改进AO荧光染色技术在妇女生殖道感染中的应用

对1320例妇女生殖道分泌物涂片进行AO荧光染色体检测，其中检出霉菌309例，占23．4％；滴虫104例，占7．88％；加特纳氏菌171例，占12．95％；衣原体86例，占6．52％；淋菌13例，占0．98％。实验证明，改进的AO荧光染色体具有快速、简单、价廉、准确等特点，值得临床推广应用。     

非梗阻性无精子症患者细胞及分子遗传学效应研究

对103例非梗阻性无精子症患者进行常规外周血染色体G显带核型分析、AZF微缺失筛查、精浆生化指标和血清生殖激素定量检测.103例非梗阻性无精子症患者中,染色体核型异常16例,异常率15.53%,其中Klinefelter综合征8例,占异常总数的50.00%,其它性染色体异常5例,占异常总数的31.25%;AZF微缺失18例,缺失率17.48%,其中AZFc区缺失11例,占缺失总数的61.11%;染色体微缺失患者精浆锌浓度与染色体正常组患者比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;染色体核型异常患者果糖浓度与染色体正常组患者比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,尤其是Klinefelter综合征患者果糖浓度显著升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;染色体核型异常患者FSH、LH均显著高于染色体正常组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）,Klinefelter综合征患者T浓度则低于染色体正常组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）;其他核型异常及Y染色体微缺失患者E2浓度显著高于染色体正常组患者,差异有统计学意义（P＜0.05）.     

应用细胞遗传学技术对6例智残儿早期诊断干预防治研究

先天智残儿发育不全是一种疑难病症 ,严重危害小儿健康的疾病 ,人群中的发病率约为 1%— 3 %。为了研究探讨患儿病因和致病因素 ,我站于 1992年至 2 0 0 1年用了 10年的时间进行细胞遗传学、生化免疫遗传学和分子遗传学研究。十年来 ,共对 2 5 6例先天智残儿进行了诊断检查 ,检出脑瘫 62例 ,占总人数 2 4.2 2 % ,苯丙酮尿症 3 5例 ,占总人数 13 .67% ,2 1—三体综合症 (先天性愚型 ) 2 9例 ,占总人数 11.3 3 %。这三种病症占本项目首位。1　对象方法　 1 1　对象 :在 1992年至 2 0 0 1年开展的细胞遗传学优生优育咨询的门诊患儿中筛选。共筛选出患儿 2 5 6例 ,其中男性 177人 ,女性 79人 ,在妊娠早期 16— 2 0周产前诊断 ,最小年龄出生半小时 ,最大年龄 15岁。1 2　方法 :采用外周血淋巴细胞培养染色体核型分析 ;高分辨染色体分析 ,Ｘ脆性染色体分析 ,羊水细胞染色体分析 ,染色体Ｇ、Ｃ、Ｎ、Ｒ显带分析研究 ;尿液生化检验三氯化铁试验 ,2、4—二硝基苯肼试验 ,Ｇｕｔｈｒｉｉｅ细菌生长抑制法 ,多功能时间荧光分辨法 ,...     

染色体臂间倒位遗传效应分析

对有不良妊娠史、不孕、不育的患者取外周血,进行淋巴细胞培养、制备染色体G显带标本.按人类细胞遗传学国际命名体制进行核型分析.在714例受检的人中,发现罕见的染色体臂间倒位4例,包括inv(6)、inv(7)、inv(10)、inv(11),各占总数的0.14%;另外有9例inv(9),占总数的0.98%.因此在排除了免疫、内分泌等因素造成的流产后,对于染色体臂间倒位,应注意其与不孕不育、流产的直接关系.     

荧光定量PCR技术应用于早孕期胚胎染色体检查的研究

目的: 探讨应用荧光定量PCR(QF-PCR)法检查早孕期胚胎胚外体腔液(ECF)胎儿细胞染色体的可行性.方法: 32例孕6-10周正常妊娠选择性人工流产与宫内停育妊娠于宫内手术前行阴道超声引导下胚外体腔穿刺术,取ECF并提取DNA, 采用QF-PCR技术分析13,18,21号染色体数目,与绒毛长期培养染色体核型分析结果对比.结果:QF-PCR检测ECF成功率为 84.7%(27/32);正常妊娠组QF-PCR 检测13,18,21号染色体数目结果与绒毛长期培养染色体核型分析结果符合率100%;宫内停育妊娠组QF-PCR检查发现21-三体, 13三体, 18三体各1例,绒毛长期培养染色体核型分别为47xy 21/46XX(96%/4%),47XY 13, 48xy 10 18;另有46XX der (14;21)(p10;q10),47xy 16; 45XO各1例.QF-PCR检测目标染色体数目异常符合率为100%,不能检测染色体结构异常.结论:QF-PCR能够检测ECF目标染色体核型,结合胚外体腔穿刺术将目前的产前遗传学诊断时间提前至孕6-10周,是重要的早孕期胚胎染色体检查技术.     

夹层构型抛光金属衬底表面的吖啶橙荧光增强效应

选择在生命科学和医学临床上具有实际应用价值的吖啶橙(Acridine Orange, AO)作为荧光活性分子, 利用激光光谱技术研究夹层构型中机械抛光金属衬底对固/液界面AO分子的表面增强荧光效应. 发现银和铝表面均对AO的荧光辐射具有明显的增强作用, 实验探测到的衬底对荧光强度的增强倍数可达20倍左右. 相比之下铜衬底表面对AO分子的荧光增强效果则不明显. 研究结果还表明, 机械抛光金属表面的增强荧光效应不仅与金属本身的光学性质密切相关, 还强烈依赖于衬底的表面构形. 根据实验观测结果, 应用局域场增强理论对其荧光增强现象进行了分析, 并探讨了影响增强效应的物理因素.     

河南太行山脉3产地淡水三角涡虫染色体数目及核型多样性分析

利用空气干燥法对采自河南境内太行山脉十字岭、张沟、八里沟3产地淡水三角涡虫(Dugesiasp)的染色体和核型进行了研究.结果表明:十字岭淡水三角涡虫(Dugesia sp)体细胞中染色体数目以24条为主(2n=3x=24=24m),占84.56%,少数为16条(2n=2x=16=16m),占8.98%,染色体基数为8,为二倍体和三倍体的混合倍体;张沟淡水三角涡虫(Dugesiasp)体细胞中染色体数目以25条为主(2n=3x+1=24+1SB=21m+3sm+1SB),占80.84%,含有一条小B染色体,少数为24条(2n=3x=24=21m+3sm),占15.99%,极少数为32条,占3.17%,染色体基数为8,为三倍体、四倍体和三倍性非整倍体的混合倍体;八里沟淡水三角涡虫(Dugesiasp)的体细胞中染色体数目以24条(2n=3x=24=24m)和32条(2n=4x=32=32m)为主,分别占38.21%和39.77%,染色体基数为8,为三倍体和四倍体的混合倍体,该产地部分三倍体个体体细胞中染色体结构发生变异,个别染色体末端有随体,其核型呈现多型性.     

生物抗氧化剂电化学检测技术进展

生物体内的氧化与抗氧化机制是生命科学研究较广泛的课题.在氧化代谢过程中,活性氧物质或自由基(ROS)逐渐积累,当ROS相对于生物抗氧化剂(AO)过量时,会破坏生物大分子和细胞,并导致人体组织的功能损伤.因此,对AO的研究在生物化学、医学、食品科学等领域具有重要的意义.传统的AO检测一般采用自由基反应检测,热引发的ROS与AO进行氧化还原竞争反应,或者使用具有光学吸收或荧光特性的氧化剂,根据体系的光学吸收或荧光信号可以对AO进行定量分析.我们发展了几种ROS淬灭型电化学检测AO的方法,并且给出了相应的动力学模型.AO电化学检测技术的主要优点是采用了电化学原位产生的ROS(H_2O_2、·OH等)作为AO分析的氧化性物质,这些AO接近于人体内源型ROS,因此得到的氧化还原动力学数据更加接近于人体实际发生的状态.     

双荧光自组装多层膜的构建及其性能

以吖啶橙单体(AO)为荧光探针,CdTe量子点为参比物,利用层层组装技术构建AO和CdTe量子点双荧光自组装多层膜,并考察其组装条件.研究结果表明,CdTe浓度为8.33 mmo1·L-1,壳聚糖质量浓度为1.0 g·L-1,AO组装液浓度为10 μmol·L-1的组装效果最佳.通过双荧光自组装多层膜的自动校准能力测试...     

荧光猝灭法测定六偏磷酸根离子的浓度

基于阳离子荧光染料吖啶橙(AO)与负电性的六偏磷酸根离子(SHMP)之间的静电作用,建立了一种测定SHMP浓度的荧光分析法.在pH=7.2的BR缓冲溶液中,SHMP能够有效猝灭AO在550nm处的荧光,且荧光强度的变化与SHMP的浓度在一定范围内呈良好的线性关系,相关系数r=0.996 6,线性范围为8.0×10~(-7)~1.12×10~(-5 )mol/L.进一步研究表明,SHMP对AO荧光的猝灭过程为静态猝灭.该方法操作简单、快速,线性范围宽,适用于饮料中SHMP添加剂浓度的测定.     

抗癌药物6-MP对小白鼠染色质小体的影响和EMX效果

将5周龄的DDY系小白鼠40只,分对照、6-巯基嘌呤腹腔注射（6-MP组）、6-MP＋500倍稀释的EMX饮水（EMX饮水组）、6-MP＋EMX腹腔注射（EMX注射组）4个组,每组10只。试验8周后断头屠杀,取左侧大腿骨骨髓制作涂片,分别用姬姆萨和吖啶橙（AO）荧光染色,用普通显微镜和荧光显微镜观察1 000个多染性红细胞（PCE）,记录其中出现染色质小体的比例（MNPCE/1000PCE）。结果表明：抗癌药物6-MP组和对照组之间的染色质小体数差异极显著（P〈0.01）,而且EMX饮水和EMX注射能显著降低染色质小体的出现率（P〈0.01）。说明EMX能有效减少抗癌药物引起的染色体异常。姬姆萨染色和吖啶橙（AO）荧光染色结果呈正高度相关（r=0.999）,姬姆萨染色可以替代吖啶橙（AO）荧光染色做染色质小体试验的测定。     

碳源饥饿对癌细胞和正常细胞增殖的影响

研究了共培养条件下碳源饥饿对癌细胞和正常细胞形态、生长和凋亡的影响.采用细胞体外共培养的方法,实验分4组:对照组(25 mmol/L葡萄糖)及5,1和0 mmol/L葡萄糖组,分别处理共培养条件下的HeLa癌细胞和人脐带正常细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态与生长,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双重荧光染色检测凋亡细胞的形态及数量.结果表明:对照组HeLa癌细胞和人脐带正常细胞都分布均匀,贴壁性好,形态饱满,多呈规则的梭形或多角形,折光性好,AO/EB双染绿色荧光分布均匀;实验组糖浓度越低,细胞存活时间越短,细胞收缩变圆并逐渐凋亡,AO/EB双染细胞由绿色荧光逐渐变为橙黄色荧光;相同糖浓度条件下人脐带正常细胞比HeLa癌细胞存活时间更长.说明碳源饥饿使癌细胞先于正常细胞死亡.     

散射/荧光比率法测定核酸

在pH 9.62的BR缓冲溶液中,阳离子染料吖啶橙(AO)与鱼精DNA(fsDNA)通过静电作用形成二元复合物,导致AO在激发波长272 nm处产生增强的散射光,而在发射波长534 nm处出现荧光猝火.利用共存的散射和荧光信号,提出了一种散射/荧光比率法.在激发波长为272 nm和发射波长为534 nm的条件下,其散射/荧光比值(I/F)和0.02～1.40 μg,/mL范围内的fsDNA溶液成一定的线性关系,据此测定核酸的含量,其检出限为5.7 ng/mL.此方法成功用于核酸合成样的测定,RSD为1.3%-2.0%.实验结果表明,比率法比单波长的散射法或荧光法灵敏度更高,线性范围更宽.     

减数分裂同源染色体重组交换的改变在男性不育发生中的作用

在第一次减数分裂前期,同源染色体之间需进行配对、联会和遗传物质的重组交换等一系列重要事件.重组交换对染色体正确分离、配子正常形成至关重要.重组交换改变可导致不同程度的精子异常,如精子发生停滞而出现不育,或精子染色体异常导致非整倍体出现.而不育症是一个世界性的问题,影响着10%～15%夫妇,由男方因素所引起的占一半,其中多数病因和机制不明,关于因减数分裂错误导致精子发生失败的机制仍知之甚少.近年来发展的荧光免疫遗传学技术可直视减数分裂前期的重要事件,为研究人类精子形成的调节提供了开拓性的进展.本文围绕重组交换与精子发生之间的关系综述了在这个领域内的研究进展.     

AO锁骨钩钢板治疗肩锁关节脱位和锁骨远端骨折的临床观察

目的探讨AO锁骨钩钢板(clavicular hook-plate,CHP)治疗肩锁关节脱位(Tossy Ⅲ型)和锁骨远端骨折(NeerⅡ型)的疗效.方法对16例患者应用CHP固定治疗,所有肩锁关节脱位病例均直接修复断裂的肩锁韧带.结果全部患者获得随访,随访时间平均9个月;术后4-6周肩关节活动基本正常,患者恢复工作和体力劳动平均为3个月;取出CHP内固定时间为术后4-11个月,平均为6个月,无钢板断裂,螺钉松动和再脱位,按Karlsson疗效标准,优12例,占75%,良3例,占18.75%,差1例,占6.25%;优良率达93.75%.结论CHP治疗肩锁关节脱位和锁骨远端骨折,操作简便,固定确切,可早期活动肩关节,关节恢复快,疗效满意.     

小鼠NPC细胞RFX1ChIP-Seq数据分析

利用NCBI数据库中小鼠Embryonic Stem Cells(ESC)与Neural ProgenitorCells(NPC)的基因芯片结果及NPC时期的RFX1ChIP-Seq数据,进行有关RFX1的分析,结果表明:RFX1结合位点富集在1,2,4,5,7,9,11染色体上,Y染色体上最少,其他染色体上比较均衡;在基因组中结合位点分布区域主要在基因的promoter区域,约有53.2%,其次是intergentic,占22.5%,body区域,占13.1%,enhancer区域,占11.2%.说明RFX1是以结合在基因的promoter区为主要形式对目的基因进行调控.同时在DAVID数据库中用生物信息学方法探索了RFX1靶基因的生物学功能分类.     

112例自然流产者绒毛染色体核型分析

对112例自然流产者的绒毛组织培养后行染色体核型分析,探讨自然流产的原因。将112例自然流产患者清宫时获得的绒毛组织进行贴壁培养,收获后制片,G显带进行染色体核型分析。109例标本获得染色体核型,异常核型39例,异常率35.8%,其中三体26例,占异常核型中的66.7%。胚胎染色体异常是造成自然流产的重要原因。     

基于帧选择和极大似然估计的自适应光学图像多帧联合去卷积算法

为提高自适应光学(AO)图像的空间分辨率,提出一种基于帧选择和极大似然估计的AO图像多帧联合去卷积算法.该算法基于极大似然估计,根据图像的高斯噪声模型建立多帧AO图像的联合对数似然函数.首先对观测的多帧AO图像进行帧选择,遴选高质量的降质图像;然后结合观测条件和AO系统特性,推导点扩散函数估计模型;最后建立迭代求解公式,得到多帧AO图像联合去卷积方法.实验结果表明,与基于期望值最大化的Richardson-Lucy算法(Richardson-Lucy EM算法)和基于合并惩罚函数的自适应应图像复原算法(CPF-Adaptive算法)相比,该算法的峰值信噪比分别提高9%和5%,Laplace梯度模分别提高11%和8%,且得到了较清晰的目标图像.     

新型荧光光源吖啶橙梯度染色法检测伯氏疟原虫的研究

探讨新型荧光光源吖啶橙(AO)梯度染色法检测伯氏疟原虫的效率和实用性.对经血液腹腔接种传代感染5d的伯氏疟昆明小鼠(60只)以红细胞的疟原虫寄生率计算法计算原虫密度,并用正常小鼠新鲜血10倍倍比稀释其尾血或眼球血,同时推制薄血片.用新型荧光光源AO法和瑞氏法染色后高倍镜检,记录每片发现三次原虫的平均时间,5min观察300个视野未发现疟原虫者为阴性.本AO染色法、瑞氏染色法能检出的伯氏疟原虫的最低原虫密度分别为11虫/μL、19虫/μL.当原虫密度在一定范围内时,两法检测发现疟原虫的时间有差别,前者比后者快.原虫密度适中的稀释倍数组原虫密度与各法检出的时间为负相关.不同稀释倍数组两法检出时间均为正相关.新型荧光光源AO梯度染色法是检测人体疟原虫的一种简便、快速、敏感、实用的方法,可推广作为疟疾流行病学调查及后期监测的手段.     

鱼腥草染色体核型分析

用去壁低渗染色体制片方法,对鱼腥草腋芽细胞染色体制片,研究其染色体组型,结果表明:鱼腥草为二倍体、染色体数目为22;染色体核型公式为2n=2x=22=10m 10sm 2t,第1、3、4、6、7号染色体为中间着丝点染色体,第2、5、8、9、10号染色体为近中着丝点染色体,第11号染色体为端部着丝点染色体,单倍染色体数为11;该染色体组内最长与最短染色体长度比值为3.73,臂比大于2:1的染色体为5、10、11号,共3对,占该基因组内染色体总数的27.3%,故鱼腥草的核型为2B型.