免疫球蛋白IgY的分子结构与功能

应用鸡作为免疫宿主产生抗体,大约在100年前已有过报道,鸡的抗体是从血清转输至蛋黄中,使鸡胚胎或雏鸡获得被动免疫性,因此从蛋黄(egg yolk)中提取抗体免疫球蛋白产物称之为IgY(Immunoglobulin yolk,IgY),它的优点是促进了免疫原性,比哺乳动物的抗体易保存,此外IgY能识别一些哺乳动物的相同蛋白质,使得它能得到广泛的应用。通过常规方法免疫而获得的IgY和IgG抗体进行比较,每月约可得     

鸡蛋黄免疫球蛋白IgY的特性与用途

1969年Leslic与Clem指出鸟类、爬行类和两栖类动物的蛋黄中仅含有免疫球蛋白IgG一种成分。因为只有免疫球蛋白IgG分子能通过卵黄囊转输至蛋黄中,因此用抗原免疫的母鸡所生的鸡蛋黄中含有丰富的免疫球蛋白IgG。由于鸡蛋黄的英文名称为“Yolk”,特取它的第一个字母“Y”为代表,将鸡蛋黄中的免疫球蛋白IgG称为IgY(Immunoglobulin-Yolk)。     

鸡卵黄免疫球蛋白Y的性质

用ＥＬＩＳＡ技术研究了鸡卵黄免疫球蛋白Ｙ（ＩｇＹ）对温度、酸碱度、胃蛋白酶、胰蛋白酶及反复冻融的稳定性。结果表明：ＩｇＹ具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力,对胃蛋白酶具有良好的抵抗能力（ｐＨ〉４）,对胰蛋白酶非常敏感,经１ｈ酶解处理,ＩｇＹ的结合活性完全丧失,ＩｇＹ具有很好的耐反复冻融的特性,即使经过５次反复冻融,其抗原结合活性也几乎未受损失。     

免疫球蛋白IgY对牙龈卟啉单胞菌诱导的牙周炎大鼠模型的影响

研究了免疫球蛋白(IgY)通过抑制P.gingivalis的生长繁殖治疗实验性大鼠牙周炎的可行性.用医用丝线结扎上颌第二磨牙,并涂抹P.gingivalis的方法建立大鼠牙周炎模型.建模成功的大鼠随机分成对照组、高剂量IgY组和低剂量IgY组,每组8只.给药28 d后,测量各组大鼠的牙龈指数(GI),菌斑指数(PI)和探诊出血指数(BOP),以及血液中IL-6和TNF-α含量,并进行X-射线影像和组织学观察.与对照组相比,IgY治疗组GI、PI和BOP指标明显好转,IL-6和TNF-α含量显著降低,X-射线影像可见牙间隙明显缩小,组织学观察牙周纤维排列整齐,极少量炎细胞浸润,牙槽嵴无吸收,牙槽骨骨质增加.特异性IgY能够治疗P.gingivalis诱导的大鼠牙周炎.     

卵黄抗体(IgY)及其在蛇伤治疗中的研究进展

传统抗蛇毒血清存在生产成本高、得率低、多种副作用等不足,使得寻找更理想的蛇毒解毒剂变得十分迫切;因卵黄抗体(Ig Y)在生产及中和蛇毒毒性等方面所体现的独特优势,成为开发新蛇毒解毒剂的重要研究对象。当前研究表明:Ig Y与哺乳动物Ig G功能相似但结构不同;Ig Y据有良好的耐压及耐酸碱稳定性,但对高温及蛋白水酶敏感;相比Ig G,Ig Y的生产成本低且具有非侵略性,其运用于免疫分析可降低假阳性率;产蛋鸡的免疫应答受抗原(剂量、分子量)、佐剂类型、免疫途径、免疫间隔等4种主要因素共同影响;纯化方法影响Ig Y纯度与活性;已制备出的多种抗蛇毒Ig Y对蛇毒引起的毒理作用有很好的中和效果。随着生物技术的快速发展,抗蛇毒Ig Y有望被开发成解毒剂、诊断试纸、亲和配体、口服制剂等,在蛇伤研究领域的应用前景广阔。
     

抗幽门螺杆菌蛋黄免疫球蛋白的制备分离

该文研究了幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,简称HP)疫苗对母鸡诱导产生特异性抗体(Immunoglobulinofyolk,简称IgY)以及IgY的制备和检定方法.采用融冻法和超声波法对HP破碎,破碎后的细胞用福氏完全佐剂和福氏不完全佐剂制成疫苗对生蛋母鸡进行免疫,通过ELISA间接法检测鸡蛋的免疫应答,IgY用盐析、超滤和葡聚糖凝胶(SephadexG 200)层析等方法纯化,未纯化和纯化的IgY进行SDS PAGE电泳分析.IgY与HP的凝集反应均为阳性,表明IgY为HP的特异性抗体,用ELISA测定效价达1.6×103,比未免疫的蛋黄IgY高约160倍,根据SDS PAGE图谱分析抗HP的特异性IgY分子量在180kD左右.     

兔抗人多发性骨髓瘤细胞多克隆抗体的制备与鉴定

制备人多发性骨髓瘤全细胞兔多克隆抗体。用人多发性骨髓瘤细胞系ARH-77全细胞和福氏完全佐剂通过背部皮内多点注射首次免疫新西兰大白兔,第14 d用ARH-77全细胞和福氏不完全佐剂同样剂量加强免疫,第28 d和38 d时再次免疫。第45 d颈动脉采血80 mL,4℃静置过夜,收集血清。然后采用亲和层析系统纯化血清中的多克隆抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纯化多克隆抗体的效价;免疫印迹法和荧光免疫细胞化学检测纯化多克隆抗体的特异性。结果:ELISA检测多克隆抗体滴度为1∶20 000,免疫印迹检测结果显示该抗体具有较高特异性,荧光免疫细胞化学检测多克隆抗体能够有效的结合细胞表面抗原。实验获得了高效价的特异性的兔抗人骨髓瘤细胞多克隆抗体,为进一步研究多发性骨髓瘤诊断和治疗奠定了基础。     

抗弓形虫IgY抗体在酶免疫试验中的应用

IgY是从鸡蛋黄中提取的免疫球蛋白,不但具有高免疫活性,而且不受类风湿因子、血清补体等干扰,在免疫学试验中具有优越性。用纯化的弓形虫虫体抗原免疫白菜杭鸡获得特异性的IgY抗体,用辣根过氧化物酶标记后与抗人IgM单抗配伍建立捕获法酶免疫试验,与同类试剂对照,平行检测192份临床血样,检测结果二者吻合,表明该IgY具有良好的特异性和敏感性。     

鸡卵黄免疫球蛋白的嗜硫性色谱一步分离纯化

采用重力沉降法对卵黄液进行脱脂预处理 ,利用嗜硫性色谱 ,实现鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)的一步分离纯化 ,蛋白质的回收率高达 91% .鸡卵黄免疫球蛋白IgY经SDS -PAGE检测为电泳纯 ,活性回收率达 70 %以上     

用实验动物制备多克隆抗体I．免疫方案的优化

免疫实验动物诱导体液免疫和 /或细胞免疫的生成 ,是当前广泛采用的一种常规手段。许多研究人员需要用这种方法生产抗体。虽然多种动物可用于生产抗体 ,但生产多克隆抗体 (ｐＡｂｓ)和单克隆抗体 (ｍＡｂｓ)最常用的是家兔和小鼠。欧洲一些国家 ,非官方组织和研究所已经颁布了他们自己的标准化方案 ,例如注射的最大剂量、接种途径、接种次数。这些标准的目的在于确保用合适的免疫程序获得预期的免疫结果且不引起实验动物过度的不良反应。免疫方案的每一步骤都会产生较大影响。因此 ,仔细设计免疫方案十分重要。1993年 ,欧洲替代法验证中心 (…     

一种大量制备鼠源性多克隆抗体的方法

 用人绒毛膜促性腺激素或人免疫球蛋白作为抗原,经小剂量、多次免疫Balb/c鼠,并于其腹腔内注射NS-1骨髓瘤细胞,制备了大量高效价的鼠源性多克隆抗体腹水.该实验为快速制备大量鼠源性多克隆抗体提供了一种新的方法.     

ZNF382多克隆抗体的制备及其在蛋白质水平的表达研究

在筛选心脏发育相关新基因的研究时,本人克隆出了在人类心脏组织特异表达的基因-ZNF382,ZNF382在mRNA水平上的表达情况已经报道,为了阐明该基因在蛋白质水平的表达情况,本研究用质粒DNA注射小鼠法,生产制备得到抗ZNF382蛋白的多克隆抗体,胚胎原位抗体染色结果初步显示ZNF382蛋白主要在心脏和骨骼肌表达,其蛋白质表达水平与mRNA的表达水平基本一致,进一步表明该基因很可能参与心脏的形成或对心脏功能的发挥起重要作用.     

鸡卵黄抗体的研究及在兽医学上的应用

随着实验室和临床研究对抗体需求的增加,廉价大规模抗体制备技术已成为新的研究课题。利用超免疫鸡将特异性抗体稳定持续地传至卵黄中,制备特异性多克隆抗体,成本低且产量高,有望成为规模制备特异性抗体的有效手段。1893年Klemperer首次报道鸡蛋中存在抗体[1]。然而长期以来,这     

溶藻弧菌菌体及其外膜蛋白多克隆抗体的研究

采用常规方法制备抗溶藻弧菌及其外膜蛋白的多克隆抗体(Polyc lonal antibody,PcAb)。制备的抗溶藻弧菌(Va)及其外膜蛋白的多克隆抗体(Va-PcAb和Va-OMP-PcAb)的效价达到1∶3200以上,特异性较好,只与Va菌不同菌株反应,与其他弧菌及不同属的菌株没有交叉。同时建立的ELISA、IFIA等免疫学检测方法可应用于生产实践,适应不同的需要。     

兔抗Myosin Ⅹ多克隆抗体的制备及初步应用

为制备兔抗肌球蛋白Ⅹ(myosinⅩ,MyoⅩ)多克隆抗体,合成了含有MyoⅩN端1 000～1 021个氨基酸的多肽,将纯化后的多肽与钥孔戚血蓝蛋白(keyhole limpethemocyanin,KLH)进行交联;通过背部皮下免疫新西兰大白兔获得免疫血清,并通过ELISA、免疫印迹、免疫荧光等分析对免疫血清进行了初步的验证.结果表明:经过4次免疫后可获得免疫血清,ELISA检测表明抗体终效价达到1∶51 200,抗原吸附实验进一步证明了此多克隆抗体的特异性.利用获得的多克隆抗体检测了多种组织中MyoⅩ的表达,发现兔抗MyoⅩ多克隆抗体可特异性识别多种组织中的MyoⅩ.免疫荧光染色表明该抗体可以显示MyoⅩ在COS-7细胞、NLT细胞和神经元中的分布.     

抗原化抗体及其应用

抗原化抗体是在抗体分子可变区的互补决定区中插入外源蛋白寡肽的人工构建抗体，综述了抗原化抗体的性质，构建方法，应用及展望。     

碘化酪蛋白多克隆抗体的制备

碘化酪蛋白（Iodinated Casein）是一种蛋白同化类激素,为甲状腺素的前驱物质,具有类似甲状腺素的生理作用．2002年被农业部第176号公告列入禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物．     

用实验动物制备多克隆抗体Ⅱ.关于佐剂的评价

佐剂可以增强免疫反应。理想的佐剂能够激发多种实验动物维持较高的抗体滴度 (即使使用少量抗原 ) ,可用于大部分抗原 ,容易制备 ,便于注射 ,少量即可奏效 ,免疫毒性低 ,对研究者没有危害。遗憾的是目前还没有完全符合上述标准的佐剂。选择佐剂原则上由研究者执行 ,但应首先考虑被免疫的实验动物福利。接种混合液 (抗原 /佐剂 )应无菌制备以防污染。检测所用抗原是否需要佐剂 ,还是本身就具有佐剂的性能也是相当重要的。当用整个菌体、全细胞或其它特殊抗原 (如细胞碎片和细菌细胞壁 )时 ,通常不必使用佐剂 ,但使用可溶性抗原 (蛋白质、肽类…     

德国小蠊Bla g 2的原核表达及其多克隆抗体的制备

利用RT-PCR技术扩增德国小蠊Blag2基因,将其克隆进pET-41b载体.在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Blag2蛋白,SDS-PAGE分析表达产物,得到相对分子量约74kDa的融合蛋白.通过亲和层析法纯化表达的GST-Blag2蛋白,并以此表达产物制成油乳剂疫苗免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体.间接ELISA法测得抗体效价达到1∶300000.Western印迹表明抗体有较高的特异性,可分别与GST-Blag2融合蛋白和德国小蠊变应原浸提液反应.Blag2在大肠杆菌中的成功表达及其多克隆抗体的制备,为德国小蠊过敏患者的诊断和治疗提供了帮助.