人抗增殖蛋白Tob与其配体蛋白的相互作用及功能研究

抗增殖蛋白Tob作为BTG/TOB家族成员之一,对细胞增殖与mRNA降解具有重要作用.在磷酸激酶Erk1和Erk2的作用下,Tob中的3个丝氨酸位点可以进行磷酸化.已有大量研究表明Tob通过与去腺苷酸化酶中的核糖核酸酶D家族成员之一的Caf1相互作用于mRNA 3′端,共同组成去腺苷酸化酶复合体.同时,Tob对胞质多聚腺苷酸化因子结合蛋白3(CPEB3)对蛋白表达的负调控具有抑制作用.并且,Tob可以与多聚腺苷酸结合蛋白(PABP)相互作用,促进细胞内mRNA脱腺苷化.通过对Tob的3个参与磷酸化的丝氨酸位点进行突变,分别研究了人源野生型与丝氨酸突变型Tob对其与人源Caf1,PABP及CPEB3相互作用及多聚腺苷酸降解过程的影响.     

利用质谱技术鉴定寨卡病毒非结构蛋白NS1的细胞内相互作用蛋白

寨卡病毒(Zika Virus)属于黄病毒科中的黄病毒属,虽然很早就已经被人类所发现,但是一直到2015年在南美巴西的大规模爆发,才引起了广泛的关注.寨卡病毒对人类的感染往往引起包括小头畸形和格林-巴利综合征在内的多种症状.寨卡病毒的基因组为单链正链RNA,其基因组可以编码翻译并剪切加工出3个结构蛋白,分别为膜蛋白,囊膜蛋白和核衣壳蛋白,以及7个非结构蛋白(NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B, NS5).相关研究已经证明,NS1蛋白与同属黄病毒属的登革病毒的发病有紧密的联系,而且根据其蛋白结构推测其可能与寨卡病毒穿越血脑屏障有关.因此鉴别NS1与细胞内的相互作用蛋白对于发现寨卡病毒在细胞内的转运,转录,以及装配都有重大的意义.在此,该课题构建并在HEK293细胞中表达包含Flag和Strep两种标签的NS1融合蛋白,通过免疫沉淀的方法将与NS1结合的蛋白利用标签蛋白进行分离,利用高分辨生物质谱技术,对蛋白进行分析鉴定.通过分别带有Flag与Strep标签的相互作用蛋白分析,发现了16个两种标签共同的结合蛋白,其进一步的通路分析证明这些蛋白于与病毒转录、病毒复制和免疫反应多个通路有关,相关的研究结果为今后进一步研究寨卡病毒的复制机制以及开发抗病毒药物提供了重要的参考价值.     

黑啤中浑浊和泡沫蛋白性质初探

泡沫是啤酒的重要特征,泡沫蛋白是构成啤酒泡沫的骨架,泡沫蛋白的含量和性质在一定程度上决定了啤酒泡沫的质量。啤酒是一种成分复杂的胶体溶液,其稳定性较弱,啤酒在贮藏中极易产生浑浊沉淀,浑浊蛋白是构成啤酒浑浊的重要成分之一。以黑啤为原料,根据SDS-PAGE原理,按浓缩胶5%,分离胶12%,浓缩电压75V,分离电压120V,分离时间3h,分析啤酒泡沫蛋白和浑浊蛋白的分子量范围。结果表明:啤酒泡沫蛋白的分子量为42.4k Da和14.1 k Da,啤酒浑浊蛋白的分子量分别为47.72k Da、42.08k Da、36.57k Da、32.44k Da、28.02k Da,两者蛋白的分子量之间有一定交集。为进一步分析啤酒中浑浊活性蛋白与泡沫蛋白的相关性提供基础数据。     

牛泡沫病毒BBet抑制BTas反式激活功能负调控病毒复制

泡沫病毒(foamy virus, FV)属于反转录病毒科中的泡沫病毒亚科、泡沫病毒属.其基因组除编码结构蛋白Gag、Pol及Env外,同时还编码2个非结构蛋白Tas和Bet.Tas是泡沫病毒的正调控蛋白,通过结合在病毒启动子上游的DNA调控元件上正调控病毒基因表达.Bet对病毒复制具有一定的负调控作用,但作用机制尚无报道.利用实验室筛选得到的牛泡沫病毒(bovine fomay virus, BFV)3026可释放株(BFV-Z1),采用不同感染复数(0.01及0.1)感染BFV Bet(BBet)稳定表达细胞系及对照细胞系,分析传代后病毒滴度,确证BBet抑制BFV复制;分析BBet对病毒启动子活性的影响,发现Bet对BFV的2个启动子LTR和IP本底活性影响较小,但BBet可抑制BFV Tas(BTas)对BFV的LTR和IP启动子的反式激活.进一步机制分析发现BBet未显著影响BTas的细胞定位,也不能直接结合启动子上游BTas相关应答序列,推测BBet可能通过抑制BTas结合启动子应答元件之后的分子事件,如募集转录复合物等过程负调控病毒复制.     

人泡沫病毒GAG、ENV蛋白的原核表达、抗血清制备及鉴定

构建了HFV的GAG和ENV蛋白原核表达载体pET-32a-gag和pET-32a-env,转化E.coli BL21Star(DE3)后用IPTG诱导出高水平的GAG、ENV融合蛋白表达.以融合蛋白免疫新西兰兔制备了GAG和ENV抗血清.Western Blot检测表明,抗血清可以识别原核表达的GAG和ENV蛋白,说明抗血清具有较好的特异性.结合Western Blot和间接免疫荧光实验,表明抗血清可以检测到病毒表达的GAG和ENV蛋白.     

头孢唑啉钠与木瓜酶相互作用初探

利用光谱、分子模拟研究头孢唑啉钠和木瓜酶之间的作用。给体-受体间距离为r=1.53nm。当温度为298K时,结合常数为1.79×104 L·mol-1;△S0=45.56J·mol-1·K-1。同时发现,荧光猝灭的主要原因是静态猝灭。分子模拟结果:作用力主要为氢键,范德华力及疏水作用。另外,头孢唑啉钠的氨基氢与甘氨酸氧之间氢键键长为1.91。     

蛋白亚基局部相互作用模拟构筑二十面体病毒衣壳

二十面体病毒衣壳结构蛋白具有不同的构象。装配过程中,正在附着的蛋白亚基构象与位置在先前蛋白亚基构象的指令下,发生相应的调整后装配到衣壳骨架上。局部相互作用指导下的装配反复进行,最终形成规整的二十面体病毒衣壳的立体结构。对T=1、3、4、7的病毒衣壳,分别建立了蛋白亚基构象局部相互作用的连接方式与增长方式,并构筑了T=4、7的立体模型。     

小反刍兽疫病毒蛋白及其功能研究进展

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒引起的一种烈性传染病,呈高发病率和高死亡率,给小反刍动物的养殖及国家的经济贸易带来巨大的经济损失.目前,该病在我国已经发生,应引起重视.介绍了小反刍兽疫病?　 毒的蛋白及其功能等方面的研究进展.     

新型呼肠病毒S1基因与宿主细胞相互作用的初步研究

摘要 目的 筛选出新型呼肠病毒S1基因和宿主相互作用的关键区段,为后续的宿主受体蛋白筛选工作提供可靠的基础。 方法 将编码全长S1基因,以及N端和C端阅读框分别克隆入真核表达载体pIRSE2-EGFP,转染敏感细胞株鼠成纤维细胞（L929）和人宫颈癌细胞（Hela）后,通过荧光报告基因EGFP的表达分析,筛选出S1基因与宿主细胞相互作用时起决定性影响的区段。 结果 同等量的3种真核表达质粒在单独转染L929时,pGSN质粒转染后荧光表达量最大,pGSC质粒转染后荧光表达量最小。 不同比例混合的pGS与pGSN进行共转染时,pGSN在转染质粒中的比例越高,荧光表达量也越高。 在Hela细胞中的转染结果与L929相同。 结论 新型呼肠病毒R4株的S1基因N端阅读框编码区（62-406bp）在S1基因转染时起关键作用。     

Ran结合蛋白RanBP1的生物学功能及研究进展

RanBP1是RanGTPase循环过程中的关键调节因子,参与细胞核质运输、中心体的装配、微管的聚合、纺锤体的组装以及核膜的重建等.RanBP1表达量异常影响染色体的正常分离,使细胞分裂异常,导致细胞凋亡,甚至引起肿瘤发生.研究证实在多种肿瘤组织细胞中RanBP1表达量异常增高.本文综述了RanBP1氨基酸序列信息以及晶体结构信息,对RanBP1的生物功能以及在不同肿瘤中的表达情况进行了总结分析,探讨了RanBP1作为抗肿瘤药物潜在靶标的可能性.     

人类ARRB1和GNMT蛋白相互作用的初步研究

GNMT(甘氨酸-N-甲基转移酶,glycine N-methyltransferase)是人体内一个多功能蛋白.最近研究发现GNMT是一个潜在的抑癌基因,但GNMT抑癌的机理却不清楚.研究以GNMT为"诱饵",利用酵母双杂交系统筛选人肝cDNA文库,获得了GNMT的一个相互作用蛋白ARRB1(-βarrestin1),并通过GST Pull-down、免疫共沉淀的方法在体内体外验证了相互作用的特异性.进一步研究发现GNMT和ARRB1的相互作用不依赖于GNMT的四聚体高级结构和甲基转移酶活性.免疫荧光共定位实验发现,当ARRB1与GNMT共转染HeLa细胞后,ARRB1蛋白的亚细胞定位发生改变,表现出与GNMT蛋白共定位,有入核的趋势.这为研究GNMT的抑癌作用机理提供了新的线索.     

蛋白翻译后SUMO化修饰在动脉粥样硬化中的作用与机制

动脉粥样硬化是过程复杂的慢性炎症性疾病,涉及内皮激活、内皮功能障碍和局部炎症反应等多个关键病理步骤.小分子类泛素修饰因子(small ubiquitin-like modifier,SUMO)化修饰是真核细胞中常见的较新发现的蛋白翻译后修饰,参与多种细胞进程生物学事件,如DNA的转录活性细胞增殖分化、蛋白质的稳定性和定位细胞凋亡以及细胞信号转导等.近期研究发现, SUMO化在动脉粥样硬化发生发展的多个环节中起到重要的调控作用.针对动脉粥样硬化上述几个过程中涉及的蛋白翻译后SUMO化修饰对病程发展的调控作用及其机制的研究现状作一综述.     

GST pull-down技术验证CIPK7蛋白激酶与CBL1蛋白的相互作用

采用DNA重组技术,构建pGEX-4T-3-CIPK7和pET28-CBL1蛋白表达载体,转化大肠杆菌并诱导表达目的蛋白,利用亲和层析纯化法纯化GST标签、His标签融合蛋白,通过GST pull-down试验验证CIPK7与CBL1之间的相互作用.成功构建了CBL1和CIPK7的重组质粒,经诱导表达及纯化获得了可溶性GSTCIPK7和CBL1-His融合蛋白,GST pull-down试验证实了CBL1能够与CIPK7结合.CIPK7蛋白与CBL1蛋白之间存在直接的相互作用,为进一步研究蛋白激酶CIPK7的功能奠定了基础.     

果蝇NOMPC相互作用蛋白的筛选与鉴定

NOMPC是果蝇感受触觉的机械力敏感离子通道,属于瞬时受体电位(TRP)离子通道家族,机械力敏感离子通道通过怎样的机制被机械力激活?与NOMPC相互作用的蛋白有哪些?为了研究这些问题,本研究从果蝇NOMPC全长cDNA中扩增得到其N端的29个锚蛋白重复序列(ARs),ORF长度为3 039bp.然后将这29个ARs构建到表达载体pUAST-EGFP上,转染果蝇S2细胞后,通过免疫沉淀、质谱分析和Western blot筛选和鉴定NOMPC相互作用的蛋白,实验筛选出NOMPC N端的29ARs和NOMPC全长的相互作用蛋白,通过免疫共沉淀(Co-IP)实验,对可能与NOMPC存在相互作用的蛋白质进行验证,鉴定出Annexin B9、CG3195、CG3731、CG5374与NOMPC存在相互作用,为进一步研究NOMPC介导触觉转导的分子机制提供了基础.     

盐酸环丙沙星与卵清蛋白相互作用的研究

蛋白质与内源性化合物及许多药物分子之间可以发生相互作用而结合为复合物.目前,利用光谱法对此方面的研究主要针对血清白蛋白[1],对于其它蛋白质的研究很少.     

B2SINE RNA和HEXIM1蛋白相互作用的研究

构建了带FLAG多肽标签的hHEXIM1( HMBA-inducible protein 1)蛋白真核表达载体,在人胚胎肾细胞(human embryonic kidney 293 cells,HEK293 cells)中检测蛋白表达正确后,将该质粒转入小鼠的成纤维细胞(NIH3T3细胞)中,进行anti-FLAG的免...     

夏德拉克的酒神原型初探

托尼·莫里森善于运用圣经故事和希腊神话原型作为作品叙事的催化剂。她的小说《秀拉》描写了种族和性别歧视下黑人女性秀拉成长的经历。而黑人男性夏德拉克则是秀拉的精神伴侣。本文拟从神话原型视角论证夏德拉克是希腊神话中酒神狄奥尼索斯的原型置换。     

宿主细胞泛素系统与病毒相互作用的研究

真核细胞中,泛素系统执行对大多数短周期寿命蛋白的选择性降解,且已发现由泛素介导的对蛋白的降解调控在细胞的多种生命过程中起重要作用。病毒侵染宿主细胞后,细胞的泛素系统与一些重要的病毒蛋白相互作用,参与调节病毒的生活周期,如病毒迁移,核酸复制,免疫逃避,出芽等过程。     

17β-雌二醇及类似物与功能单体的相互作用

考察了17β-雌二醇（17β-E）及结构类似物与甲基丙烯酸甲酯（MMA）、甲基丙烯酸（MAA）和三氟甲基丙烯酸（TFMAA）等六种单体的相互作用。分别用紫外光谱 （UV）、红外光谱 （IR）和高效液相色谱 （HPLC）表征了用各单体的乙腈溶液分别与模板的相互作用和用沉淀聚合的分子印迹聚合物（MIP）的特性。结果表明,在全紫外聚合中,印迹17β-E 的TFMAA-co-TRIM聚合物的O—H振动吸收峰红移出现在聚合16h之后,C==O振动吸收峰则在聚合24h后发生红移。三种测试方法均证实TFMAA对17β-E有强相互作用,TFMAA-co-TRIM对雌二醇异构体（17β-E/17α-E）的印迹因子（IF）达到了3.01,分离因子α为2.28,具有良好的选择性。利用紫外法可初步检测各单体的乙腈溶液与模板相互作用强弱,再合成MIP,进行IR和HPLC表征,有助于筛选到对17β-E及结构类似物具有强相互作用的功能单体。