肿瘤相关性胰蛋白酶原-2在胰腺癌初筛中的意义

摘要: 目的 研究胰腺癌患者血清肿瘤相关胰蛋白酶原-2在胰腺癌初筛中的意义。方法 收集北京军区总医院23例胰腺癌住院患者的治疗前血清标本和35 例正常对照者（健康体检者）血清标本。采用酶联免疫吸附法检测血清胰蛋白酶原-2含量。结果 血清胰蛋白酶原-2含量在正常对照组中位数为0.8ug/L,四分位间距0.6～1.2μg /L; 胰腺癌患者中位数为13.8μg /L,四分位间距2.3～60.7μg/L。胰腺癌组和正常对照组血清胰蛋白酶原-2水平有统计学差异( P＜0.01) 。以1.85ug /L为临界值作为诊断胰腺癌界定值的敏感度为91.4%,特异度为95.7%。结论 血清胰蛋白酶原-2检测可作为胰腺癌的一种初筛试验。     

人胰蛋白酶原-2在大肠杆菌中的表达、纯化与活性测定

胰蛋白酶原-2是急性胰腺炎相关的敏感而特异的标志物,并且与多种肿瘤转移的过程密切相关．对胰蛋白酶原-2基因5’端4个氨基酸的密码子碱基进行简并突变,并在其3’端连接6个组氨酸编码序列构建含重组质粒pBVTg2的大肠杆菌工程菌-pBvTg2／DH5α．重组大肠杆菌经温度诱导后获得了高效表达,重组蛋白占总菌体蛋白的20％,并以包涵体形式存在．包涵体经尿素缓冲液裂解后,通过Ni-NTA亲和树脂一步分离纯化．纯化蛋白经SDS-PAGE分析及利用anti—histidine mAb进行Western blotting分析,以及蛋白N末端测序分析,结果表明与目的蛋白特征相符合．纯化的重组人胰蛋白酶原-2经复性后能与天然人胰蛋白酶原-2的单抗antihTrypsinogen2 mAb特异结合,复性后的蛋白在肠激酶作用后测得具有74BAEEU／mg的胰蛋白酶比活力,为进行胰蛋白酶原-2单克隆抗体的制备及其检测和应用奠定了基础．     

邻苯二甲酸二丁酯与胰蛋白酶的相互作用

在模拟人体生理条件下(pH值为7.4),应用荧光光谱法、紫外光谱法和圆二色谱法(CD)并结合原子力显微镜(AFM)和分子模拟技术,研究了邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对胰蛋白酶(Trypsin)的光谱性质、结构及催化活性的影响.结果表明,DBP通过氢键和范德华力与胰蛋白酶形成基态复合物而猝灭胰蛋白酶的内源荧光,DBP在胰蛋白酶上只有1个结合位点.同步荧光、紫外和CD光谱研究发现,DBP与胰蛋白酶的结合诱导了酶的α-螺旋、β-折叠和β-转角含量的减少,而增加了无规卷曲的含量.原子力显微镜图像显示,DBP的存在引起胰蛋白酶的表面形态发生变化,蛋白质发生了聚集.分子模拟结果表明,DBP结合于胰蛋白酶S1疏水空腔附近,与氨基酸His 57,Ser 195和Gly 193形成氢键.酶活测定结果显示,DBP的存在导致胰蛋白酶活性被抑制.     

原花青素的功能

原花青素属于生物黄酮物质家族,存在于许多木本植物中,具有多种有益于人体健康的功能。本文从多个方面对原花青素的生物功能进行了综述。     

原花青素提取方法的研究进展

原花青素是一种具有多种生理活性、安全性高的多酚类化合物。原花青素的提取方法主要包括溶剂提取法、超声辅助提取法、微波辅助提取法、超声一微波协同提取法、超临界CO2提取法及酶辅助提取法等,这些方法各有优缺点,根据实际条件选用合适的提取方法,或将几种方法配合使用,以达到最佳提取效果。     

原花青素的生物学功能及测定方法

原花青素广泛存在于植物中,能有效清除氧自由基和防止氧自由基引发的疾病,目前由原花青素制成的保健品、化妆品等普遍受到人们的喜爱,具有广泛的应用前景。本文对原花青素的生物学功能和测定方法进行了综述。     

草莓中原花青素提取工艺研究

以草莓中原花青素含量为考察指标,研究提取溶剂浓度、提取温度、料液比、提取时间等因素对原花青素提取效果的影响。通过正交试验,确定草莓中原花青素的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度70%,料液比1∶20,提取温度50℃,提取时间70 min。在最佳提取条件下原花青素的提取率为24.23%。     

脱脂葡萄籽中原花青素提取工艺研究

采用溶剂回流提取方法,以脱脂葡萄籽为原料,以原花青素提取率为考察指标,研究了提取溶剂种类、溶剂浓度、提取温度、料液比、提取时间、提取次数等因素对葡萄籽中原花青素提取效果的影响;通过正交试验设计,确定脱籽葡萄籽中原花青素的最佳提取工艺条件为:提取溶剂70%乙醇,提取温度50℃,料液比1∶7,提取时间50 m in,提取3次;在此优化条件下脱脂葡萄籽中原花青素的平均提取率为5.00%。     

原花青素的抗氧化活性研究

以脱脂葡萄籽为原料提取原花青素,选择了清除超氧阴离子自由基、对亚油酸体系的保护、以及对猪油自氧化的抑制等三方面对原花青素的抗氧化活性进行评定,同时考察了原花青素与合成抗氧化剂的复合使用效果及与有机酸、Vc的协同效应.结果表明,原花青素具有很强的清除O2-.的能力,其抑制邻苯三酚自氧化率可高达91.5%;其对亚油酸抗氧化的最适范围是在pH值为7.0的环境中;0.03%原花青素的抗氧化活性接近于0.01%BHT,0.02%原花青素的抗氧化活性优于0.01%茶多酚,0.01%原花青素与0.01%PG的复合使用效果最佳,可使猪油的货架期在20℃下由8.5个月延长到23.9个月.     

葡萄籽活性成分原花青素提取工艺研究

在分析葡萄籽中的活性成分基础上,综述了葡萄籽中原花青素提取分离工艺的研究现状,指出用超临界CO2萃取法提取葡萄籽中的原花青素的工艺值得推广。     

原花青素微胶囊对花生油的抗氧化活性研究

以原花青素微胶囊作为抗氧化剂,采用Schaal烘箱法对花生油进行抗氧化研究,并与合成抗氧化剂BHT、PG进行对照,同时考察了BHT、PG以及不同增效剂对原花青素微胶囊抗氧化效果的影响.结果表明,原花青素微胶囊最适添加量为0.04%;原花青素微胶囊与维生素C的增效作用最强;原花青素微胶囊与PG混合使用的效果优于与BHT混合使用的效果.并对花生油货架寿命进行了预测,可知添加抗氧化剂后,花生油的货架期均得到了不同程度的延长.     

葡萄籽原花青素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及自噬性死亡

目的:探讨原花青素对肝癌HepG2细胞的抑制作用及其可能的作用机制.方法:改良MTT法(WST-8法)及克隆形成抑制实验观察原花青素对肝癌HepG2细胞的生长抑制作用,碘化丙锭(PI)单染色检测细胞周期改变,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,激光共聚焦显微镜观察和Western blot...     

原花青素体外清除自由基活性的研究

从葡萄籽中提取高纯度的原花青素 ,测得其对稳定自由基 1 ,1 -联苯 -β-苦基偕腙肼( DPPH)的半数抑制浓度 ( EC50 )为 44mg/L ;又利用 2 -脱氧 - D-核糖法产生· OH,在原花青素浓度为 1 0 g/L时可清除该体系中 80 %的· OH,表明原花青素是一种天然有效的自由基清除剂     

从葡萄籽中分离纯化原花青素的研究

研究了从葡萄籽中分离纯化原花青素的最佳浸提条件,经过正交实验,得出最佳浸提条件:乙醇体积分数60%,提取温度50℃,料液比(g:mL)1:7.AB-8树脂较适合精制原花青素粗提物,最佳的柱分离条件:上样液pH=4,上样液流速2.0 BV/h,体积分数为50%醇溶液洗脱,洗脱流速1.0 BV/h.经AB-8树脂吸附精制,原花青素的纯度可达91.2%.     

斑马鱼3种胰蛋白酶原基因的克隆、序列分析及组织表达

 胰蛋白酶是丝氨酸蛋白酶类超家族成员之一,在动物蛋白消化中起着重要作用。为深入研究胰蛋白酶在鱼类中的蛋白结构和生理功能,利用RT-PCR和RACE方法,成功获得了斑马鱼3种胰蛋白酶原cDNA序列(zftry1a、zftry1b和zftry2)。结果表明,zftry1a和zftry1b均有242个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和5个氨基酸(LDDDK)的激活肽。zftry2由247个氨基酸残基组成,其中包括15个氨基酸的信号肽和9个氨基酸(APLGDDDDK)的激活肽。氨基酸序列比对结果显示,三者具备胰蛋白酶原的保守结构特征,如含有催化三联体氨基酸(His-57、Asp-102和Ser-195),12个半胱氨酸,位于底物结合口袋底部Asp-189和口袋开口处的Gly-216、Gly-226等。进化树结果显示,斑马鱼zftry1a和zftry1b属于group I,为阴离子胰蛋白酶原;斑马鱼zftry2属于group II,为阳离子型胰蛋白酶原。RT-PCR结果显示,三者组织分布模式类似,且在肠中有最高表达量。这些结果为研究鱼类胰蛋白酶原的基因进化和功能以及进一步探讨鱼类消化生理的分子机制奠定了基础。     

花青素与原花青素 有效的纯天然抗氧化剂

花青素和原花青素是两类不同的物质。按化学结构,原花青素属多酚类物质,花青素属类黄酮类物质。原花青素也叫前花青素,在酸性介质中加热均可产生花青素,故将这类多酚类物质命名为原花青素。     

葡萄籽原花青素提取物抗氧化作用研究

为研究葡萄籽原花青素提取物（grape procyanidins extract,GPE）抗氧化和对DNA氧化损伤的保护作用,我们采用七种生物化学发光体系,检测了GPE 对O₂^-、OH、H₂O_2、ONOO^-和全血嗜中性白细胞“呼吸爆发”产生的多种活性氧的清除作用,以及对OH引起的DNA氧化损伤的保护作用;采用Fe^2＋诱发脂蛋白多不饱和脂肪酸过氧化比色体系,检测了GPE对脂质过氧化分抑制作用。结果显示,GPE 能有效地清除O₂^-、OH、H₂O_2、ONOO^-和全血嗜中性白细胞“呼吸爆发”产生的多种活性氧而抑制体系 发光,并有效抑制脂质过氧化,半抑制浓度分别约为0.2ug/ml、90ug/ml、0.5ug/ml、10ug/ml、130ug/ml、70ug/ml;25ug/ml的GPE对DNA氧化损伤的抑制率誉为70％。提示GPE 能有效清除多种自由基,保护DNA免受·OH引起的氧化损伤,嗜良好的抗氧化剂。     

葡萄籽中原花青素提取、分离纯化研究进展

综述了近十年来葡萄籽中原花青素的提取、分离纯化方法和工艺的研究进展.提取方法主要包括传统的溶剂提取法、微波法、超临界CO2萃取法;分离纯化方法包括大孔树脂吸附法、超过滤法.这些方法为提取纯化葡萄籽中的原花青素,进一步分离得到单体提供有用的参考.     

基因筛选克隆表达原花青素降解酶及其酶解条件优化的初步研究

针对化学法制备低聚原花青素存在环保压力和副产物多等问题，研究了通过生物酶法降解高聚原花青素来制备低聚原花青素的方法。首先通过基因筛选方法筛选出SananA和EcnanA基因用于酶法降解高聚原花青素，将SananA和EcnanA基因连接在不同质粒载体表达蛋白的结果表明，SananA基因连接在pETDuet-1载体上时的蛋白表达效果较优。进而，利用纯化的SananA蛋白优化高聚原花青素降解条件，结果显示较优的酶解条件为温度50℃、pH=10、反应时间8 h，在此条件下原花青素单体积累量为35.67 mg/g，二聚体积累量为14.49 mg/g。     

低聚原花青素对草莓色素的抗氧化活性研究

草莓红色素属花色苷类化合物,在酸性条件下相对稳定,光、热对色素具有一定的降解作用.本文采用60%的乙醇溶液从葡萄籽中提取出天然抗氧化剂低聚原花青素,研究了它对草莓色素的抗氧化活性.结果表明,低聚原花青素能抑制草莓色素的氧化降解,具有明显的护色作用,同时还可起到防腐效果.