的精子活动率与冷冻前的精了活动率比较明显下降（P＜0．01）;含冷冻保护剂的实验组与不含冷冻保护剂的对照组比较,精子率呈显著性差异（P＜0．01）,精子折断率无显著性差异（P＞0．05）;一步冷冻和分步冷冻保存的精子之间活动率及折断率相比较,无显著性差异（P＞0．05）。结论：冷冻保存易造成精子活动率下降、运动形态异常,但不能显著地导致精子折断发生率增加。     

青虾精子超低温冷冻保存技术的研究

本文对青虾精子的超低温冷冻保存技术进行了研究.采用台盼兰染色法检测低温冷冻后青虾精子的活力,研究了3种稀释液(壬氏液,Kurokura extender,D-20)和3种冷冻保护剂(8%DMSO,12.5%甘油,10%甲醇)对青虾精子在超低温冷冻保存时的保护效果,以及不同保存时间后青虾精子活力的变化.结果表明,青虾精子以壬氏液为稀释液,添加8%DMSO作为抗冻保护剂,4℃平衡30 min,-20℃平衡15 min,-80℃平衡15 min后投入液氮中保存,解冻时将冷冻管浸入55℃水浴中10~15 s至半融取出自然解冻,精子能维持60%的存活力.本研究为青虾精子冷冻保存库的建立提供了实验依据和理论基础.     

缢蛏对60Co-γ辐射致雄性小鼠生殖损伤的修复效应

以清洁级ICR雄性小鼠为实验动物,研究了不同浓度缢蛏对60Co-γ致雄性小鼠生殖损伤的修复作用.测定小鼠体重、睾丸重量、精子密度、精子活力、精子畸变率等指标.实验结果表明:不同浓度的缢蛏均使受辐照小鼠的体重有所回升.一定剂量的缢蛏对受辐照小鼠的精子活力、精子密度有一定的增加.结论是缢蛏对60Co-γ致小鼠生殖损伤具有一定的修复效应.     

成都麻羊、吐根堡山羊及其杂交后代染色体显带的比较研究

采用外周血淋巴细胞培养制备染色体及G带、C带和银染技术,对成都麻羊、吐根堡山羊及其杂交后代的染色体进行了比较研究,并根据实验结果绘制了山羊G带核型模式图.这三种羊的染色体数目为2n=60;普通核型和G带核型在三种羊之间无显著差异;不同种类的山羊C带核型有差异;Ag—NORs频率在不同种类的山羊中差异显著.因此,C带核型和Ag—NORs频率的研究可以为山羊的杂交育种提供一定的细胞遗传学依据.     

冷冻保存对人类精子顶体蛋白酶的影响

探讨了冷冻保存对人类精子顶体蛋白酶的影响,应用明胶薄层法检测,冷冻保存后精子顶体蛋白酶反应率和成环直径显著减少（ｎ＝３０,Ｐ＜０．０１）．透射电镜观察到冷冻保存后精子（ｎ＝３）头部结构完整性显著降低,提示浆膜、顶体膜超微结构的冷冻损伤与冷冻精子顶体蛋白酶活性丢失和降低有关．冷冻精子穿卵率与顶体蛋白酶反应率不呈相关性（ｎ＝２１,ｒ＝０．３４,Ｐ＞０．０５）,提示两项检测反映的是精子功能的不同方面．     

辅助生殖技术中锌对精子的保护作用

目的:探讨辅助生殖技术中锌保护精子损伤的作用.方法:应用精子密度梯度离心的方法进行精子优选,优选的精子分为空白对照组、过氧化氢处理组和实验组,实验组受过氧化氢刺激同时加入锌,培养5h后比较3组精子的存活率、活力、精子质膜完整性及精子DNA碎片.结果:过氧化氢刺激后精子的存活率、活力差,精子质膜完整性破坏,大量精子DNA损伤,而锌能明显保护精子质量的作用.结论:在辅助生殖技术中锌可抑制精子损伤,从而提高精子质量的作用.     

基于信赖域技术的局部收缩的微粒群算法

为了改善标准的微粒群优化算法(SPSO)的性能,给出一个新的速度更新策略——局部收缩策略,且把信赖域技术引入PSO算法中进行惯性权重的动态调整,提出一个新的微粒群优化算法——基于信赖域技术的局部收缩的微粒群算法.新算法(NPSO)保持了PSO算法结构简单的特点,改善了PSO算法的全局寻优能力,提高了算法的收敛速度和计算精度.利用10个测试函数测试新算法的性能,并分别与SPSO、与混沌相结合的微粒群算法(PSOC)、具有被动聚集的微粒群算法(PSOPC)、SPSO的全局版本及带有收缩因子的微粒群算法(CPSO)比较,实验结果表明,新算法(NPSO)大大地改善了实例测试函数的表现.       

甲醇在铂微粒修饰的玻碳电极上的电催化氧化

利用循环伏安法等电化学方法研究了甲醇在铂微粒修饰的玻碳电极上的电催化氧化，结果表明，铂微粒修饰玻碳电极(GC—Pt)对甲醇电化学氧化呈现较高的催化活性，活化后的玻碳电极再修饰铂微粒表现更高的催化活性，其催化活性的大小与铂载量有关，同时测定了甲醇电催化氧化反应的动力学参数。     

真鲷精液和精巢超低温冷冻保存

以精子的活率和游动时间为指标，研究了福建南部沿海秋冬季真鲷生殖群体精液和精巢超低温冷冻保存的方法和鲜精在不同盐度或酸碱度条件下的生理特性．结果表明，以０．８％的ＮａＣｌ和０．０５％的ＫＣｌ配制的稀释液适合于真鲷精液的冷冻保存．Ｋ＋有助于提高精子的活率．添加甘氨酸可延长精子的游动时间．甘油、二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）和甲醇均可作为真鲷精液的抗冻保护剂，但以甘油和ＤＭＳＯ混合使用时的抗冻效果较好．冷冻精液的效果优于冷冻精巢．鲜精在弱碱环境和盐度为３０时平均活率最高，游动时间最长．