水稻生活精细胞的大量分离

用渗透压冲击法，从水稻成熟花粉料中释放出大量精细胞，经Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心纯化后，荧光素二醋酸酯染色表明，分离的精细胞是生活的，刚释放的精细胞具显著的长尾，并观察了分离后的精细胞的形态变化。     

微生物絮凝剂对小球藻细胞氧化应激研究

小球藻作为能源藻,可以提供产生物柴油,但是小球藻生物质的获取成为能源藻发展的瓶颈.目前研究藻细胞生物质收集的方法很多,但不同收集方法对能源藻细胞的氧化应激研究却很少.分别研究絮凝功能细菌xn-1所产生物絮凝物质和离心法对能源藻——小球藻生物质在收集过程中对藻细胞的氧化应激,以期确定絮凝微生物对小球藻细胞的生物安全性.采用涂布划线法从藻际分离纯化絮凝功能微生物;通过梯度醇沉法获得絮凝物质;分别用絮凝微生物所分泌絮凝物质和离心法收集藻细胞生物质,并对藻细胞内蛋白含量、总糖含量、丙二醛含量(MDA)、过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽(GSH)含量和抗坏血酸(AsA)含量进行测定;以分光光度计测定其吸光度值.经过测定并经过统计学显著性分析,发现离心作用下收集的藻细胞内的MDA,GSH和AsA含量显著高于利用絮凝物质絮凝得到的藻细胞.离心作用相对于絮凝作用造成藻细胞膜发生更高的脂质过氧化,产生大量的活性氧自由基,诱导非酶抗氧化系统响应.因此,离心法收集藻生物质相对于微生物絮凝对藻细胞的伤害更大,絮凝微生物比离心法更适合于收集能源藻生物质.     

蕨游动精细胞的研究

电镜研究表明蕨精细胞在发育早期为多角形细胞，具有细胞壁，多层结构和微管，但不具鞭毛，核圆形或椭圆形，随着精细胞的发育，质膜退缩远离细胞壁，在细胞壁和质膜之间质下一个空间，细胞核螺旋化并有大量鞭毛形成，最后精细胞发育形成具有鞭毛的游动精子。     

大鼠骨髓间质干细胞的分离纯化与鉴定

采用密度梯度离心法分离骨髓间质干细胞,差速贴壁法进行纯化,应用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜等对纯化细胞进行鉴定,结果细胞表面抗原CD２９,CD４４,CD１０５,CD１６６表达呈阳性,而CD１４,CD３４,CD４５表达呈阴性。采用RT唱PCR鉴定了三个基因：nestin,NST,Oct唱４,前两者呈阳性表达,后者弱阳性表达。这些细胞特异抗原与基因表达综合起来,表明得到的细胞具备骨髓间质干细胞的特性。密度梯度分离与差速贴壁相结合,可获得较好均一性的骨髓间质干细胞,是一种简单可靠、易于推广的骨髓干细胞获取方法,可为细胞与组织工程研究提供种子细胞。     

用percoll密度梯度离心法快速分离提纯大鼠再生肝细胞

报导一种分离和纯化大鼠再生肝细胞的新方法——percoll密度梯度离心法。本方法快速稳定,而且便于提纯和体外培养,细胞成活力高。     

玉米精细胞质膜特异糖蛋白胶体金免疫定位

用亲和层析,SDS-PAGE及印迹技术,从玉米精细胞中分离纯化质膜蛋白。用ConA-HRP检测获得分子量为37和39kD两种糖蛋白特异成分。用它们分别免疫小鼠得到多克隆抗体,以兔抗鼠IgG胶体金(15nm)为探针,检查此两种蛋白在精细胞质膜上的分布。免疫定位表明,37kD, 39kD多肽是玉米精细胞质膜所特异的。有关此多肽的功能有待进一步研究。     

胎盘绒毛细胞的培养及其基因组DNA的分离纯化

从采集到的微量胎盘绒毛，经过组织细胞培养，获得了大量的绒毛细胞，对其进行了基因组ＤＮＡ的分离纯化，提取到足够量的ＤＮＡ。经过０．８％琼脂糖凝胶电泳，结果显示出完整的绒毛细胞ＤＮＡ带，得到了典型的大分子ＤＮＡ电泳图谱。     

水稻和天竺葵细胞质遗传的细胞学研究

细胞器ＤＮＡ荧光的观察表明，水稻生殖细胞中含少量的细胞器ＤＮＡ，成熟精细胞中无细胞器ＤＮＡ分布，天竺葵生殖细胞和精细胞中均有大量细胞器ＤＮＡ，研究结果为水稻的单亲母系遗传和天竺葵的双亲遗传提供了细胞学证据。     

人新型肿瘤坏死因子在E.coli中的高效表达、纯化及诱导凋亡活性

采用PCR技术获得了新型的人肿瘤坏死因子基因，在153位氨基酸处引入突变，使Gly突变为Leu.将突变体hTNF基因克隆到表达载体pQE30中，SDS-PAGE结果显示经IPTG诱导后,hTNF基因获得大量表达，通过Ni金属螯合层析柱亲和层析获得到纯化的hTNF融合蛋白，Western blot结果表明hTNF蛋白可与抗TNF的抗血清知识性发生特异性反应，荧光染色实验检测了hTNF蛋白诱导细胞发生凋亡的活性。     

大鼠雪旺细胞体外分离培养纯化及鉴定

雪旺细胞在周围神经损伤后的修复过程中起着关键的作用,因此,建立一种稳定的分离、培养和纯化方法极其重要。本文通过一种简单的培养方法获取大量高纯度的雪旺细胞。首先,从出生6 d的SD大鼠分离获得坐骨神经,用胰酶和胶原酶消化得到雪旺细胞;待细胞贴壁后,用阿糖胞苷进行纯化,随后在培养基中加入氟丝扣林促进细胞增殖研究。研究结果显示:雪旺细胞的形态以细长梭形为主,少数呈现三角形。混杂的成纤维细胞经阿糖胞苷作用后逐渐变圆、死亡,而雪旺细胞无明显减少,纯化后的雪旺细胞经氟丝扣林作用后增殖速度提高。经S-100和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光鉴定,雪旺细胞的纯度达到97%以上,因此,通过该方法可获得大量高纯度的雪旺细胞。     

大鼠肝陷窝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％ Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离陷窝细胞（pit cell）,用分化抗原簇8（cluster of differentiation 8,CD8）和分化抗原簇56（cluster of differentiation 56,CD56）的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RD、分散的肝脏细胞及分离的肝陷窝细胞,用RT—PCR定量肝陷窝细胞的CD8和CD56mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝陷窝细胞的CD8和CD56蛋白．初步证实,分离的肝陷窝细胞中,CD8和CD56阳性细胞占95％以上;PH后各时间点分离的陷窝细胞的CD8和CD56的mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离陷窝细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用．     

大鼠肝星形细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（pafital hepatectomy，PH）模型，用两步灌流法分散肝脏细胞，用60％Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞，用结蛋白（desmin，DES）和波形蛋白（vimentin，vIM）的免疫组织化学定性、定位再生肝（regenerating liver，RD、分散的肝脏细胞及分离的肝星形细胞，用RT—PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA，用蛋白免疫印迹定量肝星形细胞DES和VIM．初步证实，分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95％以上，从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定，相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离肝星形细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点，值得采用．     

大鼠肝库普弗细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（partial hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞（Kupffer cell,KC）,用外胚层发育不良抗原2（ectodermal dysplasia antigen2,ED2）和溶菌酶（lysozyme,LYZ）的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的库普弗细胞,用RT—PCR定量库普弗细胞的ED2和LYZmRNA,用蛋白免疫印迹方法定量库普弗细胞的ED2和LYZ蛋白．初步证实,分离的肝库普弗细胞中ED2和LYZ阳性细胞占96％以上,从PH后各时间点分离的库普弗细胞ED2和LYZmRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定。表明改进的分离库普弗细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用．     

对虾白斑症病毒体内外感染的研究

WSSV可经注射、投喂或共居感染克氏螯虾和日本沼虾，病毒感染的组织匀浆物注射后发病很快，但蔗糖介质纯化的WSSV注射后发病较慢，Ficoll-400介质纯化的WSSV注射后发病时间介于前二者之间。中国对虾细胞内WSSV一般每个囊膜只含一个核衣壳，但此毒种经克氏螯虾反复增殖后，多粒包埋的病毒粒子明显增多。从病虾的每克鳃可提出约0．66mg的WSSV。含WSSV的血淋巴或组织匀浆液感染8种昆虫细胞后，传代2次仍未观察到病毒在其中复制。     

大鼠肝窦内皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2／3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60％ Percoll梯度离心和免疫磁珠分离肝窦内皮细胞（hepatic sinusoidal endothelial cell,SEC）,用分化抗原簇14（cluster of differentiation 14,CD14）和内皮素-1（endothelin-1,ET-1）的免疫组织化学定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的窦内皮细胞,用RT—PCR定量窦内皮细胞的CDl1和ET-1的mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量窦内皮细胞的CD14和ET-1蛋白．初步证实,分离的窦内皮细胞中CD14和ET-1阳性细胞占95％以上,从PH后各时间点分离的窦内皮细胞的CD14和ET-1mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定．表明改进的分离窦内皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用．     

大鼠肝卵圆细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除（parital hepatectomy,PH）模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心给合免疫磁珠分离方法卵圆细胞（oval cell,OC）.用卵圆细胞标志蛋白OC2和OV6的免疫组织化学方法定性、定位再生肝（regenerating liver,RL）、分散的肝脏细胞及分离的卵圆细胞,用RT-PCR定量卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量卵圆细胞的OC2和OV6蛋白.初步证实分离的肝卵圆细胞中,OC2和OV6阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的肝卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝卵圆细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用.     

甜菜高分子量核DNA的分离

研究了从甜菜中分离高分子量核DNA的方法．利用离心分离细胞核，经低融点琼脂糖块包埋、蛋白酶K原位裂解，结合低融点琼脂糖脉冲电泳去除淀粉制备高分子量核DNA．结果表明利用幼叶制备高分子量核DNA分子量高，更容易去除其中的淀粉；并且利用该方法得到的高分子量核DNA纯度高，适于部分酶切．     

大鼠正常肝和再生肝的肝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll密度梯度离心分离肝细胞,用免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝细胞中白蛋白(albumin,ALB)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-P),用蛋白免疫印迹方法定量肝细胞的ALB和G-6-P,用RT-PCR定量肝细胞的ALB和G-6-P mRNA.初步证实纯化的细胞中,ALB和G-6-P阳性细胞占96%以上;PH后各时间点纯化的肝细胞的ALB和G-6-P mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进后的分离肝细胞方法具有收率高、纯度高、活性好等特点.     

大鼠胆管上皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析

按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,在32%～90%Perco11密度梯度离心法的基础上进一步用免疫磁珠分离胆管上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC),用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transferase,GGT)和角蛋白19(cyto-keratin19,CK19)免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的胆管上皮细胞,用RT-PCR定量胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA,用蛋白免疫印迹定量胆管上皮细胞的GGT、角蛋白18(cytokeratin 18,CK18).初步证实分离的细胞中GGT和CK19阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离胆管上皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,方便适用.     

犬腺病毒2型抗原的制备及间接ELISA的建立

用MDCK细胞增殖犬腺病毒2型弱毒疫苗株,病毒培养上清液经差速离心和酒石酸钾密度梯度离心浓缩、纯化后作为诊断抗原,建立了犬腺病毒2型抗体检测的间接ELISA。确定最佳抗原包被量为0.168μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,作用时间为60 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1:2000,作用时间为60 min,底物作用时间为37℃,10 min。判定标准为S/P值≥0.351者判为阳性,S/P值≤0.318者判为阴性。该抗原不与犬瘟热病毒、犬细小病毒、犬波特氏杆菌等3种犬常见传染病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数小于15%,显示具有较好的重复性;检测血清样品56份,与病毒中和试验结果比对的符合率为93.75%。本研究结果为实现犬腺病毒感染监测,进行犬腺病毒流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。