氨基葡萄糖治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎研究进展

氨基葡萄糖是葡萄糖的一种天然衍生物,是糖蛋白和蛋白聚糖的主要成分,可通过多种生理途径在细胞内合成.近年研究显示,氨基葡萄糖可作为免疫抑制剂和免疫调节剂在治疗多发性硬化（MS）及其动物模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）方面有一定的疗效.氨基葡萄糖可引起Th表型由Th1向Th2细胞转化,显著表现为TNF-α,IFN-γ,IL-17,IL-1分泌减少,IL-5和IL-10分泌增多.氨基葡萄糖通过不同给药方式,如口服、腹腔注射、静脉注射等对EAE都有一定治疗作用,具有低或无毒性、服用安全等优点.     

他汀类药物在多发性硬化和实验性自身免疫性脑脊髓炎治疗中的应用

大量动物实验证实,他汀类药物可抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE),临床证据也表明他汀类药物能够在多发性硬化(MS)发病的免疫环节中发挥治疗作用,他汀类药物治疗MS的应用前景较为广阔.     

C57BL/6小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型的建立

目的 为更好地研究多发性硬化症(MS)的发病机理、开发具有良好效果的MS治疗药物,建立起能高度模拟人类多发性硬化症发生发展的小鼠模型则显得尤为必要且具有极高的应用价值。本文使用已广泛应用的标准化C57BL/6小鼠作为实验对象,成功地构建了实验性变态反应性脑脊髓炎模型(EAE)。此模型为研究人类多发性硬化症的发病机理及开发相关临床治疗药物提供了良好的小鼠模型。方法 C57BL/6雄性小鼠20只,分为2组。EAE组10只,皮下注射混匀的弗氏不完全佐剂与MOG53-58及结核分枝杆菌的悬浊液,同时分别在day0和day2腹腔注射百日咳毒素0.2μg/只;正常对照组10只,仅注射生理盐水。采用HE染色方法观察小鼠组织学变化;免疫组织化学方法进一步研究小鼠病理变化。结果 从抗原免疫后第10天开始EAE组小鼠陆续发生EAE临床症状且发病率达到100%,而正常对照组小鼠未发生任何EAE临床症状。组织病理学结果分析显示,EAE组小鼠脊髓及脑组织中出现大量炎性细胞浸润且脱髓鞘严重。结论 本实验成功构建的EAE小鼠模型病程稳定且发病率高,可用于MS机制研究及MS防治药物的筛选。     

雌二醇对EAE大鼠ICAM-1和INF-γ表达的影响

目的探讨雌二醇对去卵巢后EAE大鼠的免疫抑制作用及其机制.方法制备去卵巢后10 d的EAE大鼠模型,随机分为EAE组、E2治疗组和佐剂组.E2治疗组在免疫后（post-inoculation,p.i.）0～5 d每日肌注E2（250μg/kg）一次.在p.i.6,8,10,12,14,16 d处死动物,用免疫组化技术检测脑和脊髓不同部位ICAM-1,IFN-γ的表达,并对EAE组ICAM-1和IFN-γ进行相关分析.结果与EAE组相比较,在p.i.6～12 d,E2治疗组血清E2浓度升高,临床症状评分降低,体重减轻减少,发病率较低,上述差异均有统计学意义;在p.i.10～16 d,E2治疗组ICAM-1与IFN-γ的表达降低,且具有统计学意义.EAE组ICAM-1与IFN-γ表达呈显著正相关性.结论E2能够有效抑制EAE,其抑制机制与E2下调ICAM-1,IFN-γ的表达进而促使Th细胞发生转分化有关。     

雌二醇对大鼠EAE血-脑脊液屏障及TGF-β表达的作用

目的：探讨雌二醇（E2）对大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）血脑屏障及转化生长因子-β（TGF-β）表达的作用。方法制作摘卵巢后10d的大鼠EAE模型,随机分成E2组、EAE组、佐剂对照组。E2组自免疫后（p.i.）0～8d每日肌注E2一次。测定各组于不同时间的症状评分、E2浓度、脑脊液与血清白蛋白含量的比值（QA）,依据QA评估血-脑脊液屏障（BCB）的破坏。在p.i.8～17d取脑和脊髓做髓鞘染色;应用免疫组化的方法测量各组TGF-β的表达。结果p.i.8～14dE2组血清E2浓度较EAE组升高;症状评分E2组低于EAE组;发病率E2组低于EAE组;P.i.8～17dE2组QA峰值低且出现时间较EAE组推迟;P.i.8～17dE2组TGF-β表达较EAE组增高。结论E2能够有效抑制EAE,其抑制机制与E2保护BCB的结构和功能,以及增加TGF-β的表达有关。     

黄芪糖蛋白在多发性硬化中的研究进展

多发性硬化(Muliple sclerosis,MS)是发生于中枢神经系统的以炎细胞浸润、髓鞘脱失和轴突变形为主要改变的自身免疫性疾病,至今尚无治愈手段。一般认为黄芪具有增强机体免疫功能的作用,但黄芪中黄芪糖蛋白则具有免疫抑制作用,因此近年来黄芪糖蛋白被用于MS的干预研究。研究表明黄芪糖蛋白主要通过干预免疫调节、保护血脑屏障、抑制细胞黏附分子和趋化因子的表达以及对Rho/Rock途径的影响等对MS及其动物模型——实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)发挥作用。本文就此做一综述,旨在探讨黄芪糖蛋白在MS干预中的作用机制,为临床治疗MS提供一种新的思路。     

Rock抑制剂-Fasudil对EAE外周免疫的调节作用

目的探讨Rock抑制剂Fasudil对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病起始环节的外周免疫调节机制。方法将雌性C57BL/6小鼠分为CFA组、EAE组和Fasudil组。Fasudil组动物免疫后第7 d腹腔给予Fasudi(l50mg/kg.d),连续给药14 d。免疫后隔天观察各组小鼠临床评分和体质量变化。在免疫后28 d处死动物,取脊髓进行HE染色和髓鞘染色,制备脾脏单个核淋巴细胞(MNC),测定细胞增殖和细胞因子IL-4,IL-10,IL-1β,IFN-γ的含量,流式细胞术观察CD4,CD25调节性T细胞的比例,部分脾脏组织和MNC涂片行免疫组化荧光染色观察Rock的表达。结果Fasudil在EAE外周免疫组织和细胞通过下调Rock的表达,抑制Rock的激活,明显改善EAE的临床症状评分(P<0.05);减轻EAE外周炎性细胞向中枢的浸润,缓解神经髓鞘的脱失;经Fasudil干预可以下调EAE外周特异性MOG35-55反应性T淋巴细胞增殖能力,下调炎性细胞因子IFN-γ和IL-1β水平,升高保护性细胞因子IL-10水平,促进CD4,CD25调节性T细胞比例增加。结论 Rho/Rock信号通路的激活在EAE的发病中起着重要作用,应用Rock抑制剂--Fasudil抑制EAE免疫病理过程中外周免疫细胞激活这一起始重要环节,减少炎性细胞的中枢浸润,缓解EAE的临床症状。     

盐酸法舒地尔抑制小鼠EAE作用及机制研究

目的探讨盐酸法舒地尔（Fasudil hydrochloride）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）的抑制作用和可能的机制.方法按平均体重将C57BL/6雌性小鼠分为EAE组、盐酸法舒地尔治疗组和佐剂组,用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽（MOG35-55）诱导EAE模型,佐剂组以等量生理盐水代替.治疗组于免疫后6d开始按50mg（/kg&#183;d）腹腔注射盐酸法舒地尔,EAE组和佐剂组用等量的生理盐水作为对照.比较各组小鼠的各种表现,并进行症状评分.免疫后18～20d取各组小鼠,制备脾脏淋巴细胞悬液,用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况,用ELISA法检测并比较各组淋巴细胞培养上清液中细胞因子INF-γ、IL-17、IL-10的水平.结果盐酸法舒地尔能够显著改善EAE的症状,减轻中枢神经系统（CNS）炎性浸润及髓鞘脱失等病理变化,并且可抑制脾脏淋巴细胞分泌INF-γ、IL-17（P〈0.05）,促进IL-10的分泌（P〈0.05）.结论盐酸法舒地尔可以有效抑制小鼠EAE,这种抑制可能与其对脾淋巴细胞中INF-γ、IL-17表达的下调和IL-10表达的上调作用有关.     

黄芪糖蛋白抑制小鼠EAE的作用研究

目的探讨黄糖蛋白对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠的抑制作用和可能的机制。方法将18～23 g体质量C57BL/6雌性小鼠随机分为EAE组、黄芪糖蛋白(HuangqiGlycoprotein,HQGP)治疗组和佐剂组,EAE模型使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55多肽(MOG35-55)对小鼠进行免疫,佐剂组用生理盐水代替。治疗组于免疫后第6 d按每天30 mg/kg腹腔注射HQGP,佐剂组和EAE组则注射等量生理盐水。观察各组发病情况,同时进行临床症状评分。在免疫后第20 d分离脾脏,用MTT法检测淋巴细胞的增殖情况,用ELISA法检测各组淋巴细胞上清液中细胞因子INF-γ、IL-1β、IL-10和IL-4的水平。结果 HQGP能够显著改善EAE的发病,减轻炎性浸润,并且可抑制MOG35-55诱导的脾淋巴细胞增殖反应(P<0.01)及INF-γ和IL-1β分泌(P<0.05),促进IL-10的分泌(P<0.05),而对IL-4的分泌没有显著性影响。结论 HQGP能显著改善EAE小鼠的症状,可能与减少炎性细胞的浸润有关。     

脑栓通颗粒对实验性脑缺血的保护作用

目的研究脑栓通颗粒对实验性脑缺血的保护作用。方法采用小鼠断头后张口喘气的方法,观察脑栓通颗粒对小鼠耐缺氧的影响;常压耐缺氧法考察脑栓通颗粒的抗缺氧作用;采用尾静脉注射伊文思蓝溶液,测定脑内的伊文思蓝含量,观察脑栓通颗粒对小鼠血脑通透性的影响;采用结扎大鼠双侧颈总动脉的方法,考察脑栓通颗粒对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。结果脑栓通颗粒能明显延长小鼠断头后喘气时间,对延长小鼠常压耐缺氧下存活时间的效果不明显;脑栓通颗粒中剂量组和高剂量组能明显增加小鼠脑内的伊文思蓝含量,增强血脑通透性;脑栓通颗粒能明显减轻缺血再灌注后大鼠的脑组织含水量,改善水肿状态。结论脑栓通颗粒对实验性脑缺血有保护作用。     

α-硫辛酸治疗糖尿病周围神经病变疗效研究

目的探讨α-硫辛酸治疗糖尿病周围神经病变的临床疗效.方法对收治的330例糖尿病周围神经病变患者进行回顾分析,随机分为2组,每组165例,观察组给予α-硫辛酸治疗,对照组给予甲钴胺治疗,比较两组治疗效果、治疗后神经传导速度改善情况和不良反应.结果观察组总有效率为92.7%,对照组总有效率为77.6%,比较差异具有统计学意义(P0.05);两组治疗前肌电图神经传导速度测定比较无统计学意义(P0.05);治疗后观察组肌电图神经传导速度(51.39±4.61)m/s较对照组(47.08±4.35)m/s有显著提高(P0.05);两组患者均完成治疗,无不良反应发生.结论α-硫辛酸可有效改善患者的临床症状和体征,改善神经传导速度,且安全性高,是治疗DPN的有效方法.     

全颅放疗对大鼠血脑屏障LRP和P—gP表达的影响及临床意义

目的探讨不同剂量放射线对大鼠血脑屏障上肺耐药相关蛋白fLRP）、多药耐药蛋白（P-gp）表达的影响影响及其其临床意义。方法将50只成熟雄性Wister大鼠随机分为5组,分别采用0,10,20,30,40Gy60Coγ／射线进行全脑常规分割外照射,1次,d,2Gy／次,5次／周。于完成预定照射剂量后16h断头取脑,采用免疫组化法检测各组大鼠血脑屏障上LRP和P—gP的表达情况。结果0Gy组LRP和P—gP表达均较强,随着照射剂量的增加,LRP表达呈现逐渐下降趋势,其中20Gy下降最明显,30,40Gy组下降幅度减弱,40Gy时表达最弱。20,30,40Gy组和对照组比较差异有显著性;10Gy组与20,20,30,40Gy组比较差异有显著性;其余各组比较无统计学差异。P—gP的表达也随着照射剂量的增加呈现减弱的趋势,20Gy降低幅度最大,30Gy时达到最低值,40Gy时略增强。对照组分别与20,30,40Gy组相比较,差异有显著性;10Gy组与20,30,40Gy组比较,差异有显著性;其余各组比较无差异。结论一定剂量的放射线作用于大鼠血脑屏障之后,其上的耐药相关蛋白表达均可降低,20Gy时降低最明显,此时配合化疗药物效果最佳。     

α-硫辛酸对小牛血管细胞氧化损伤的保护作用

为了研究α-硫辛酸（lipoic acid, LA）对心血管氧化损伤的保护作用，本研究以离体培养的小牛主动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞为实验材料，探讨了LA 对这两种细胞氧化损伤的影响.结果表明，在H2O2胁迫下，LA可以剂量依赖性地提高细胞内的超氧化物歧化酶（SOD）活性，抑制细胞内过氧化产物丙二醛（MDA）的产生，提示LA对小牛主动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞氧化损伤有保护作用.本研究为LA的保健和药用价值开发,特别是对LA在保护心血管免受氧化损伤的功效的研发，提供了自由基生物学实验依据.     

硫辛酸对大鼠心脏缺血再灌早期肌酸激酶双相释放的保护作用

用Langendorff法灌流大鼠离体心脏,平衡10min,全心缺灌10min。于再灌3min内每15sec收集一次冠脉流份,测定肌酸激酶活性(U/L),作为心肌细胞损伤的指标,以研究自由基清除剂硫辛酸对缺血再灌损伤的保护作用。用无基质Krebs-Henseleit(K-H)溶液灌流心脏作为对照,再灌期CK呈双相释放,其第Ⅰ峰比平衡期正常值高6倍,第Ⅱ峰高3倍。再灌前和再灌后在无基质;K-H溶液中加入硫辛酸(3.5×10~(-5)mol/L),二者皆能显著使CK总释放量下降40％—45％。使第Ⅰ峰值下降39％—47％,并使第Ⅱ峰消失。说明预防给药和治疗给药效果基本相同。含有11.1mmol/L葡萄糖的K-H溶液灌流也有同样效果。如在有基质溶液中加入硫辛酸,二者并用效果更加显著。与单用葡萄糖的效果相比较,加硫辛酸组CK总释放量和第Ⅰ峰值皆进一步下降,下降率分别为葡萄糖组的27％和31％。此外,硫辛酸对本模型再灌期心律失常发生率也有明显保护作用,在3min再灌期内除有少数期前收缩外室颤发生率为零。硫辛酸对缺血再灌损伤妁保护作用与它的自由基清除机制有关。     

势垒边界对共振透射的影响

利用转移矩阵方法讨论势垒中粒子概率振荡峰的个数与入射能量、势垒宽度的关系及其势垒边界对共振透射的影响。计算结果表明边界只是改变了共振透射的位置,并没有改变振荡峰的个数与入射能量、有效势垒宽度的关系。     

乌索酸与齐墩果酸对小鼠实验性肝损伤保护作用的比较

为了研究乌索酸的保肝作用及其特色,分别建立四氯化碳(CCl4)、D-氨基半乳糖胺(D—GaIN)、卡介苗加脂多糖(BCG—LPS)及异硫氰酸-1-萘酯(ANT)诱导小鼠肝脏损伤模型,以测定血清谷丙氨酸转换酶(ALT)、谷草氨基酸转换酶(AST)、总胆红素(113)和肝组织丙二醛(MDA)含量为指标,观察乌索酸对肝脏损伤的保护作用,并与抗肝炎药物齐墩果酸进行比较,结果表明：30mg／kg乌索酸均能显著降低CCl4、D—GalN、BCG—LPS、ANIT致肝损伤小鼠血清ALT和肝MDA值,而30mg,／kg齐墩果酸对CCl4、BCG—LPS肝损伤小鼠降ALT效果不及乌索酸;30mg／kg乌索酸能非常显著地降低ANIT致肝损伤小鼠血清TBLL含量,而30mg／kg齐墩果酸与联苯双酯降血清TB作用不明显,提示：乌索酸具有明显的降酶、退黄保肝作用。