葡萄糖和谷氨酰胺浓度对杂交瘤细胞生长代谢的影响

在生物反应器的批培养过程中考察了葡萄糖及谷氨酰胺浓度对杂交瘤细胞生长及代谢的影响。当葡萄糖浓度降至1～4mmol／L，谷氨酰胺浓度降至0．4～2mmol／L时，细胞生长并未受到明显影响，但细胞代谢途径发生转换，乳酸及氨的生成显著减少。葡萄糖和谷氨酰胺浓度的比例对杂交瘤细胞的生长及代谢也有影响，葡萄糖相对较多时，其细胞得率小，乳酸得率大；而当谷氨酰胺相对较多时，其细胞得率小，氨得率大。实验结果表明谷氨酰胺与葡萄糖的能量代谢在某种程度上可进行相互补充。     

营养物质及代谢产物对杂交瘤细胞生长的影响

研究了葡萄糖、谷氨酰胺、氨和乳酸对鼠鼠杂交瘤细胞G_5F_4生长的影响。实验发现,对于G_5F_4细胞,最适宜的葡萄糖和谷氨酰胺浓度范围分别为21～41 mmol/L和6～10mmol/L。乳酸是细胞生长的弱抑制剂,在正常培养产生的乳酸范围内(1.5～2.0 mg/InL),对细胞生长无明显抑制作用。氨是一种强抑制剂,其浓度在2.5～5.0mmol/L内,表现出较明显的抑制作用;当其浓度超过5.0 mmol/L时,有严重的抑制作用,细胞生长基本停止。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响Ⅲ.丙氨酸的作用

研究了无血清培养中的代谢副产物丙氨酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响。丙氨酸浓度在0－8.9mmol/L范围时，丙氨酸对细胞生长影响不大，对单抗的生成没有直接影响，但对细胞代谢有较大的影响，随着丙氨酸浓度的提高，葡萄糖的消耗增加；同时，乳酸的生成增加，而丙氨酸和氨的生成减小。     

培养杂交瘤细胞制备单克隆抗体的工艺过程

研究了在生物反应器中培养RT-28杂交瘤细胞分泌抗A红细胞单抗的工艺过程,包括搅拌剪切、通气方式及溶氧水平、连续灌注稀释率等条件,对细胞生长及产物分泌、葡萄糖代谢及乳酸产生的影响,得出了合适的工艺条件为:温度37℃,溶解氧10～60%空气饱合度,搅拌转速30～60r/min,pH7.0～7.2。细胞密度达2.0×10~6cells/mL,单抗滴度述1:256。     

底物限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成的影响

考察了葡萄糖或谷氨酰胺限制的批培养中杂交瘤细胞的生长、代谢和单抗生成。葡萄糖或谷氨酰胺限制时最大活细胞密度基本相同,为(1.0±0.1)×106cells/mL。葡萄糖限制时,乳酸生成减少,YLac/Glc降低,YCell/Glc增加,提示葡萄糖更多地参与三羧酸循环。谷氨酰胺限制时,氨和丙氨酸生成减少,YAmm/Gln增加,YAla/Gln减小,提示谷氨酰胺的能量利用率提高。谷氨酰胺缺失时异亮氨酸、亮氨酸、胱氨酸、缬氨酸、色氨酸、组氨酸等替代谷氨酰胺,维持细胞生长和单抗合成,产物是甘氨酸和天冬氨酸。单抗生成与细胞生长关联,并且细胞停止生长后单抗仍生成。细胞死亡阶段的qMAb约是生长阶段的一半。葡萄糖和谷氨酰胺共限制下细胞对单抗的生产能力比葡萄糖和谷氨酰胺单独限制时小。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响 I.乳酸的作用

研究了无血清批培养中乳酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响，当乳酸浓度低于5．3mmol/L时，乳酸对细胞生长和代谢无明显影响，当乳酸浓度在10mmol/L-25mmol/L时，对杂交瘤细胞的生长代谢有弱抑制，当乳酸浓度高于34mmol/L时，对细胞生长代谢有较明显的抑制。     

在无血清培养基中代谢副产物对杂交瘤细胞生长代谢的影响 III.丙氨酸的作用

研究了无血清培养中的代谢副产物丙氨酸对杂交瘤细胞生长代谢的影响。丙氨酸浓度在0～ 8.9mmol/L范围时 ,丙氨酸对细胞生长影响不大 ,对单抗的生成没有直接影响 ,但对细胞代谢有较大的影响。随着丙氨酸浓度的提高 ,葡萄糖的消耗增加 ;同时 ,乳酸的生成增加 ,而丙氨酸和氨的生成减少     

JAL1杂交瘤细胞的批量培养研究

研究了不同葡萄糖、谷氨酰胺浓度下JAL1细胞的生长、糖耗、乳酸及氨的生成、单抗合成等代谢过程及该株细胞的基本代谢规律，同时对该株细胞生长和单抗生产的动力学方面进行了研究，在细胞培养箱中，采用方瓶批量培养杂交瘤细胞，培养条件为pH7.0-7.5，温度37℃，5％CO2。实验表明，在不同浓度葡萄糖、谷氨酰胺的培养液中，细胞的活性细胞密度、总细胞密度、细胞活性上均有不同，相应地，对细胞的最大比生长速率、葡萄糖最大比消耗速率、乳酸最大比生成速率以及单抗最大比合成速率也有不同程度的影响。实验结果还表明，该株细胞的单抗分泌是属于负生长耦联型的。     

葡萄糖限制的流加培养中杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成

研究了葡萄糖限制的流加培养和批培养中杂交瘤细胞的生长、代谢和单抗生成。与批培养相比，流加培养的培养周期长，细胞密度、单抗浓度高。随着葡萄糖浓度的下降，葡萄糖比消耗速率和乳酸比生成速率也下降，葡萄糖转化成乳酸的比例从60％～70％下降到0，葡萄糖更多地参与三羧酸循环，提高了葡萄糖的有效利用率和ATP的生成效率。     

半连续培养JAL1杂交瘤细胞的生长和代谢

观察了分泌抗IBDV单抗杂交瘤细胞在改良型5L Celligen细胞反应器中采用半连续培养方式的生长和代谢情况，研究了在该工艺过程中的葡萄糖消耗、单抗的生成、乳酸和氨的产生．同时为培养方案和控制策略进一步的改良确定方向．     

天花粉蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的制备及鉴定

将小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0细胞）与经TCS免疫过的小鼠脾细胞融合,融合后的细胞悬浮于HAT培养液中进行选择性培养,挑选可以分泌TCS单克隆抗体的细胞系,再经克隆化为单克隆细胞系。用间接酶联免疫吸附法检测此细胞系分泌单克隆抗体情况。经细胞融合和2次克隆化后,获得1株可以稳定分泌TCS单克隆抗体杂交瘤细胞系,ELISA检测结果为阳性。获得了可以稳定分泌天花粉蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系,为TCS鉴定、应用奠定良好的基础。     

抗鱼卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的建立及初步鉴定

详细介绍了抗鱼（花鲢Anstichthysnobilis）卵透明带单克隆抗体淋巴细胞杂交瘤的制备及鉴定方法，用佛氏佐剂乳化热溶花鲢鱼卵透明带，然后免疫雌性BALB／C小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤Sp2／0融合产生杂交瘤，经3次再克隆后，用间接ELISA方法筛选出一株抗鱼卵透明带的单克隆抗体杂交瘤，经免疫双扩散试验测得该种单克隆抗体为IgG1，经过染色体检查知其染色体数目在86～108之间，为93.6±3.81，杂交瘤细胞染色体经检查发现有中间和亚中着丝点染色体，符合杂交细胞染色体特征。