产蛋白酶菌株Bacillus subtilis GS-1发酵条件优化及蛋白酶水解应用初步研究

 利用Plackett-Burman (PB)试验和相应面优化方法对枯草杆菌GS-1菌株发酵产蛋白酶的条件进行优化,以期获得高活性的蛋白酶发酵液。同时,将发酵所产蛋白酶用于蛋白水解实验,以进一步考察蛋白酶的水解特性。首先,通过PB试验,筛选出3个影响菌株发酵过程中蛋白酶活力的主要因子(氯化铵、初始pH值及培养温度)。其次,通过响应面优化法,进一步探讨各参数之间的相互关系并最终拟合得出发酵产酶活的方程。结果表明,在氯化铵 (3.768 g/L), 初始pH (5.6) 以及培养温度 22.4 ℃的条件下,发酵液中蛋白酶的最高酶活力能达到372.814 U/mL。水解试验结果表明：相对于植物来源的蛋白,该蛋白酶粗提物对于动物来源的蛋白具有较大的水解偏好型。该蛋白酶粗提物对于由谷氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或精氨酸所组成的化学键有较强的水解偏好性。以上结果表明：该菌株发酵所产的蛋白酶在蛋白水解加工行业中具有潜在的开发应用价值。     

洗毛用枯草芽孢杆菌产蛋白酶发酵条件优化

 用响应面法(Response Surface Methodology,RSM)对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）液体发酵产蛋白酶的发酵条件进行快速优化。首先运用逐因子试验确定Bacillus subtilis产蛋白酶的最佳碳源和氮源分别为糊精和玉米粉。在此基础上,通过Plackett-Burman设计对影响其产酶相关因素进行评估,并筛选出具有显著效应的3个因素：糊精、玉米粉和酵母膏。在用最陡爬坡试验逼近以上3个因子的最大响应区域后,采用RSM法对以上3个显著因子的最佳水平范围进行研究,通过对二次多项回归方程求解,确定其最优发酵条件为：糊精11.568g/L,玉米粉22.462g/L,酵母膏10.202g/L,NaCl 5g/L。初始pH值为7.0,37℃培养48h。最终优化后的酶活达到3281.79U/mL,比初始酶活2463.95U/mL提高了33.19%,证明RSM法优化洗毛用Bacillus subtilis产蛋白酶发酵工艺是可行的。     

响应面法优化黄杆菌YK-5产卡拉胶酶的发酵条件

采用响应面法对黄杆菌YK-5产卡拉胶酶的发酵条件进行了优化．首先利用Plackett．Burman设计从8个因子中筛选出3个影响YK-5产酶的主要因素,分别为：培养温度、培养基起始pH和培养基中卡拉胶含量．然后进行最陡爬坡试验逼近最佳响应面区域,最后通过Box．Behnken设计和响应面分析得到最适条件：培养温度28．17℃,培养基起始pH值8．77和培养基中卡拉胶含量3．71g／L．在最适条件下测得的酶活为215．72U／mL,是优化前的2．2l倍．     

响应面法优化菌株产淀粉酶培养条件的研究

在单因素试验的基础上,采用响应面分析法对高产淀粉酶菌株的培养条件进行了优化.通过单因素试验,评价了不同温度、pH值、时间、碳源浓度、氮源浓度和摇床转速等6个因素对菌株产淀粉酶含量的影响.对蛋白胨质量分数、玉米粉质量分数、pH值和温度等主要影响因素进行中心组合设计,响应面分析结果为pH值对产酶影响显著,最佳培养条件为pH值为6.5,玉米粉质量分数为0.3%、蛋白胨质量分数为0.5%、培养温度为35℃、培养时间为30 h.     

一株高温蛋白酶高产菌株产酶条件的优化

对一株高温蛋白酶高产菌株枯草芽孢杆菌BY25的发酵培养基组成与产酶条件进行了优化。正交试验结果显示培养基中各因子对产酶影响从高到低为:豆饼粉、葡萄糖、硫酸镁、麸皮、磷酸氢二钠、氯化钙。在此基础上进行培养基组成优化,将豆饼粉、麸皮混合氮源改为以豆饼粉为单一氮源进行蛋白酶发酵。单因素试验发现,在单一氮源培养条件下,培养基中各因子对产酶影响从高到低依次为:豆饼粉、葡萄糖、氯化钙、磷酸氢二钠。除微量氯化钙外,金属盐,尤其是金属硫酸盐的添加对产酶有显著抑制作用。此外,培养初始pH和培养时间对产酶有显著影响,接种量也有一定影响。通过绘制120 h产酶曲线发现,BY25产酶曲线为双峰,产酶曲线顶峰出现在发酵后72 h,优化后BY25发酵培养基各组分添加量为豆饼粉60 g/L、葡萄糖60 g/L、氯化钙 0.5 g/L、磷酸氢二钠 4 g/L,接种量为4.5%～5%,初始培养pH为8.0。优化产酶培养基和产酶条件后,发酵液酶活力可达到101.1 μmol/(min·mL)。     

云芝产漆酶发酵条件的研究

研究了培养基初始pH值、通气量、温度、表面活性剂、诱导剂、金属离子对云芝(Trametes versicolor)HS-03产漆酶发酵条件的影响.研究发现培养基的初始pH、培养温度、表面活性剂、诱导剂和金属离子等因子对该菌漆酶产量均有明显的影响.结果表明,云芝摇瓶产漆酶的最佳培养条件为培养基初始pH为3.5,转速150 r/min,培养温度28℃,另加1 mL/L吐温-80,1 mL/L愈创木酚,终浓度为0.5 mmol/L的Cu2 .在该条件下,该菌的漆酶酶活力达到291 U/L,比优化前提高了8倍,同时产酶高锋也提前了5 d.     

响应面法优化银鱼多肽的酶解工艺研究

为了提高银鱼的附加值,采用蛋白酶水解其蛋白制备银鱼多肽.以水解度为优化指标,确定酸性蛋白酶为最佳用酶,研究了温度、pH、料液比和加酶量对水解度的影响.用Design-Expert 8.0软件进行响应面最佳条件优化,确定最适水解条件为:41℃,pH 4.0,料液比1∶52,酶解时间6h和加酶量2.3%.优化后水解度达到15.13%,为银鱼的综合利用提供了一种新方法.     

响应面法优化章鱼内脏酸性蛋白酶提取条件

首先,以章鱼内脏为原料,通过单因素实验,分析pH值、温度、料液比、抽提时间对提取粗酶液中酸性蛋白酶活性的影响.然后,通过响应面法优化,得到多项式拟合回归方程,并对酶活的预测值和实测值进行验证.最后,测定粗酶液中蛋白酶的种类和活性.结果表明:酸性蛋白酶的最优抽提条件为pH值5.0、温度30 ℃、时间2.5 h、料液比1∶5,由此得到的粗酶液酶活为917.2 nkat·g^-1,对应比活为28.5 nkat·mg^-1;响应面回归方程计算的预测值与实际值位于误差范围内,说明该方程具有预测作用;粗酶液中,蛋白酶大部分为酸性蛋白酶,占总蛋白酶76.0%.     

响应面法优化Anoxybacillus sp.YIM 342产耐高温α-淀粉酶发酵条件

 利用响应面法对Anoxybacillus sp.YIM 342产耐高温α-淀粉酶的液体发酵培养条件进行优化.在单因素试验的基础上,首先应用Plackett-Burman实验设计筛选在发酵过程中对产酶量影响较大的因素,然后利用中心组合设计确定对产酶量影响较大因素的最佳水平.筛选结果表明,淀粉和CaCl₂ 的浓度以及发酵时间对产酶量有显著的影响;最佳发酵条件为:淀粉11.73 g/L,CaCl₂ 0.65 g/L,发酵时间为37.27 h,胰蛋白胨5 g/L,MgSO₄ 0.5 g/L,起始pH值6.5,转速200 r/min,温度55℃,在此条件下产酶量达到了62.71 U/mL,较初始产酶量提高了3.25倍.     

一株高产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及发酵条件的优化

为了获得碱性蛋白酶高产菌株,从采集的海泥中筛选得到20株具有一定产碱性蛋白酶能力的菌株,经过复筛得到5株产酶能力较高的菌株,其中菌株SDL9产碱性蛋白酶能力强、pH耐受范围广。考察了培养基初始pH值、培养温度、培养时间、装液量、接种量等单因素对菌株SDL9产酶能力的影响,然后进行正交试验分析,得出该菌的较佳发酵条件为pH值9.0、发酵时间18 h、20 mL培养液/50 mL三角瓶和接种量3%。影响产酶的强弱顺序为:pH值、培养时间、接种量、装液量,菌株SDL9在较佳发酵条件下的发酵液的最大酶活力达197.58 U/mL。本研究表明从秦皇岛海域可以获得碱性蛋白酶高产菌株,丰富了菌种资源。     

关于农业区划地图集中的统一协调问题

图集的统一协调,对图集质量有很大影响。本文是作者在编制北京市农业区划地图集的实践基础上,根据地图信息传输论的观点,对农业区划地图集的统一协调的内容及方法进行了探讨。试图总结编制这类图集的统一协调模式,以供读者编图时参考。     

民间法正义观的转型

研究了国家法的抽象正义观与民间法的情理正义观,认为西方国家法的抽象正义观与东方民间法的情理正义观存在实质的不同,原因在于思维方式、超验与经验传统、政治结构的差别。在现代法治理念下,传统民间法所代表的正义观将向混合正义观转型,西方法治所代表的国家法抽象正义观是其骨架。     

关于一维非自治时滞系统点态退化一例

给出了一维非自治时滞系统点态退化的一个例子,拓宽了该领域的研究。     

十二烷基苯硝化选择性的测定

利用对位异构体的对称性由核磁共振氢谱测定了工业十二烷基苯在硝硫混酸中的硝化选择性，发现一硝化产物中对位异构体的比例为７５％￣８０％。以月桂酸和苯为原料，经氯化、酰化和还原合成了正十二烷基苯。在同样条件下研究了正十二烷基苯的硝化，由核磁共振氢谱和气相色谱分析，发现一硝化产物中对位异构体的比例仅为６０％。根据空间位阻效应，对结果进行了讨论，并与甲苯，乙苯，异丙苯等短链烷基苯的硝化结果进行了比较。     

YBCO掺杂效应研究

介绍了YBCO掺杂的基础知识,总结了YBCO各个位置采用典型元素掺杂而导致的超导电性和结构的变化,阐述了掺杂对YBCO的重要影响,并简介了当前YBCO掺杂效应研究中的几个热点问题.     

A_5的一类12阶子群的构造

由于有限群的Lagrange定理的逆不成立,因此,n较大时要确定n次交代群An的所有子群或对An阶数的每一个正因数,确定是否存在这个阶数的子群是较困难的问题.文章通过对5-循环置换各次方幂的计算及其研究,构造出了A5的5个12阶子集,并证明了每一个子集都是A5的12阶子群,最后对A5的部分阶的子群做了总结.     

高频机组基础振动检测分析

为了找出诱发高频机组基础不良振动的原因，从基础计算模型方面对基础激励与响应进行了分析，以两个高频机组基础为动测实例，经模态分析得出钢筋混凝土构架式基础竖向1阶振动与电机产生共振；应用功率谱法对动力机组及基础平台进行动测，得出平台异常响应频率66Hz为水泵工作频率，调整机器的工作频率可避开不良振源影响，达到明显的减振效果。由此而知，动力机器基础出现不良振动时，不可盲目改变结构的动力特性，应在机器不同工况比如：停机、起机及正常转速下，对机器及基础进行动测并对振动信号进行比较分析，以制定出行之有效的减振方法。     

圈幂补图的树宽

基于“前沿分支”的观点研究了圈幂补图的树宽，首先确定了它的树宽下界，又给出了达到此下界的标号，从而得到了它的树宽表达式。     

鸡法氏囊病及其防治

报告鸡法氏囊病的流行状况，主要症状，剖检情况及诊断，提出了综合性防治措施。