APA微囊化人工细胞治疗疾病的研究

作为免疫隔离屏障的微囊技术为克服组织细胞移植治疗疾病研究中的免疫排斥反应和移植物来源稀少提供了新途径．海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊化牛肾上腺髓质嗜铬细胞移植治疗帕金森病和疼痛及微囊化胰岛移植治疗糖尿病的动物实验和临床研究,及其他研究者对微囊化胰岛移植治疗糖尿病、微囊化甲状旁腺细胞移植治疗甲状旁腺功能低下等方面的研究,均明确表明APA微囊可成功地克服组织细胞移植中的免疫排斥反应,使异种移植物的应用成为可能,极大地扩展了移植物的来源．临床应用微囊化人工细胞治疗糖尿病、帕金森病等神经／内分泌疾病将得以实现．同时,也将为体细胞基因治疗提供有效的工具．     

海藻酸钠/壳聚糖微胶囊生物相容性的研究

以天然高分子材料海藻酸钠(alginate)和壳聚糖(chitosan)为原料制备海藻酸钠/壳聚糖(al-ginate-chitosan-alginate,ACA)微胶囊,用于动物和微生物细胞的微囊化培养与移植.考察了壳聚糖材料对细胞生长的影响.采用活体实验方法,将制备的ACA微胶囊移植入小鼠腹腔,8个月后微胶囊能够成功回收,且囊内细胞出现聚集现象,小鼠腹腔无炎症等免疫排斥现象发生,初步证明了ACA微胶囊具有良好的生物相容性.     

3-羟基丁酸对HeLa癌细胞生长与凋亡的影响

研究3-羟基丁酸对HeLa癌细胞生长与凋亡的影响.采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力;AO/EB荧光染色观察细胞凋亡与坏死的形态学变化;单细胞凝胶电泳检测细胞DNA的损伤;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测凋亡蛋白的表达.结果表明:3-羟基丁酸能够抑制HeLa癌细胞增殖;使HeLa癌细胞DNA受到损伤;通过caspase依赖性细胞凋亡途径诱导HeLa癌细胞凋亡;在HeLa癌细胞与人脐带正常细胞共培养条件下,3-羟基丁酸诱导HeLa癌细胞先于人脐带正常细胞凋亡.实验为肿瘤的生酮饮食疗法和酮体疗法提供了理论依据.     

慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响

运用慢病毒(Lentivirus)载体构建绿色荧光蛋白(GFP)在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的转染体系,检测转染后MSCs的表型和增殖能力,并诱导其向成肌细胞分化,检测此转染体系对MSCs细胞表型、增殖和分化能力的影响.骨髓细胞悬液破红后贴壁法培养MSCs,采用流式细胞术鉴定细胞表面标记,鉴定MSCs纯度;Lentivirus-GFP以1、10、50和100的感染复数(MOI)转染MSCs,作用48h后流式细胞术及免疫荧光法检测转染效率和表达的荧光强度;MTT法检测转染后MSCs的细胞活力.诱导MSCs-GFP向成肌细胞分化,蛋白印记法(WB)检测成肌细胞特异性蛋白desmin和α-SMA的表达.流式细胞术检测结果显示,培养的MSCs表达CD44、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和CD188,符合干细胞特性.MOI为1、10、50和100的转染效率分别为23.45%、93.51%、95.44%和95.55%,MOI为10时,转染效率较高,且对MSCs活力无明显影响.MSCs-GFP体外经成肌细胞诱导分化后,表达特异性抗原desmin和α-SMA.表明本研究成功构建了小鼠骨髓来源MSCs的Lentivirus-GFP转染体系,有效标记了MSCs细胞,且此标记对MSCs的表型、增殖和分化能力等细胞生物学特性无明显影响.     

佛手水煎剂对RAW264.7癌细胞增殖的影响

为了观察佛手水煎剂对RAW 264.7癌细胞增殖的影响,用生药量0.625,1.250,2.500和5.000 mg/mL的佛手水煎剂处理RAW 264.7癌细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞活力、台盼蓝排斥法测定细胞存活率、吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)荧光染色法检测细胞凋亡与坏死.结果表明:与对照组比较,0.625,1.250和2.500 mg/mL佛手水煎剂处理后,RAW 264.7癌细胞固缩,细胞核染色质凝聚、片断化,有凋亡小体出现,表现出典型的细胞凋亡特征;5.000 mg/mL佛手水煎剂处理后,RAW 264.7癌细胞肿胀,细胞膜破裂,呈现坏死症状,RAW 264.7癌细胞的增殖明显受到抑制(P＜0.01),半数抑制浓度(IC50)为2.073 mg/mL.说明佛手水煎剂能诱导癌细胞凋亡,抑制癌细胞增殖.     

SDF-1α改善高糖对骨髓间充质干细胞存活及迁移能力的抑制作用与分子机制的研究

目的:探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)对高糖环境(25 mmol/L)下大鼠骨髓间充质干细胞(r MSCs)存活及迁移能力的影响及相关分子机制.方法:采用全髓贴壁法纯化培养r MSCs,通过MTT法检测细胞增殖率、Hoechst 33258染色从形态学角度观察细胞凋亡评估SDF-1α对高糖环境下r MSCs存活的影响,同时通过transwell实验评估SDF-1α对高糖环境下r MSCs细胞迁移能力的影响.结果:实验结果发现,与低糖培养液(5.6mmol/L)比较,高糖培养液可明显抑制r MSCs增殖、促进细胞凋亡(P0.05),SDF-1α(50 ng/m L)可减轻高糖培养液对细胞增殖的抑制及诱导细胞凋亡的作用(P0.05),CXCR4受体特异性拮抗剂AMD3100(10μg/m L)虽能进一步抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡,但差异无显著性(P0.05).Transwell实验发现高糖培养液可明显抑制r MSCs的迁移作用(P0.05),SDF-1α(50 ng/m L)可逆转高糖培养液对细胞迁移的抑制作用(P0.05),AMD3100(10μg/m L)可进一步抑制细胞迁移,且差异有显著性(P0.05).结论:SDF-1α可能通过CXCR4受体改善高糖对骨髓间充质干细胞迁移能力的抑制,而其改善高糖对骨髓间充质干细胞存活的抑制则可能通过非CXCR4受体介导,为改善MSCs用于治疗冠心病合并糖代谢异常患者心梗后心力衰竭疗效进一步提供理论依据.     

磁性三氧化二铁纳米粒子对HepG2细胞增殖及凋亡的影响

应用HepG2细胞作为研究对象,探讨Fe2O3纳米粒子对肿瘤细胞的活力与凋亡的影响.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)还原检测法确定受试物的染毒剂量.分别对各个组进行流式细胞术检测细胞线粒体膜电位变化及凋亡.结果显示,Fe2O3纳米粒子在0.555～3.310 mg/mL范围内均可抑制HepG2细胞增值,IC50为1.11mg/mL.Fe2O3纳米粒子在0.173、0.347、0.694 mg/mL,剂量组均导致细胞线粒体膜电位均较对照组有所下降且细胞凋亡率显著增高.     

樱柏酸对叔丁基过氧化氢诱导SH-SY5Y神经细胞氧化应激损伤的保护作用

采用TBHP处理SH-SY5Y细胞的方法,建立了细胞氧化应激损伤模型,用以评价樱柏酸对细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。同时借助MTS法、β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色法、乳酸脱氢酶(LDH)含量检测法、Annexin V-FITC/PI双染法、2′,7′-二氯荧光素二乙酸盐(DCFH-DA)法以及酶联免疫法(ELISA)法等对细胞的活性及衰老相关指标进行了检测。研究结果显示樱柏酸对TBHP诱导的SH-SY5Y氧化应激损伤细胞模型具有保护作用,并且能够降低细胞衰老比例、细胞凋亡水平,其作用机制可能通过减轻细胞膜和DNA等氧化应激损伤、提高体内抗氧化酶SOD和GSH-Px酶活力减少ROS含量起效。     

壳聚糖-海藻酸钠包被猪血红蛋白微囊的制备

采用乳化凝胶法研制壳聚糖-海藻酸钠包被的猪血红蛋白微囊.结果表明:壳聚糖-海藻酸钠-血红蛋白微囊具有较佳的形态和较小的粒径,平均粒径1μm,且具有相对较窄的高斯分布;血红蛋白在微囊中包埋率超过90%,从微囊中持续释放时间达1个月以上.壳聚糖-海藻酸钠-血红蛋白微囊有望成为可供静脉注射用的具有缓释作用的人工携氧治疗剂.     

清开灵注射液体外抑制HIV-1作用

目的:研究清开灵注射液(QKL)体外抑制HIV-1的作用.方法:用MTT比色法检测QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞(慢性感染HIV-1ⅢB的H9细胞)和MT-2细胞的毒性;采用荧光染料Calcein-AM标记的H9/HIV-1ⅢB细胞和系列稀释的QKL作用后.与MT-2细胞混合培养,2 h后在荧光下计数融合细胞数目,评价QKL对两种细胞早期融合的影响;用MTT法检测QKL对HIV-1ⅢB急性感染的MT-2细胞的保护作用;用HIVp24抗原试剂盒检测HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞的培养上清p24抗原的含量,分析QKL对HIV-1复制的影响.结果:QKL对H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞的CC50分别为1/50.76和1/36.97;抑制H9/HIV-1ⅢB细胞和MT-2细胞早期融合作用的EC50=1/235.29,SI=6.36;对HIV-1ⅢB感染的MT-2细胞保护作用的EC50=1/144.93,SI=3.92;抑制p24抗原产生作用的EC50=1/175.44,SI=4.75.结论:QKL体外有抗HIV-1活性,作用机制可能是多靶点的,可抑制病毒进入细胞和胞内复制.     

细胞活性测定方法研究进展

细胞活性测定是体外筛选抗肿瘤药物和临床肿瘤药敏试验的重要方法之一;细胞活性的测定方法有MTT法、SRB法3、H-TdR掺入法、LDH法等,根据不同细胞系及其测定原理,它们有各自的优缺点及最适测定条件;概述了近年来细胞活性测定的几种常见方法、原理及应用特点。     

建立利用萤光素酶快速检测细胞活性的方法

运用PCR的方法,从萤火虫萤光素酶基因载体 pGL4.26 扩增萤火虫萤光素酶基因片段,将其插入连接于原核表达载体pET24a 中,构建重组表达载体pET24a-Luc.经酶切鉴定及序列分析后,将重组载体转化到表达菌株大肠杆菌BL21（DE3） 中,获得阳性重组菌BL21/pET24a-Luc.IPTG诱导蛋白高效表达并通过镍柱亲和层析纯化萤火虫萤光素酶.该目的蛋白活性用Bright-GloTM试剂进行验证并用于建立一种基于测量ATP含量的检测细胞生物活性的方法.与传统的细胞生物活性检测试剂盒MTT,CCK-8以及Alamar Blue比较,该方法具有反应迅速、活力高、灵敏度好、生产方便的优点,具有实际应用的潜力.     

Development of a hybrid scaffold and a bioreactor for cartilage regeneration

We developed a hybrid scaffold and a bioreactor for cartilage regeneration. The hybrid scaffold was developed as combination of two components： a biodegradable framework and hydrogel-containing chondrocytes. We performed the MTT cell proliferation assay to compare the proliferation and viability of chondrocytes on three types of scaffolds： an aiginate gel, the hybrid scaffold, and an alginate sponge. Cells were encapsulated in 2% agarose gel. The bioreactor consisted of a circulation system and a compression system. We performed dynamic cell culture on these agarose gels in the bioreactor for 3 days.     

EVn-50抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响;平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和锚定非依赖性生长作用的影响;AO／EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡的形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用。结果EVn-50对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO／EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg／mL作用48h出现典型“梯形”DNA条带。结论EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

可溶性人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞的凋亡

为研究可溶性人TRAIL蛋白（sTRAIL）对肝癌细胞株SMMC7721的生长抑制效应及凋亡诱导作用．采用显微镜、台盼蓝排斥试验、MTT比色试验、TUNEL法和DNA断裂实验等方法检测细胞增殖和细胞凋亡．通过显微镜观察到核染色质凝集等凋亡的形态学变化,台盼蓝排斥试验、MTT比色试验结果显示,sTRAIL蛋白可显著抑制SMMC7721细胞的生长和增殖,并且TUNEL法检测到经sTRAIL处理后的细胞凋亡指数与对照比较有显著差异,DNA断裂实验亦观察到典型的DNA梯形条带,这些结果提示sTRAIL可诱导肝癌细胞株SMMC7721发生凋亡,具有抗肝癌的作用．     

枸杞根系内生真菌的染色方法

为更好地观察枸杞(L ycium barbarum)根系内生丛枝菌根真菌(arbuscular mycorrhiza fungi,AMF)和深色有隔内生真菌(dark seprate endophytes,DSE)侵染定殖特征,建立了一种枸杞根系内生真菌适宜的染色方法.将健康枸杞根样置于100 g/L的KOH溶液中90...     

微囊化基质细胞对脐带血造血干/祖细胞扩增支持

将脐带血单个核细胞与包埋有兔骨髓间充质干细胞的海藻酸钙微胶珠在3种不同的培养液中进行了7d的体外静态共培养.每24h进行总有核细胞计数,在0、72和168h进行流式CD34+细胞分析以及甲基纤维素集落检验.实验结果表明:经过7d的静态共培养,在添加常规剂量造血生长因子的培养液中,总有核细胞扩增了(15±2.85)倍,CD34+细胞扩增了(5.33±0.32)倍,CFU-Cs扩增了(5.6±1.21)倍.微胶囊可以作为一种新的共培养隔离手段,微囊化兔骨髓间充质干细胞在添加适量血清或者造血生长因子组合的条件下对于脐带血造血干/祖细胞在静态下的扩增有明显的促进作用.     

吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系的抑制作用

目的：评价吲哚美辛对人喉癌Hep-2细胞系的抑制作用。方法：应用不同剂量的吲哚美辛作用于人喉癌细胞系Hep-2后，进行细胞形态观察，并用台盼蓝染色法检测细胞生长情况和流式细胞仪分析细胞DNA含量。结果：Hep-2细胞系在吲哚美辛作用下，细胞生长形态改变，细胞活力降低，流式细胞仪分析形成明显的亚二倍体峰，并与药物剂量及作用时间有依赖关系，电镜下见凋亡细胞。结论：吲哚美辛能抑制人喉癌细胞系Hep-2的生长，诱导细胞凋亡。     

ADTIQ导致SH-SY5Y细胞凋亡和多巴胺转运体表达降低

新内源性神经毒素1-乙酰基-6,7-二羟基-1,2,3,4-四氢异喹啉(ADTIQ)生成与糖代谢密切相关,可能成为糖尿病并发PD的一个关键因素,但是其神经毒性还不清楚.针对ADTIQ的神经毒性,该研究采用SH-SY5Y细胞为模型,MTT法,Annexin V/PI双染法,Caspase 3/7活性检测细胞存活率和细胞凋亡,Western-blot检测多巴胺转运体(DAT)的表达量.结果表明,随着ADTIQ浓度增大,细胞的存活率逐渐下降,凋亡率增加,同时ADTIQ导致DAT表达降低.研究提示ADTIQ导致多巴胺神经元的凋亡与PD的发生息息相关,糖尿病引起ADTIQ增加,可能成为高糖损伤多巴胺神经元的一个重要原因.     

改良MTT比色法测定淋巴细胞增殖反应

本文应用改良MTT（四甲基偶氮唑盐）比色法检测淋巴细胞增殖反应。结果表明，改良MTT比色法具有简便、快速、敏感之优点，便于一般实验室推广应用。