Curcin和curcin C与腺嘌呤互作位点的比较分析

麻疯树核糖体失活蛋白curcin和curcin C均具有抗肿瘤活性,但后者的活性水平显著高于前者,为了探索造成这一差异的结构基础,本文采用在线的同源建模预测软件SWISSMODEL,对两种麻疯树核糖体失活蛋白curcin、curcin C的三维结构模型进行预测,采用SYBYL对预测模型进行能量最小化优化,采用PROCHECK、VERIFY 3D和ERRAT软件对优化前后的模型进行质量评估,随后采用AutoDock软件将预测的模型与腺嘌呤进行分子对接分析.结果显示,两种蛋白采用与Ricin A类似的方式与腺嘌呤相互作用,但在相互作用的氨基酸残基种类、数量以及形成的氢键和疏水相互作用上还是存在差异,其中,curcin C与腺嘌呤具有最强的结合能力,curcin则最低.     

间接酶联免疫法检测麻疯树核糖体失活蛋白

建立了基于单克隆抗体的间接非竞争酶联免疫法用于检测麻疯树核糖体失活蛋白的含量.优化单克隆抗体最佳工作浓度为312.5ng/mL,辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG最佳工作浓度为200ng/mL.该方法的线性范围为25~300ng/mL,线性回归方程为y=0.0024x+0.0322,相关系数R2=0.9985,定量检测限25ng/mL,定性检出限3.0336ng/mL.试验证明该方法准确度较高,且具有较好的重复性和特异性,可以用于实际检测麻疯树种仁核糖体失活蛋白的含量.     

川滇琼地区麻疯树种子核糖体失活蛋白资源调查

本研究对西昌、攀枝花、仁里、海口、三亚、东方六地的麻疯树种子进行资源调查研究,结果显示六个地区麻疯树种子胚乳核糖体失活蛋白含量均值为1.8770~2.5602mg/g,由高到低依次为西昌、三亚、海口、仁里、攀枝花、东方,且地区间差异较大.各地区内部种子胚乳核糖体失活蛋白含量数据分析显示,仁里地区种子胚乳核糖体失活蛋白含量变异系数最大,为14.6189;海口地区的变异系数最小,为7.1876.麻疯树种子性状相关性分析结果显示胚乳核糖体失活蛋白含量与百粒重、出仁率值在0.01水平上没有相关性,与含油率相关性不显著,与可溶性蛋白含量在0.01水平上低度负相关.综合各项指标认为西昌地区的麻疯树种子核糖体失活蛋白含量较高,可作为现阶段核糖体失活蛋白应用的材料来源之一.     

麻疯树核糖体失活蛋白curcin基因的原核表达及其抗真菌活性的研究

通过PCR方法,将麻疯树核糖体失活蛋白curcin的开放阅读框片段从麻疯树总DNA中扩增出来.并将该克隆基因片段连接到原核表达载体pQE-30中,成功构建了重组质粒pQE-C,转化大肠杆菌M15菌株.经IPTG诱导后,curcin重组蛋白在大肠杆菌中成功表达.然后通过纯化原核表达产物,得到纯化的curcin重组蛋白,并以纸片法进行体外抗菌活性检测,发现其具有较强抗真菌活性.     

两种麻疯树核糖体失活蛋白基因Curcin和Curcin C在种子萌发过程中的表达模式研究

为了研究和开发丰富的麻疯树资源,本研究以四川省西昌市金沙江干热河谷地区的麻疯树种子为材料,将种子浸水萌发后收集各组织用于实验。qRT-PCR结果显示胚乳中Curcin、Curcin C基因表达先增加后减少,在子叶中Curcin C基因的表达也是如此。Western Blot结果显示Curcin蛋白在根、下胚轴、真叶、子叶中不表达,Curcin C蛋白在根和下胚轴中也不表达,而在真叶、子叶中表达。生物信息学软件预测及亚细胞定位结果都显示Curcin:GFP和Curcin C:GFP融合蛋白定位在细胞壁上。本研究初步阐明了两种麻疯树核糖体失活蛋白Curcin、Curcin C的表达模式并对其进行了亚细胞定位。     

麻疯树(Jatropha curcas)毒蛋白curcin基因家族成员的分离和描述

麻疯树curcin基因家族中4个成员通过PCR扩增被分离．它们都不合有内含子,序列分析表明它们编码Ⅰ型核糖体失活蛋白（Ribosome-Inactivating Proteins,RIPs）,证明curcin基因如同大多数RIPs一样由多基因家族编码．四个curcin基因家族成员和另两个已知curcin基因家族成员的开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）的序列比对结果显示curcin基因家族成员至少可分为两个亚类群,亚类群之间的氨基酸序列相似性低于88％．分别将这4个curcin基因家族成员命名为curA2、curA3、curB2、curB3．对四条基因启动子区和ORF生物信息学分析推测CurB2、curB3可能是被真菌及逆境诱导的curcin基因家族成员全长,而curA2、curA3可能是麻疯树胚乳贮存的curcin基因家族成员全长．Southern杂交结果显示,麻疯树基因组中至少有3个以上curcin基因家族成员．     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的基本性质研究

经硫酸铵分级沉淀、SP-Sepharose FF离子交换层析、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Superdex 75分子筛层析从苦瓜籽中纯化出苦瓜核糖体失活蛋白.纯化的蛋白经IEF、梯度PAGE、SDS-PAGE和Periodate-Schiff分析均为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带.根据SDS-PAGE计算其相对分子量为3.0×104 Da,IEF显示其pI为9.0.N端测序结果为Asp-Val-Ser-Phe-Arg.采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)和圆二色谱(CD谱)对纯化RI     

丝瓜核糖体失活蛋白的研究进展综述

丝瓜核糖体失活蛋白是一类具多种生物学功能和活性的蛋白,本文在阐述了该类蛋白的理化性质的同时，综述了该类蛋白的酶学机制、活性位点和用做免疫毒素等方面的研究进展。     

苦瓜籽核糖体失活蛋白的基本性质研究

采用 Affi- Gel亲和层析和 Sephacryl S- 10 0分子筛层析等方法获得苦瓜籽核糖体失活蛋白 (RIP) ,经 SDS- PAGE,PAGE,IEF和 PAS方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带 .根据 SDS- PAGE测得表观分子量为 30 0 0 0 ,经 IEF- PAGE结果计算其 PI为 9.0 ,对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显 ,其 IC50 为 5.3× 10 -10 mol/ L左右 .体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞 ,Vero,SP2 / 0 ,3T3,Kb,Navana,S- 180等肿瘤细胞株和麻疹病毒均表现有不同程度的抑制作用 ,而对完整人胚肺二倍体细胞却毒性极小 .     

麻疯树毒蛋白对小鼠器官的急性毒性研究

研究麻疯树毒蛋白(curcin)对小鼠器官的急性毒性作用.用一定浓度梯度20、25、31、38.4、48、60×10-3g/kg的蛋白溶液腹腔注射小鼠,并用Bliss方法计算出其腹腔给药的半数致死量(LD50)为37.70×10-3g/kg,95%可信限为(33.228~43.151)×10-3g/kg.对用药小鼠器官进行病理切片研究,结果显示20×10-3g/kg的用量几乎未见对器官的异常影响,在(25～48)X 10-3 g/kg范围内对小鼠的重要器官损伤较小,部分器官如肝、肾、肺见灶性水肿充血;当给药剂量达到60X10-3g/kg时观察到肝脏细胞肿胀、出血明显,肺部充血出血、灶性区域纤维素渗出,胰腺明显充血、有部分个体出现胰腺脂肪变,部分个体的肾出现弥漫性充血.这为麻疯树毒蛋白制备免疫毒素的应用提供了参考.     

麻疯树毒蛋白(curcin)基因转化水稻的研究

以粳稻(Japonica)品种日本晴与中花11号为材料,对影响农杆菌介导水稻转化体系的几个因素进行了研究,建立了农杆菌介导的有效水稻转化体系.在该体系中,首次使用浓度为10-4g/mL嘌呤合成抑制剂acivicin在转化前对水稻愈伤组织进行预处理,结果表明此法可有效提高GUS基因的瞬时表达率.同时,利用插入了麻疯树毒蛋白(curcin)基因的植物表达质粒pBI121-curcin,通过农杆菌介导转化水稻,获得了多株转基因植株.通过PCR鉴定,证实curcin基因已整合到水稻基因组中.     

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western-blot鉴定

麻疯树外植体愈伤组织中毒蛋白的Western blot鉴定戎　芳1,2,王胜华1,赵小光1,郭　亮1,魏　琴1,唐　琳1,徐　莺1,陈　放1, (1.四川大学生命科学学院,成都610064;2.安徽大学生命科学学院,合肥230039)麻疯树(JatrophacurcasL.)系大戟科麻疯树属植物,耐干旱贫瘠,抗病虫能力强[1,2],主要生长在热带和亚热带地区,在我国西南地区有丰富的资源.麻疯树种子对整体动物,如小白鼠[3]、羊[4]及人,特别是幼儿[5]表现出一定的毒性,且具有致死作用.麻疯树种子含毒成分主要是种子毒蛋白(curcin),该蛋白是一种单链核糖体失活蛋白,具抗癌活性[6],是一种具开…     

New terpenoids from the roots of Jatropha curcas

Two new sesquiterpenoids,(1S,2R)-dihydroxycycloax-4(15)-ene(1),14-dehydroxyl daucucarotol(2),and one new rhamnofalane diterpenoid,2-hydroxy-3-dehydroxycaniojane(3),together with two known compounds,curcusone D(4) and curcusone C(5),were isolated from the roots of Jatropha curcas.The chemical structures of these compounds were established by chemical methods and extensive 1D-and 2D-NMR spectroscopic data analyses.     

麻疯树的促腋芽分枝快繁及生根诱导

为了保存、推广和改良麻疯树的种质,对麻疯树进行了促腋芽分枝和生根诱导实验.发现KT、2,4-D的激素搭配适于诱导愈伤;培养基MS+1.0 mg/L BA+0.01 mg/L IBA+5.0mg/L AgNO3的腋芽分枝效果较好;pH值的变化对腋芽分枝的影响不大;采用瞬时高浓度生长素刺激或者无激素的活性炭培养基都能得到92%以上的生根率.     

麻疯树过氧化氢酶的分离纯化

麻疯树种仁经抽提、硫酸铵盐析、Phenyl Sepharose CL-4B层析、DEAE-Sepharose F.F.层析,获得了纯化的麻疯树过氧化氢酶(CAT).该酶比活力为69.23 U/mg,纯化倍数为37.63倍.经Sephacryl S-300 HR测定,该酶表观分子量为232 kD,SDS-PAGE显示为一条分子量为59 kD的条带,表明该酶是由四个相同的分子量为59 kD的亚基组成.经等电聚焦测定该酶的等电点为4.7.经过温度和pH考察,该酶最适温度为30℃,最适pH为7.0.Mn~(2+)对酶活有促进作用,Zn~(2+)、Cd~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Co~(2+)有抑制作用.6×10~(-3)mmol/L NaN_3以及0.9 mmol/L KCN能使酶活丧失.该酶的V_(max)和K_m分别为5 U/mL·min,1.5 mmol/L.     

麻疯树开花数量大小及其生态适应性

采用随机取样和跟踪调查的方法,对不同立地环境下,半野生麻疯树前两次开花时开花数量大小及其座果特征进行了比较研究。结果表明：麻疯树雄性花序和两性花序分别 着生于多年生老枝和1年生小枝上,两性花序的产生量占有绝对优势,常为雄性花序的1.8~17倍;两性花序中,雌花朵数量相对较少,且变化较大,单个两性花序中常有1~25朵雌花 ,而雄花朵大量产生,常为雌花数量的10~20倍;同时,麻疯树座果率较高,且相对稳定,平均可达90 %以上,而单个果实平均可产2.6~2.9粒种子。立地环境和开花时间对麻疯树 雄性花序、两性花序以及两性花序中雄花朵和雌花朵的产生数量均存在着显著影响。两性花序大量发生保证了在可利用资源有限时雌性功能的加强,是非常有利的生殖策略;而雄 性花序以及两性花序中雄花的适应意义可能大于其功能作用,大量雄花的产生对其吸引昆虫传粉更为有利。     

柴油机燃用小桐子油喷油及性能分析

通过发动机台架试验,在一台ZH11l5直喷式柴油机上直接燃用小桐子油,进行了喷油、燃烧以及排放试验.主要测量在标定转速为2 200r·min-1和最大转矩转速为1 760 r·min-1下的不同负荷的缸内燃烧压力、油管泵端压力以及NOx排放和烟度排放,并与燃用柴油时进行了对比分析.结果表明:小桐子油与柴油相比,相同工况...