黑曲霉糖化酶基因在酿酒酵母中的表达

从黑曲霉eDNA文库中筛选出糖化酶基因,并在酿酒酵母中进行表达．阳性克隆在发酵培养基中培养60h后,产生的糖化酶酶活力达到峰值为4．3U／mL．测定结果显示其糖化酶大小为1908bp,编码636个氨基酸残基组成的蛋白质．酶学性质分析显示该酶的最适反应温度为50℃,pH为5．0．经柱分离纯化其发酵上清液后,SDS-PAGE电泳方法,测得它的分子量大约为70kD,且条带清晰．     

枯草杆菌生产α-淀粉酶的研究

以枯草杆菌（BacillussubtilisBF7658）为实验菌株,以淀粉为主要原料,采用液态培养基摇瓶发酵,生产α-淀粉酶。结果表明：①在23℃至44℃内,培养基起始PH为自然PH,产酶最适培养温度为：37℃②枯草杆菌在淀粉液态培养基中37℃,振荡培养,其产酶最适淀粉水组成为：淀粉：水=75：100;③在最适温度37℃下,淀粉：水=75：100时,最适培养时间为36h。     

突变野油菜黄单胞菌α-淀粉酶基因在酿酒酵母中的整合表达

用定向进化的一种新方法,对野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris)的α-淀粉酶基因(XAMY)进行PCR体外诱变后获得了一个编码的酶活性提高的突变基因,将其克隆到由rDNA序列介导的酵母整合型表达载体pHBM368上,得到重组质粒pHBM368XA.将pHBM368XA转化酿酒酵母S.cerevisiae INVScⅠ,获得了整合型分泌表达α-淀粉酶的酵母重组菌株XA01.对选择的3个工程菌α-淀粉酶表达的稳定性进行了检测,结果表明在完全培养基中连续培养80代,淀粉酶的酶活性仍然保持稳定.在淀粉酶自身信号肽引导下,胞外分泌效率可达50%.     

在淀粉液态培养基中生产枯草杆菌α-淀粉酶的研究

以枯草杆菌（Bacillus subtilis BF7658）为实验菌株，以淀粉为主要原料，采用液态培养基发酵，生产α-淀粉酶．结果表明：（1）在23℃至44℃内，培养基起始pH值为自然pH，产酶最适培养温度为37℃；（2）枯草杆菌在淀粉液态培养基中37℃，振荡培养，其产酶最适淀粉与水组成比例为：75：100；（3）在最适温度37℃下，淀粉：水为75：100时，最适培养时间为36h．     

植酸酶分泌型酵母工程菌的构建

通过逆转录PCR从无花果曲霉总RNA中扩增出1.4-kb带信号肽的植酸酶基因，将其克隆到穿梭表示载体pYES2，构建了含有目的的基因的重组质粒pYPA1.用pYPA1转化酿酒酵母INVSc1菌株，成功地构建了能分泌活性植酸酶的工程菌株。该菌株的成功构建为饲料和食品添加剂以及解磷工程菌肥的开发奠定了基础。     

α-淀粉酶的超滤研究

对用超滤法浓缩分离α-淀粉酶过程进行了研究,讨论了料液浓度、膜面液体流速、操作压力等因素对超滤过程的影响。实验结果表明,用醋酸纤维素超滤浓缩α-淀粉酶的过程可用扩散模型来描述,超滤时宜控制压力在0.3～0.4MPa范围内。用超滤法能有效地浓缩α-淀粉酶,酶的总回收率大于90％。此外,通过实验建立了分离过程的传质模型,为超滤法浓缩α-淀粉酶的工业设计提供了依据。     

枯草杆菌α-淀粉酶的活性研究

研究了酸度、温度、钙离子对枯草杆菌α－淀粉酶活性的影响。研究表明，ｐＨ值对酶活影响较大，最适作用温度随底物种类及其浓度而异。研究确立了酶一步失活模型，指出在较高温度和长时间作用的条件下，应有钙离子的保护，以发挥α－淀粉酶的效能     

α-淀粉酶的研究与应用

介绍了α-淀粉酶的分离纯化和活力测定方法,耐高温α-淀粉酶和耐酸性α-淀粉酶的研究状况及α-淀粉酶在食品和医药工业中的应用,并指出α-淀粉酶具有很大的经济、社会和环境效益。     

α-淀粉酶的特性及其在淀粉粘合剂中的应用

对来自枯草杆菌的商品α淀粉酶水解淀粉的活力与温度、ｐＨ值的关系以及α淀粉酶对温度和化学药品如乙二胺四乙酸二钠以及苯酚的耐受程度等进行了研究。结果发现，用α淀粉酶水解淀粉的最佳反应温度为９０℃，反应的最佳ｐＨ值为６．０～６．２；反应完成后，用乙二胺四乙酸二钠在１００℃以上结束反应最为有效，它可以将残余酶活力降至最低，从而抑制粘合剂在贮存过程中的粘度降低     

α—淀粉酶的特性及其淀粉粘合剂中的应用

对来自枯草杆菌的商品α－淀粉酶水解淀粉的活力与温度ｐＨ值的关系以及α－淀粉酶对温度和化学药品如乙二胺四乙酸二钠以及苯酚的耐受程度等进行了研究，结果发现，用α－淀粉酶水解淀粉的最佳反应温度为９０℃，反应的最佳ｐＨ值为６．０～６．２反应完成后，用乙二胺四乙酸二钠在１００℃以上结束反应最为有效，它可以将残余酶活力降至最低，从而抑制粘合剂在贮存过程中的粘度降低。     

乙腈对α-淀粉酶催化活性的影响

乙腈对α-淀粉酶活性具有抑制作用，这种抑制作用随着乙腈溶液浓度的增大而增强。动力学分析表明乙腈的抑制类型为线性混合型抑制作用。紫外吸收光谱和荧光发射光谱分析显示酶的二级结构在乙腈作用下发生了变化，导致了酶活性的丧失。     

分泌载体pPSA18的构建及地衣杆菌淀粉酶在枯草杆菌中的表达和分泌

本文报道利用枯草杆菌噬菌体Spol 的启动子Spac Ⅰ,合成的解淀粉芽胞杆菌信号序列及枯草杆菌质粒PUB 18重组,构建分泌型表达载体并将地衣芽胞杆菌α-淀粉酶基因(缺失启动子及信号序列)引入构建的载体,获得重组质粒pPSA 18.将此质粒转化枯草杆菌QB1130(amy~-)感受态细胞,在含5μg/ml 卡那霉素及1%可溶性淀粉的LB 平板上筛选Km~r 及淀粉酶阳性的转化子.从阳性转化子中提取质粒,经酶切分析后重新转化枯草杆菌QB1130,得到的转化子全部都能向胞外分泌淀粉酶,证明构建的载体能在枯草杆菌中表达和分泌外源基因产物.     

α-淀粉酶固态发酵的研究

研究了固态法发酵生产α－淀粉酶的工艺,用麸皮作原料,其优化条件是:在接种量0.08%,拌水比1：0.6,pH6.0,培养温度37℃,葡萄糖浓度15%,发酵72小时,其酶活力可达1742u/g。与液态发酵相比,固态发酵能有效地克服分解代谢产物的阻遏作用。     

α-淀粉酶发酵条件的优化

利用米曲霉菌株液体发酵生产α-淀粉酶。产酶培养基优化试验表明：以面粉为碳源,黄豆饼粉为有机氮源,NaNO3为无机氮源。发酵配方如下（g/L）：面粉浓度为45,黄豆饼粉浓度为20,NaNO3 4,K2HPO4 3,MgSO4 1,FeSO4·7H20 0.01。产酶培养条件优化表明：最适发酵初始pH为7,装液量为40mL（250mL三角瓶）,接种量为10%,发酵温度为33.5℃,摇床转速为235rpm,培养时间为72h。此条件下,最终发酵水平达到1962.32U/mL,比初始时提高45%。     

温度和光照对心里美萝卜生殖生长期α-淀粉酶表达的影响

为了研究温度和光照在生殖生长期,对心里美萝卜α-淀粉酶活性和同工酶谱带的影响,对萝卜进行了不同种植时间以及不同过冬方式的处理,并在生殖生长期的不同时间对萝卜肉质根和叶片中的α-淀粉酶活性进行了测定,同时采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对不同时期各个器官中的α-淀粉酶同工酶谱进行了分析.研究结果表明,低温和光照增加α-淀粉酶活性,α-淀粉酶同工酶谱带存在器官表达差异和时间表达差异,并与光照和温度有关.由此结论萝卜生殖生长期α-淀粉酶的表达受温度和光照影响.     

α-淀粉酶的化学发光行为研究

利用α－ 淀粉酶水溶液直接催化Ｌｕｍｉｎｏｌ－ Ｈ２ Ｏ２ 的化学发光反应, 结合流动注射技术, 对α－ 淀粉酶的化学发光行为进行了探讨． 该反应属于快速的双电子氧化的一级反应, 从进样开始到出现最大发光值约需１０ｓ, ６０ｓ 后, 发光强度趋于零． 对不同温度的α－ 淀粉酶的扫描电镜图谱及热分析图谱考证了温度与α－ 淀粉酶的化学发光行为的关系．     

米曲霉α-淀粉酶的产生及其性质的初步研究

由中山大学生物学系微生物学教研室自行选育得到的一株米曲霉,在以家禽羽粉(或猪血粉)为主要氮源的培养基上,能向胞外分泌α-淀粉酶.产酶能力的最高纪录为每毫升发酵液含6×10~4蓝值下降单位(或300碘反应消失单位).本文报告该菌株的产酶模式和该酶的一些基本催化性质.     

复方促进剂对α-淀粉酶活力的影响

对α -淀粉酶的最适作用条件分别进行了测定 ,结果表明最适作用温度为 60℃ ,最适pH为 6 0 ,并在此基础上确定了复方促进剂 1 # (本课题组研制 )的最佳作用浓度。较系统地考察了复方促进剂 1 # 对α -淀粉酶活力的影响及对淀粉液化过程的影响。     

可降解淀粉酿酒酵母基因工程菌的构建及其生产应用

将酿酒酵母的rDNA片段,黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因表达盒及G418抗性基因表达盒重组进经过改造的质粒pSP72,构建酿酒酵母整合型质粒YIp4RGAn及YIp19RGAn,转化酿酒酵母实验室菌株GRF18、生产菌株JL108、SD和JM,获得能高效表达葡萄糖淀粉酶和分解淀粉的酿酒酵母基因工菌。Southern印迹分析证明,葡萄糖淀粉酶基因已整合进工程菌染色体。这些工程菌在含有20%淀粉的培养基中培养,产酒率都在11%以上。     

耐酸性α-淀粉酶的分离提取及性质研究

目的 以选育得到的耐酸性α-淀粉酶生产菌株黑曲霉Tx-78为出发菌株.对耐酸性α-淀粉酶的分离提取方法 及其性质进行研究.方法 通过液体发酵、减压浓缩及进一步提取得到粗酶制剂,对其最适宜反应温度、pH进行测定,对其稳定性及动力学性质进行研究.通过薄层层析对其水解淀粉的最终产物进行分析.结果 该酶最适宜反应pH为4.0,最适宜反应温度为70℃.当Ca2 浓度为7 mmol/,L时其作用最明显.动力学研究表明该酶的Km值为7.89 g/L.薄层层析结果 表明,该酶制剂水解淀粉最终产物为麦芽糖和葡萄糖.结论 该酶具有良好的耐酸性和耐热性.Ca2 对其有促进作用,能够实现在酸性条件下淀粉液化和糖化的同步进行,具有良好的应用前景.