谷氨酸发酵的研究(Ⅰ)——控制代谢产物提高产酸的初步探讨

本文分析了不同发酵条件下的发酵终期培养上清液中的有机酸、氨基酸等中间代谢产物,发现,生产大罐和麸皮添加量为1.2％以上的小型发酵摇瓶,能较大量地积累乳酸和琥珀酸;在氨基酸中除L-谷氨酸和丙氨酸外,缬氨酸的含量也大量积累,根据代谢转换发酵的规律,通过降低生物素用量,能使乳酸及琥珀酸含量明显下降;降低磷的用量,能使缬氨酸在图谱中逐渐消失,从综合实验中发现:在辽源味精厂的生产条件下,当基础培养基中的麸皮添加量为O.8％,降低磷,提高锰,补足钾的情况下,能显著地促进L-谷氨酸的积累,通常可将产酸率提高1％。 结果表明:发酵液中间代谢产物的分析在提高发酵产物的研究中,可以做为改变营养条件、促进产物积累的重要参考指标。     

螺旋霉素产生菌抗噬菌体菌株的选育

用Ｃｏ＾６０处理螺旋霉素产生菌ＰＳ，获得了一株抗噬菌体且摇瓶发酵单位比原菌株稍高的突变株Ｒ１０，继而对Ｒ１０进行理性化筛选，在加有２－脱氧葡萄糖的分离培养基上分离到一株抗噬菌体稳定、摇瓶发酵单位又比Ｒ１０高２０％的新突变株，且其摇瓶发酵周期缩短１２ｈ、能耐受更高浓度的自身代谢产物－螺旋霉素。     

灵芝真菌发酵胞外多糖反馈抑制的初步研究

探讨了灵芝胞外多糖自身反馈抑制作用。在摇瓶中考察了灵芝真菌发酵菌丝体生长、胞外多糖(EPS)和胞内多糖(IPS)合成的动态过程。在培养168h时，生物量达到最大值3．18g／L(干重)，培养216h时，胞外多糖达到最高浓度1．24g／L，EPS和生物量的变化趋势大致呈正相关。在摇瓶培养基中添加同源胞外多糖，以浓度梯度实验法考察培养基中的同源胞外多糖浓度对灵芝真菌发酵胞外多糖产量的影响，结果表明：培养基中添加的同源胞外多糖浓度高于0．59g/L时，EPS的产生受到明显抑制，其趋势是随着培养基中同源灵芝胞外多糖浓度的增加，反馈抑制作用逐渐增强，当培养基中添加的同源胞外多糖浓度高于2．34g/L时，菌丝的生长和胞外多糖的产生完全受到抑制。     

促进剂对木耳液体发酵生产的影响

【目的】有效地促进木耳菌体生长及胞外多糖的生产,确定可显著提高木耳液体发酵生产的促进剂及其添加量。【方法】在木耳液体发酵培养基中分别添加20种不同的促进剂,每种促进剂设置4个浓度,发酵6d后检测发酵液中的菌丝体、胞外多糖含量。然后对促进效果较好的Tween40、硬脂酸、棕榈酸、油酸进行正交试验。【结果】单因素试验结果表明,0.1%的棕榈酸、1%的硬脂酸、0.5%的Tween40、0.1%的油酸均可显著促进木耳胞外多糖的生产。正交试验结果表明,在发酵培养基中添加剂最佳组合为0.5%Tween40、1.5%硬脂酸、0.1%棕榈酸、0.25%油酸。【结论】硬脂酸、棕榈酸、油酸和Tween40可显著促进木耳胞外多糖的发酵生产。     

海洋热带假丝酵母产角鲨烯发酵工艺研究

【目的】为了从海洋热带假丝酵母(Candida tropicalis)菌株中获取高产量的角鲨烯活性物质。【方法】研究不同碳源、氮源、培养温度、培养基初始pH值、培养时间、光照和氧气等条件对海洋热带假丝酵母菌株产角鲨烯的影响。【结果】确定最优培养基为(W/V)1%酵母膏+2%蛋白胨+2%蔗糖,最佳摇瓶发酵条件:有氧条件下,初始pH值为5.0,培养温度25℃,经48h培养,角鲨烯产量可达2.25mg/g干重。【结论】采用优化后工艺条件进行发酵,获得的角鲨烯产量明显提高。     

白木耳深层发酵培养基的选择

以食用菌白木耳为试验菌种，通过斜面、摇瓶培养及深层发酵正交实验，研究了各培养阶段的基质组成。其结果得出，种子摇瓶培养基（ｇ／１００ｍｌ）：马铃薯２０％、葡萄糖２％、蛋白胨０．２％、ＫＨ_２ＰＯ_４０．１５％、ＭｎＳＯ_４０．０１％、ＣＭＣ－Ｎａ１％。深层发酵培养基组成为：土豆汁１．５％、玉米粉２．０％、麸皮３％、ＫＨ_２ＰＯ_４０．２％、吐温－８０为０．１％，其发酵产物菌丝体中所含粗多糖达１３．２３％，蛋白质含量为３２．８３％、氨基酸为１９．７５ｍｇ／１００ｇ干菌葡萄体，必需氨基酸为７．６７ｍｇ／１００ｇ干菌丝体。     

蛹虫草液体发酵培养基的筛选

本文为了获得在蛹虫草液体发酵培养条件下,菌丝体干重得率和干菌丝体多糖含量综合较高的培养基.通过精选15个培养基配方进行了液体摇瓶发酵试验.结果表明:筛选出的4号作为最适培养基,其菌丝体干重得率为23.32g/L,干菌丝体多糖含量为4.27%.     

天蓝色链霉菌产十一烷基灵菌红素的发酵条件优化

通过对天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor ZB8）产十一烷基灵菌红素（Red）的摇瓶发酵条件进行的优化研究,初步确定了促使Red产率提高的培养基组成及培养条件,包括研究接种量、碳源、氮源、氨基酸、无机盐及初始pH等对Red合成的影响,并通过正交试验获得了最适培养基组组成.用该培养基培养Stre...     

女贞（Ligustrun lucidum Ait）内生真菌抑菌活性及发酵条件初探

从女贞茎、叶中分离到21株内生真菌,分别用PDA,YPD和NHK培养基摇瓶发酵培养后获得各菌株发酵液,以E.Coli,B.Subtilis作为测试菌株,寻找最优化产次生代谢产物的发酵条件,综合抑菌活性分析后得出,女贞内生真菌液体培养的最适碳源是蔗糖和淀粉,最适氮源是胰蛋白胨,摇瓶速度为120r/min,瓶装量为70ml/250ml,最适pH7.0,培养时间12天.     

茶薪菇液体发酵条件的研究

采用液体摇瓶培养法,对茶薪菇液体发酵的培养基pH、最适温度、摇瓶装量、摇瓶转速及不同液体培养基配方进行了探讨,结果表明,茶薪菇液体发酵的培养基初始pH为6.0-6.5,最适温度为25℃,摇瓶装量为50-70ml/250ml三角瓶,摇瓶转速为120-150rpm,最适培养基配方为以麸皮为主要成分的培养基。     

假蜜环菌产胞外多糖发酵的初步研究

在摇瓶和２１发酵罐水平上，研究了假蜜环菌产胞外多糖的发酵情况，并建立了一套方便可靠的检测方法。在摇瓶发酵中，探讨了培养基初始ｐＨ、初始糖浓度、装液量及钙离子等因素对假蜜环菌产生胞外多糖的影响，得出的优选条件为初始ｐＨ５．０，初糖浓度５％，每个５００ｍｌ瓶装液１００ｍｌ及添加１％碳酸钙。优选条件下在２１发酵罐中经７ｄ发酵后，胞外多糖产量可高达３．９９ｍｇ／ｍｌ。有关假蜜环菌胞外多糖的发酵研究，尚未见有报道。     

腺苷发酵液中有机酸的代谢规律

选取了优化过程中典型的3种含有不同碳源的培养基配方(其中配方A中含有100g／L葡萄糖,配方B中含100g／L蔗糖,配方C中含100g／L蔗糖和10g／L谷氨酸),进行摇瓶发酵生产腺苷(AR),以测定发酵液的生化参数。通过研究发酵液中的有机酸与腺苷的积累在时序性上的代谢规律,在此基础上提出了通过增强TCA循环为手段以提高目的产物产量的观点,即TCA强化论假说。     

虎奶菇Pleurotus tuber-regium深层发酵的研究

报道了虎奶菇Pleurotus tuber-regium深层发酵的最适培养基和摇瓶发酵条件.试验结果表明,Pleurotus tuber-regium对单糖、双糖、多糖和糖醇都有一定的利用,但葡萄糖、麦芽糖等对菌丝生长效果较好;酵母粉、黄豆饼粉等蛋白质含量高的氮源对菌丝的生长较为有利;通过k9(34)正交试验确定了Pleurotus tuber-regium发酵的最适培养基为:5%葡萄糖,0.4%酵母粉.0.1%KH2PO4,0.3%MgSO4·7H2O,0.001%VB1及微量NaCl;一定浓度内Na+对茵丝体生长有促进效果.最适的摇瓶发酵条件为:培养基起始pH7.0,培养温度32℃,接种量15%,摇床转速150r/min,250mL三角瓶最适装液量为70mL,发酵周期为6d.     

培养条件对毛霉胞内代谢产物稳定性的影响研究

试验初步探讨了毛霉培养条件对其胞内代谢产物稳定性的影响。以单一菌株为研究对象,探讨了培养基、接种量、培养时间、培养温度、摇瓶速度等因素对菌株胞内代谢产物HPLC图谱的影响,分析各因素的影响大小,建立了规范化的培养流程:选用马铃薯制作马铃薯葡萄糖培养基,按每支18×180 mm试管装载30 m L进行分装,灭菌后接种2 m L的孢子悬液,在温度设为20℃的恒温摇床中以150 r/min摇瓶速度摇瓶培养4 d后取出。     

灵芝菌丝体液体发酵培养产灵芝多糖的动态研究

对灵芝（Ｇａｎｏｄｅｒｍａｌｕｃｉｄｕｍ）摇瓶发酵培养产灵芝多糖的过程进行了研究．通过研究发酵过程中ｐＨ,总糖、还原糖、氨基酸态氮等的变化,初步确定了灵芝多糖摇瓶培养的优化条件     

细脚拟青霉产胞外抗氧化活性成分培养基的优化

采用液体摇瓶培养的方法,以DPPH自由基清除率为指标,对一株细脚拟青霉产胞外抗氧化活性成分培养基进行了优化.确定了其产抗氧化活性物质的最佳培养基.结果表明最佳培养基为:碳源为蔗糖和麦芽糖组成的复合碳源;氮源为酵母浸出粉;微量元素及生长因子为KH2PO4、柠檬酸铵和VB;正交实验结果表明最佳培养基配方为蔗糖2%、麦芽糖1%、酵母浸出粉1.5%、KH2PO4 0.5%、柠檬酸铵0.04%、VB 0.03%.培养基优化后,该菌株发酵液中代谢产物的扰氧化活性可达73.47%.     

嗜碱芽孢杆菌耐热耐碱内切木聚糖酶基因的密码子优化及在毕赤酵母中的表达

【目的】研究极端耐热耐碱的木聚糖酶,使其能够满足造纸行业中碱性高温的苛刻环境。【方法】将一种来源于嗜碱芽孢杆菌S7的耐热耐碱内切木聚糖酶基因(xyn10A)密码子进行优化,基因合成后克隆至pHBM905BDM载体上,并转化毕赤酵母GS115菌株。【结果】木聚糖酶基因(xyn10A)优化后与原始序列比对相似性为76.70%。基因合成后克隆到pHBM905BDM载体上,并成功转化毕赤酵母GS115菌株。通过交联木聚糖底物平板水解圈法初筛及摇瓶复筛得到一株产酶量较高的菌株,且其在摇瓶发酵第10天达到最高酶活力,为495U/mL。另外,糖基化分析表明该酶在毕赤酵母中表达时被糖基化修饰。【结论】密码子优化后的极端耐热耐碱木聚糖酶基因在毕赤酵母中成功表达。     

香菇UGPase酶活性及转录表达水平对不同碳氮源的响应

【目的】尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 (UDP-glucose pyrophosphorylase,UGPase)是糖代谢途径中的关键酶,在生物体次生代谢产物合成过程中具有重要的作用,对其进行深入的研究,将有助于阐明糖代谢的分子机制。【方法】本实验以香菇新808为实验材料,设置不同的碳、氮源对香菇菌丝体进行液体发酵培养（25 °C,30天）,烘干菌丝体称取其生物量,利用苯酚-硫酸法测定菌丝体胞内多糖含量,通过荧光实时定量PCR检测不同碳氮源下菌丝体ugp基因的相对表达量,同时测定UGPase酶活性。【结果】结果表明,与普通PDA培养基比较,除以硝酸铵为氮源外,其余碳氮源均能提高香菇菌丝体生物量,其中以麦麸为碳源的生物量最大（0.63g）。以小分子糖（蔗糖、麦芽糖和甘露糖）为碳源、有机复合物（麦麸和黄豆芽）为氮源时,ugp基因表达量明显上调,UGPase酶活性更高,同时,其香菇菌丝胞内多糖的含量也更高。其中分别以蔗糖为碳源,以麦麸作为氮源时,ugp基因表达量、UGPase酶活性（分别为4043.80U/mg和3873U/mg）和菌丝胞内多糖含量（分别为3.60%和3.86%）最高,ugp基因表达量分别为对照组的8.19倍和6.52倍。【结论】香菇菌丝ugp基因转录表达水平、UGPase酶活性以及菌丝胞内多糖含量三者之间显示出较高的正相关性。小分子碳源（蔗糖、麦芽糖和甘露糖）、有机氮源（麦麸和黄豆芽）有助于香菇菌丝多糖的合成,其中蔗糖和麦麸可作为香菇液体发酵优势碳源和氮源。     

我国热带亚热带部分长石风化产物研究

综合应用Ｘ射线衍射、扫描电境、透射电镜及偏光显微镜等技术,研究了我国热带、亚热带地区花岗岩和片麻岩风化壳中的长石风化现象。研究区内的长石风化形式主要为化学风化,所形成的风化产物有０７ｎｍ埃洛石、高岭石、水云母类矿物、三水铝石、硅铝质凝胶等,其中以０７ｎｍ埃洛石分布最为广泛,三水铝石仅见于个别地区。０７ｎｍ埃洛石的形成经历了非晶质硅铝凝胶等中间相;高岭石的形成经历了水云母类矿物中间相;三水铝石的形成经历了非晶质硅铝凝胶或０７ｎｍ埃洛石等中间相。风化壳内部水溶液的物理化学性质、湿热的气候条件及母岩性质是影响风化产物形成的主要因素。     

高耐受性拜氏梭菌的离子束诱变选育

【目的】为了优化生物丁醇生产工艺,研究拜氏梭菌(Clostridium beijerinckii)对有毒物质的耐受性。【方法】利用常温等离子诱变技术选育获得1株突变株C.beijerinckii GZ-9,并通过摇瓶发酵对比原始菌株C.beijerinckii NCIMB 8052和突变株GZ-9对有毒物质的耐受性。【结果】NCIMB 8052在酚浓度为1.5g/L的发酵液中已不能生长,而GZ-9在酚浓度2.4g/L的发酵培养基中生长良好;当可溶性总酚浓度为1.5g/L时,实验总溶剂产量和丁醇产量分别达9.2g/L和6.5g/L。【结论】突变株GZ-9对未脱毒甘蔗渣酸解糖液中毒素物质的耐受性远高于原始菌株NCIMB 8052。