中国漠王族干标本DNA提取及部分类群发育关系

为了降低昆虫分子系统学研究中的成本,提高资源利用率,本实验利用干制标本提取基因组DNA.通过对河北大学馆藏30年的漠甲亚科不同保存期干标本与液浸标本DNA的提取和特定基因片段PCR(聚合酶链式反应)扩增,获得一致效果.通过细胞色素B(Cytb)基因片段序列信息构建系统树并与传统分类学做比较,探讨了漠王族部分种类的系统进化关系,研究结果支持Reitter(1893)建立的Platyopini和Pimeliini是2个独立族的观点,而不同意Beutle等(2005)将它们合并为1个族的观点.研究结果为利用鞘翅目昆虫干标本进行分子系统学研究提供了借鉴.     

瓢虫的16SrDNA序列扩增

提取酒精浸泡六斑月瓢虫标本的DNA,探讨酒精浸泡鞘翅目瓢虫科昆虫标本的核酸的提取方法,对提取得到的核酸进行PCR扩增,得到500bp大小的16SrDNA片段,确定这一方法提取的核酸进行PCR反应时的循环参数。     

一种改进的昆虫基因组DNA的提取方法

就昆虫总DNA的提取,介绍了一种简便、快速的提取方法,此方法既可对新鲜标本进行DNA提取、也可对冷冻标本、干标本、酒精泡制标本进行DNA提取,均能得到较完整的大分子DNA片段,并且得率较高.改进的昆虫总DNA提取方法简便、快速,对设备和试剂的要求都不高.     

酒醅微生物DNA提取预处理方法研究

浓香型白酒的酒醅中含有大量的单糖、寡糖、多糖、色素、有机酸和腐殖酸等有机杂质,严重影响对酒醅中微生物进行相关分子生物学研究。如何通过预处理方法降低杂质的影响,快速成功提取高质量的DNA直接影响整个分子生物学实验的准确性。实验采用无菌水、TENP缓冲液、PBS缓冲液分别对酒醅样品进行预处理。通过对样品浓度、纯度、DGGE丰度等指标的比较,确定了PBS预处理法为最佳预处理方法。     

3种提取淡水涡虫基因组DNA方法比较

分别用试剂盒法、改良的CTAB法、改良的酚-氯仿抽提法提取活体涡虫和95%酒精固定的涡虫标本的基因组DNA.结果显示:试剂盒法提取的基因组DNA质量最好,主要表现在分子完整,几乎无降解,并且该方法所得DNA的产率也比另外两种方法的产率要高,试剂盒法是最适合涡虫基因组DNA制备的方法.相同起始物质量条件下,3种方法从活体涡虫中提取的DNA量和纯度均高于95%酒精固定的涡虫标本,但试剂盒法提取95%酒精固定半年以上的涡虫标本,所得DNA产率较高、质量较好,可满足PCR扩增等分子生物学实验的要求.     

叩甲科昆虫微量基因组DNA抽提方法的研究

叩甲科昆虫种类数量众多,分布广泛,很多种类都是重要的地下害虫。由于叩甲科昆虫外部形态相似度非常高,传统的形态分类工作具有较大的难度,对于叩甲科的系统发育研究大多基于分子标记进行展开。目前很多昆虫基因组的抽提方法会破坏整个虫体,为此,本研究改进了1种微量昆虫基因组DNA的抽提方法,采用蛋白酶K消化法,以叩甲昆虫的1条后足肌肉作为抽提对象,以期在不破坏叩甲主要鉴定特征的前提下,提取到较高质量的基因组DNA。同时,对提取到的基因组进行PCR扩增和测序,结果表明该方法抽提到的基因组DNA可以应用于分子学相关试验。由于该方法简单快速,故针对大批量样本抽提时可有效降低成本。     

基于Chelex-100和蛋白酶K的蚊虫足样本DNA提取技术

【目的】探索出一种蚊虫附肢(如单只足)微量DNA的提取方法,用于蚊虫分子鉴定和基因型研究。【方法】采用Chelex-100溶液和蛋白酶K结合的方法用于单只蚊虫足的微量DNA的提取。基于该方法,将不同方法保存的不同蚊种的足作为实验材料,从中提取蚊虫基因组DNA;以之为模板,扩增核糖体DNA的D2,D3,ITS2区以及线粒体COI和COII基因,并对PCR扩增产物进行测序。【结果】提取到了高质量的基因组DNA,PCR扩增获得了高质量的DNA扩增片段,进一步测序获得了高质量的序列。【结论】该方法价格便宜,操作简单方便,减少了对蚊虫样本的依赖。单只足用于DNA提取不影响对剩下的部分开展形态学等研究,可以作为蚊虫分子生物学研究中微量DNA样本提取的重要方法,也为其他昆虫微量DNA的提取提供理论依据。     

昆虫全基因组DNA的保存及提取

以蚂蚁、天牛、蝗虫等昆虫为实验材料,建立了75%酒精常温浸泡密封保存和福尔马林常温浸泡密封保存昆虫样品2~4周后进行全基因组DNA提取的方法。基因组DNA经紫外分光光度法(260 nm、280 nm)、琼脂糖凝胶电泳、PCR检测,结果表明:从两种方法保存的样品中均能提取到纯净完整的基因组DNA,适用于分子生物学实验。     

果蝇基因组DNA的大规模提取及其RAPD-PCR反应条件的优化

介绍了一种大规模提取高质量果蝇基因组DNA的方法，该法不需液氮研磨，不需匀浆转移，不需高速离心，全部操作在3个1.5μL离心管中完成，所以特别适用于对不同果蝇品系等多样本的大规模提取，以本法提取的DNA为模板建立了RAPD－PCR分析的最佳反应体系，获得了稳定而理想的扩增效果，特别适用于小型昆虫的群体遗传多样性研究。     

酒精和冷冻处理对肌肉组织基因组DNA提取的影响

提取基因组DNA的质量对于后续的基因扩增、酶切以及测序等分子生物学研究具有关键的影响,对肌肉组织进行不同的酒精和冷冻处理会显著影响提取DNA的质量。经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品解冻,取肌肉组织放入75%酒精处理后提取的基因组DNA完整性差、降解厉害;经过-80℃超低温冷冻数日的黄鳝样品直接取肌肉组织提取的基因组DNA比较完整、降解程度低;活体采取的黄鳝新鲜肌肉组织样品经过75%酒精处理,在-80℃超低温冷冻数日然后提取的基因组DNA质量也较好,电泳条带明晰而锐利,弥散降解带较少。后两种处理方法对黄鳝肌肉组织中DNA酶活性降低显著,因此提取的肌肉组织基因组DNA质量较高,可以有力支持后续的酶切、PCR扩增等分子生物学实验。     

拟步甲昆虫基因组DNA提取的比较研究

对拟步甲科8种昆虫的新鲜标本及无水乙醇浸泡标本，分别用SDS-蛋白酶K消化法和乙酸钾抽提法进行基因组总DNA的提取．经5次重复实验，结果表明，用两种方法均能从新鲜标本中获得较完整的DNA，且DNA得率较高；而对于无水乙醇保存的标本，提取出的DNA用琼脂糖凝胶电泳检测不出DNA条带，说明标本在保存过程中DNA可能发生了变化，致使提取出的DNA量太少或未分离出DNA．通过对比实验，分析原因，阐明了两种方法的优缺点，并提出了该类昆虫用于DNA提取的标本的保存方法．     

扩展青霉(Penicillium expansum)PF898基因组DNA提取方法的比较

利用CTAB法、SDS改进法和SDS快速法3种DNA提取代表性方法,对扩展青霉(Penicillium expansum)PF898基因组DNA的提取进行比较研究.CTAB法提取的DNA样品纯度最高,SDS裂解法制备的DNA得率最高;CTAB法和SDS改进法所得DNA都可直接应用于限制性酶切分析;3种方法所提取的DNA均能满足扩展青霉PF898脂肪酶基因和18S rRNA的PCR扩增.总体而言,SDS法简便、快速、得率高,是一种理想的扩展青霉基因组DNA提取方法.     

三种血液基因组 DNA 提取方法的比较研究

摘要: 目的 比较采用 3 种不同 DNA 提取方法提取豚鼠血液基因组 DNA 之间的差异。方法 分别用新鲜抗凝血 NaI 手提法、血凝块手提法和试剂盒 DNA 提取法提取 20 只豚鼠血液基因组 DNA,用分光光度计测定、琼脂糖凝胶 电泳、PCR 扩增等方法对提取的 DNA 片段的完整性、浓度、纯度和用于 PCR 扩增的效果等方面进行比较研究。结 果 新鲜抗凝血 NaI 手提法提取的 DNA 完整性、浓度和纯度均为最高; 血凝块法提取的 DNA 浓度和抗凝血提取的 DNA 浓度接近但纯度最低,有一定程度的断裂和降解; 试剂盒法提取的 DNA 浓度最低,纯度和完整性处于中间,但 三种方法提取的 DNA 都可用于 PCR 扩增反应。结论 3 种方法都可以提取基因组 DNA 并且所提取的 DNA 均能 满足后续 PCR 扩增实验的要求,但每种方法各有利弊,可根据具体的条件选择适宜的方法。     

用改进的CTAB法提取肉苁蓉基因组DNA

研究了肉苁蓉(Cistanche deserticola)基因组DNA的分离提取方法.由于肉苁蓉组织内含有大量的多糖类及蛋白等物质,严重干扰DNA的抽提,在对其进行若干预处理之后,采用改进的CTAB法提取基因组DNA.根据外观、琼脂糖凝胶电泳检测、D260/D280的测定和PCR扩增表明,用改进的CTAB法提取肉苁蓉基因组DNA,所得DNA无论是纯度还是完整性都比较好,可以直接用于RAPD反应体系.     

用Chelex-100法大规模快速提取牦牛肌肉中基因组DNA

旨在建立快速、大规模提取牦牛(Bos grunniens)肌肉中基因组DNA的方法.试验样品为冰冻保存的九龙牦牛背最长肌(n=10).采用两种取样方法(镊子取样和枪头取样)采集冰冻的肌肉样品,用Chelex-100方法提取其中的基因组DNA,并进行PCR扩增.结果显示,镊子取样和枪头取样提取的基因组DNA,均可用于两个核基因和一个线粒体基因的PCR扩增,但枪头取样简便易行,提取的DNA用PCR扩增细胞色素b,扩增35个循环数的PCR产物可直接测序.表明Chelex-100法可用于快速提取牦牛肌肉中基因组DNA,操作简单,成本低廉,适用于大规模提取组织中的DNA.     

三点苜蓿盲蝽线粒体Cyt b基因扩增条件研究

以三点苜蓿盲蝽为材料,采用SDS-蛋白酶K消化法提取其基因组DNA,利用CB-1、CB-2昆虫通用特异性引物对线粒体Cyt b基因433 bp片段进行PCR扩增,获得三点苜蓿盲蝽线粒体Cyt b基因的最佳扩增条件.     

基于Chelex-100和蛋白酶K的蚊虫足样本DNA提取技术

【目的】探索出一种蚊虫附肢(如单只足)微量DNA的提取方法,用于蚊虫分子鉴定和基因型研究。【方法】采用Chelex-100溶液和蛋白酶 K 结合的方法用于单只蚊虫足的微量 DNA 的提取。基于该方法,将不同方法保存的不同蚊种的足作为实验材料,从中提取蚊虫基因组 DNA ;以之为模板,扩增核糖体 DNA 的 D2 , D3 , ITS2 区以及线粒体 COI 和COII 基因,并对 PCR 扩增产物进行测序。【结果】提取到了高质量的基因组DNA,PCR扩增获得了高质量的 DNA 扩增片段,进一步测序获得了高质量的序列。【结论】该方法价格便宜,操作简单方便,减少了对蚊虫样本的依赖。单只足用于DNA 提取不影响对剩下的部分开展形态学等研究,可以作为蚊虫分子生物学研究中微量 DNA 样本提取的重要方法,也为其他昆虫微量 DNA 的提取提供理论依据。
     

濒危植物翅果油树DNA的提取方法及纯度检测

为从翅果油树(Elaeagnus mollis Diels)叶中提取高质量的基因组DNA,用PVP和TNE洗液预处理样品并筛选出合适的清洗次数,比较了SDS法、CTAB法和改进CTAB法3种DNA提取方法.结果表明:TNE和PVP预处理三次并且采用改进的CTAB法更适合于翅果油树基因组DNA提取.该方法提取的DNA经紫外分光光度法检测,其A260/A280为1.82,优于CTAB法(1.59)、SDS法(1.00).琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增结果也得出同样的结论.     

人类外周血中提取基因组DNA方法的探索

目的:传统的酚、氯抽提法的基础上进一步改进DNA提取方法，为分子遗传学研究打下基础.方法:人类基因组DNA提取传统方法和改进方法.结果:改进的方法可以得到大量的较完整的基因组DNA,并且纯度达到1.8～2.0.结论:本改良法提取的DNA总量明显较高,提取效率高,PCR扩增的效果好,是外周血基因组DNA提取首选考虑的方法.     

黄连木叶片基因组DNA提取方法

黄连木叶片中酚类化合物、色素、多糖和其它次生代谢物质含量较高,这给黄连木基因组DNA提取带来困难。为了从黄连木叶片中提取高质量基因组DNA,本文运用CTAB法和改良CTAB法提取黄连木基因组DNA,通过定性、定量及PCR分析检测所提取DNA的质量。结果表明:改良CTAB法提取的DNA电泳条带清晰无RNA等污染,OD260和OD280比值在1.8左右,RAPD扩增条带清晰、无弥散现象、亮度均一。说明改良CTAB法提取的DNA纯度较高,适用于PCR扩增反应。