将GNA基因导入莴苣（L.sativa）及其表达的研究

将含ＣａＭＶ３５Ｓ启动子的雪花莲凝集素基因置换Ｔｉ质粒载体ｐＢＩ１２１中的ＧＵＳ基因得到了ｐＢＩＧＮＡ质粒,将其导入农杆菌ＬＢＡ４４０４,得到ＬＢＡ４４０４菌株。     

根癌农杆菌的高效电激转化

利用电激法双元载体质粒ｐＢＩ１２１导入根癌农杆菌ＡＧＬ－１并获得较高转化效率。探讨了不同电激条件对转化效率的影响，并检测了ＣａＭＶ３５Ｓ启动子ＧＵＳ基因在根癌农杆菌中的表达。     

农杆菌介导GNA基因对水稻的遗传转化

在ｐＣＡＭＢＩＡ３３００质粒中插入带有ＲＳｓ－１启动子的ＧＮＡ基因,并利用农杆菌介导的遗传转化将其导入水稻的微不定芽受体,得到了再生植株。ＰＣＲ,Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ的检测结果初步证明ＧＮＡ基因已经整合到水稻的基因组中并得到表达。     

用根癌农杆菌介导法建立抗真菌病害油菜育种体系的研？…

用含β－１,３－葡聚糖酶和几丁质酶串联基因双价载体质粒ｐＢＬＧＣ的根癌农杆菌侵染甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ）带柄子叶和下胚轴的方法,初步建立了抗真菌病害油菜高效基因转化育种体系,研究了不同种类和不同深度伯激素对带柄子叶和下胚轴不定芽诱导的影响,试验结果表明卡那霉素（ｋａｎ）筛选,含６ｍｇ／６－ＢＡ的ＭＳ培养基中带柄子的叶的出苗率及绿苗分化率最高,分别为１００％和２５％,下胚轴在含１ｍｇ     

转多个抗真菌蛋白基因水稻植株的获得及其抗稻瘟病菌的初步研究

用基因枪法将水稻碱性几丁质酶（ＲＣ２４）基因、苜蓿葡聚糖酶（βＧｌｕ）基因、大麦核糖体失活蛋白（ＢＲＩＰ）基因和潮霉素（ｈｐｔ）基因同时导入籼稻品种（七丝软占）中,获得了７个潮霉素抗性再生系,Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证明２～３个抗真菌蛋白基因已整合到水稻基因组中．初步抗性鉴定表明Ｒ０代转基因水稻植株对稻瘟病菌的抗性有所提高     

类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体基因的克隆与鉴定

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术,从大肠杆菌ＴＢ１中扩增出类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体（ＳＬＴⅡｅ）的Ａ亚单位基因（ｓｌｔ－ⅡｅＡ）的９６０ｂｐ的编码序列和Ｂ亚单位基因（ｓｌｔ－ⅡｅＢ）的１０７ｂｐ的编码序列,将这两个ＰＣＲ扩增产物在ＥｃｏＲ１和ＢａｍＨ１位点分别克隆进ＰＵＣ１８质粒载体,并转化到大肠杆菌ＴＧ１中,再根据生内切酶酶切分析筛选到含有ｓｌｔ－ⅡｅＡ的重组质粒Ｐ１８ｓｌｔ－ⅡｅＡ和含有ｓｌｔ－     

大肠杆菌甜菜碱醛脱氢酶基因的测序及对烟草的转化

对利用聚合酶链式反应所克隆的大肠杆菌ｂｅｔＢ基因进行了序列测定,结果证实获得了该基因的克隆ｐＸＹ０１,ｐＸＹ０５以及亚克隆ｐＸＹ１１。将该基因置于ＣａＭＶ３５Ｓ启动子调控下,导入根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４中,叶盘法转化烟草,在含卡那霉素的选择培养基上筛选抗性芽,并进一步诱导小植株的再生。利用ＰＣＲ技术检测基因整合到烟草基因组中。     

MDVⅠ型疫苗株pp38基因同源物在家蚕细胞中的表达

用ＰＣＲ技术,从马立克氏病病毒ＣＶＩ９８８／Ｃ株感染的鸡胚成纤维细胞基因组ＤＮＡ中扩增出含起始密码子的ｐｐ３８基因同源物编码序列,在Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ中,ｐｐ３８基因探针能识别为该ＰＣＲ扩增片段。将该扩增片段克隆进ｐＵＣ１８质粒载体,并进行了全序列分析,进一步将该基因克隆入转移载体ｐＢａｓｃＰＡＫ８中,得到重组转移载体质粒,经酶切分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ确证了插入方向和正确性,以重组转移载体与经ＣｕｎⅠ酶切线性化的亲本病毒ＤＮＡ通过脂质体法共转染家蚕细胞,通过白斑结合点杂交,筛选出纯化的重组病毒,用间接荧光抗体试验检查重组病毒感染的家蚕细胞,可见感染细菌的胞浆及胞膜出现强荧光反应。     

复制酶基因介导的抗病毒烟草植株的研究

将构建的携带烟草花叶病毒（ＴＭＶ）５４ＫＤ蛋白基因及黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）３’端缺失０．９Ｋｂ的１．６Ｋｂ片断复制酶基因植物表达载体ｐＢＩＣＴ，导入根癌农杆菌３１１ＳＥ系，用叶圆盘法转化烟草，在含有卡那霉素的选择性培养基上诱导生芽、生根，得到２８株成活苗．移入大田后，随机挑选４．株植物，提取植物总ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测，结果４株植物中都有复制酶基因的整合，而未经转化的对照组植物则没有．转基因植株在大田试验中表现了良好的抗烟草花叶病毒及黄瓜花叶病毒能力．     

大麦黄矮病毒抗性基因的Ti质粒构建

通过酶切、连接、转化等技术,将大麦黄矮病毒抗性基因制酶基因ＯＲＦ２插入Ｔｉ质粒ｐＧＡ４８２的Ｔ－ＤＮＡ区,从而提供了新的目的基因转化小麦的农杆菌／质粒系统。     

柳树NAC基因的克隆与表达模式分析

【目的】研究柳树重要抗逆转录因子基因家族,为揭示柳树抗逆分子机制提供理论依据。【方法】以‘苏柳2345’的转录组测序数据为基础,克隆了柳树NAC家族,并分析其序列结构、组织表达特异性以及不同胁迫条件下的表达模式。【结果】克隆的两个柳树NAC转录因子基因分别命名为SlNAC1和SlNAC2。生物信息学分析表明:SlNAC1序列全长为1 126 bp,编码产物含343个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于细胞核;SlNAC2序列全长为1 139 bp,编码产物含291个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于叶绿体。两个基因均具有典型的NAM结构域及A、B、C、D、E 5个亚结构域,还包括共同的LPPG、YPNG 和DEE保守基序及NAC抑制结构域。系统进化树分析显示, SlNAC1基因与木薯亲缘关系最近,SlNAC2基因与茄子亲缘关系最近。定量PCR结果显示SlNAC1和SlNAC2均在叶片表达,根中没有表达,为叶片特异性转录因子。定量PCR结果显示SlNAC1基因在脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)处理24 h后显著上调,SlNAC2基因在聚乙二醇(PEG)、ABA和GA胁迫后显著上调。【结论】柳树SlNAC1基因在非生物胁迫下表达较为稳定,受ABA和GA胁迫诱导;SlNAC2受干旱、ABA和GA胁迫诱导,受影响明显高于SlNAC1,不受乙烯剂(ETH)胁迫影响。推测SlNAC1和SlNAC2参与GA、ABA信号传导,可能不参与ETH的信号途径。     

一种新型基因枪的研究

为研制一种适应各种场合 ,尤其是在野外操作的基因枪 ,满足将目的基因导入动植物细胞 ,使之稳定表达并遗传 ,实现培育或改良新的优良品种。以压缩弹簧为动力 ,运用撞击发射原理 ,对裹着基因的微粒进行加速 ,使之获得足够的动能 ,去射击靶细胞。弹簧预压力不同 ,微弹的动能随之不同 ,可适应不同细胞的要求。利用所设计的装置 ,在常压下将GUS基因导入番茄叶片细胞 ,经检测 ,得到表达 ;将质粒psv- luc2 0转入小鼠的皮肤、腹部肌肉和肝脏内 ,也得到表达。实验表明 ,该构思是可行的 ,实验装置可以在常压下操作 ,能在各种条件下使用     

四种原发恶性肿瘤中p16基因的缺失和突变研究

采用双重PCR、PCR－SSCP和序列分析方法,对31例非小细胞肺癌、15例食管癌、12例胃癌、9例乳腺癌共68例原发肿瘤组织标p16进行在肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌的缺失率分别为16％（5／31）、,20－％（3／15）,8％（1／13）,0（0／9）,2例突变：一例食管癌在第130位氨基酸密码由AGA变为ATA,编码的氨基酸由精氨酸变为异亮氨酸,一例肺癌第140位氨基酸的CGG处的C缺失,导致移码突变,p16基因在人类恶性肿瘤发生发展中起重要作用,是多肿瘤抑制基因。     

GCK2软件在p53基因克隆过程中的应用

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的押癌基因，通过克隆p53基因对其表达调控进行研究。利用分子生物学软件GCK2．0对整个克隆过程进行分析，制定克隆策略，通过测序鉴定结果，得到了舍目的基因p53cDNA全序列的pTRE—p53重组质粒。通过GCK2．0分析，减少了基因克隆的盲目性，提高了工作效率。     

Progress of gene targeting in mouse

Gene targeting is a powerful approach of studying the gene function in vivo. Specific genetic modifications, including simple gene disruption, point mutations, large chromosomal deletions and rearrangements, targeted incorporation of foreign genes, could be introduced into the mouse genome by gene targeting. Recent studies make it possible to do the gene targeting with temporal and spatial control.     

GCK2软件在p53基因克隆过程中的应用

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因,通过克隆p53基因对其表达调控进行研究。利用 分子生物学软件GCK2.0对整个克隆过程进行分析,制定克隆策略,通过测序鉴定结果,得到了含目的基因 p53cDNA全序列的pTRE-p53重组质粒,通过GCK2.0分析,减少了基因克隆的盲目性,提高了工作效率。     

Inheritance and expression of multiple disease and insect resistance genes in transgenic rice

2—3 anti-fungal disease genes are coinserted with hygromycin phosphotransferase in the same vector. Two insecticidal genes and PPT acetyl transferase genes are placed in another one. The vectors are co-delivered to rice embryonic cellus tissue at a molar ratio of 1︰1 using the particle gun method. 55 independent regenerated lines have been obtained through screening for hygromycin resistance. Of these, 70% transgenic plants harbor 6—7 foreign genes. The genes on the same vectors are always co-delivered to rice plant. Northern blot analysis has indicated that the multiple foreign genes give stable expression. In the 6 transgenic plants carrying 6—7 foreign genes, multiple foreign genes tend to integrate in 1 or 2 genetic loci. Progeny segregation is consistent with Mendel’s 3︰1 segregation law. 8 homozygous R₁ transgenic plants harboring 2—3 anti-fungal and 2 insecticidal genes are selected from large number of transgenic progeny screening for hygromycin and Basta resistance.     

抗菌肽的研究及其在植物基因工程中的应用

抗菌肽是一类新型的抗菌物质,在低等生物到高等动植物有广泛分布．抗菌肽及人工合成的抗菌肽基因在植物体中可以被表达并具有杀菌活性,能够应用于植物抗病工程方面,从而提高植物的抗病性．本文简要介绍了抗菌肽的发现、分类、结构、作用机理、基因结构和基因改造,以及抗菌肽在植物基因工程中的应用．