棉铃虫组织蛋白酶B在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

以棉铃虫（Helicoverpa armigera）组织蛋白酶B作外源基因重组构建克隆载体,自重组菌株HCB-DH10Bac、Histag-HCB-DH10Bac中提取穿梭质粒,脂质体法转染草地贪夜蛾卵巢细胞系Sf21细胞,转染液再感染细胞,收集感染3～4d的上清液,提取芽生病毒的DNA,PCR法鉴定外源HCB基因,感染上清进行SDS-PAGE、Western-blotting、蛋白酶活性检测．结果：感染上清中的芽生病毒的DNA作模板扩增出预期的1700bp片段,SDS-PAGE、westem-blotcing检测均在28ku处有明显表达产物,且表达产物有蛋白水解活性．     

2-十三烷酮和槲皮素诱导棉铃虫谷胱甘肽 S-转移酶组织特异性表达

利用分光光度酶动力学和定量PCR的方法,从蛋白质水平和基因水平上研究了棉铃虫幼虫谷胱甘肽S-转移酶(GST)的组织特异性表达和植物次生物质的诱导表达作用.结果表明,以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为底物检测到的棉铃虫幼虫不同组织GST的活性与其GST mRNA相对表达量的趋势是一致的.酶动力学活性测定结果表明的棉铃虫各组织GST活性大小的顺序与定量PCR结果表明的各组织GST mRNA相对量大小的顺序都依次为:脂肪体、中肠、头和体壁.通过培养基混药法研究植物次生物质对棉铃虫幼虫GST的诱导表明,2-十三烷酮和槲皮素对棉铃虫幼虫GST活性的诱导与其对mRNA表达量的影响是一致的.2-十三烷酮对GST活性及其GST mRNA表达量的诱导作用比槲皮素强.说明mRNA的转录量增加是植物次生物质诱导GST活性增加的主要机制.该结果对于进一步研究植物次生物质诱导作用对棉铃虫对杀虫药剂敏感度的影响具有重要的意义.     

2-十三烷酮和槲皮素诱导棉铃虫谷胱甘肽S-转移酶组织特异性表达

利用分光光度酶动力学和定量PCR的方法，从蛋白质水平和基因水平上研究了棉铃虫幼虫谷胱甘肽S-转移酶（GST）的组织特异性表达和植物次生物质的诱导表达作用. 结果表明，以1氯2，4二硝基苯（CDNB）为底物检测到的棉铃虫幼虫不同组织GST的活性与其GST mRNA相对表达量的趋势是一致的. 酶动力学活性测定结果表明的棉铃虫各组织GST活性大小的顺序与定量PCR结果表明的各组织GST mRNA相对量大小的顺序都依次为：脂肪体、中肠、头和体壁. 通过培养基混药法研究植物次生物质对棉铃虫幼虫GST的诱导表明，2十三烷酮和槲皮素对棉铃虫幼虫GST活性的诱导与其对mRNA表达量的影响是一致的. 2十三烷酮对GST活性及其GST mRNA表达量的诱导作用比槲皮素强. 说明mRNA的转录量增加是植物次生物质诱导GST活性增加的主要机制. 该结果对于进一步研究植物次生物质诱导作用对棉铃虫对杀虫药剂敏感度的影响具有重要的意义.     

两种色型黄粉虫杂交后代过氧化物酶同工酶及超氧化物歧化酶活性的比较

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了黄粉虫两种色型杂交后代的三种虫态（老熟幼虫、蛹和成虫）的过氧化物酶同工酶,用NBT光化还原法测定了不同虫态的SOD活性。结果表明：黄粉虫幼虫-蛹-成虫过氧化物酶同工酶的酶活性均呈现强-弱-强的变化规律。杂交后代的各虫态,除雌蛹外其SOD活性均高于其自交后代的SOD活性;以黄色型黄粉虫为母本的雌、雄成虫和雄蛹的SOD活性较高,而以黑色型黄粉虫为母本的雌蛹和幼虫的SOD活性较高。     

椰子心叶和成熟叶片对椰心叶甲生育指标的影响

研究发现椰一but-甲[Brontispa longissima（Gestro）]各项生育指标与椰子[Cocos nucifera（Linnaeus）]叶片的生长阶段关系密切．统计表明：从幼虫到成虫整个阶段的存活率心叶较成熟叶片高,分别为81％和77％,椰心叶甲完成一个世代在心叶上需要58．54d,在成熟叶片上需要52．92d．叶片生长阶段对虫质量和蛹质量的影响表现为取食心叶较重,且大部分龄期的幼虫质量和蛹质量的差异均显著．椰子心叶和成熟叶片上的成虫的性比分别为n（雌）：n（雄）=1．27：1和n（雌）：n（雄）=1．17：1,平均产卵量为143．3粒和161．93粒,成虫寿命分别为189．14d和172．36d,椰子心叶和成熟叶上的实验种群趋势指数分别为56．55和56．45．     

浙江西天目山3种粉蝶属蝶类的形态

记录了浙江西天目山分布的粉蝶属Pieris Schrank3种蝴蝶,分别是东方菜粉蝶Pieris canidia,菜粉蝶Pieris rapae和黑纹粉蝶Pieris erutae．通过对幼虫、蛹、成虫外部形态和成虫雄性外生殖器特征的研究,得出了3种粉蝶多种区分点,并给出了幼虫、蛹、成虫翅面和成虫雄性外生殖器特征图．     

不同氰戊菊酯抗性水平棉铃虫越冬适应性的研究

本文利用人工诱导滞育的方法,对不同氰戊菊酯抗性水平的棉铃虫越冬蛹进行了比较研究．结果表明,氰戊菊酯抗性较高的棉铃虫滞育率低,越冬蛹期长,越冬死亡率高．     

寄主对棉铃虫(Helicoverpa armigera Hübner)越冬蛹抗寒能力的影响

通过对滞育蛹过冷却点的测定,初步明确寄主对棉铃虫的越冬抗寒性有影响,采自棉花的滞育蛹过冷却点低于采自玉米的滞育蛹,即前者的抗寒能力高于后者;但用抗虫棉喂养后的棉铃虫滞育蛹抗寒能力下降.     

中华稻蝗山西晋源种群乙酰胆碱酯酶生化特性研究

对中华稻蝗山西晋源种群五龄若虫和成虫进行了马拉硫磷敏感性的生物测定，同时对若虫和成虫的乙酰胆碱酯酶（ACHE）特性进行了比较研究，生物测定结果表明，晋源种群若虫的LD50值（4．94μg／g虫重）是成虫（2．44μg/g虫重）的2．02倍；有机磷抑制剂对该种群若虫和成虫的AChE的体外抑制研究表明，晋源成虫AChE对氧化毒死蜱、对氧磷、甲基内吸磷的敏感性比晋源若虫分别高1．39、1．34和1．24倍．乙酰胆碱酯酶动力学研究结果表明，若虫动力学参数Km值和Vmax值均较成虫为高；用乙酰硫代胆碱（ATC）做底物测定AChE活性，若虫AChE活性是成虫的1．22倍．中华稻蝗晋源种群若虫对有机磷抑制剂敏感性下降可能与其AChE活性的增高有关，而成虫与若虫之间AChE活性的差异可能与不同阶段虫体对马拉硫磷选择压力的差异有关。     

寄主对棉铃虫(Helicoverpa armigera Hübner)越冬蛹抗寒能力的影响

通过对滞育蛹过冷却点的测定 ,初步明确寄主对棉铃虫的越冬抗寒性有影响 ,采自棉花的滞育蛹过冷却点低于采自玉米的滞育蛹 ,即前者的抗寒能力高于后者 ;但用抗虫棉喂养后的棉铃虫滞育蛹抗寒能力下降     

组织蛋白酶L及其酶学特性研究

组织蛋白酶L很难通过常规的肌动球蛋白提取方法完全去除.由琼脂糖凝胶6B凝胶层析图谱显示,组织蛋白酶L的活性主峰明显偏离肌动球蛋白主峰,表明该酶是肌动球蛋白非结合型酶.凝胶柱层析后测定L型组织蛋白酶粗酶液(Lmix)的活性,结果表明Lmix的热稳定性与pH和温度密切相关,其最适pH为5.0,最适温度为45℃.在最适pH5.0时,Lmix的活性随NaCl浓度的增加而增大.专一性底物及酶激活剂、抑制剂影响研究表明,Lmix为内含巯基的半胱氨酸型组织蛋白酶.     

鱼类溶菌酶和组织蛋白酶研究进展

溶菌酶和组织蛋白酶在鱼类先天性免疫系统中发挥重要作用。溶菌酶是一种具有生物活性的、能水解粘多糖的无毒、无公害小分子碱性酶,参与机体多种免疫反应,在抵抗外来病原细菌、真菌、病毒或肿瘤入侵中起重要作用。组织蛋白酶是半胱氨酸蛋白酶家族的主要成员,参与机体的多种生理和病理活动,目前在细胞凋亡中的作用日益受到重视。本综述主要介绍近年来鱼类溶菌酶和组织蛋白酶在生物学功能、基因克隆、组织分布及重组蛋白功能活性的新研究进展。     

抗棉铃虫组织蛋白酶B单克隆抗体的制备及鉴定

分别以棉铃虫组织表达的组织蛋白酶B和基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B为抗原免疫BALB／c小鼠，选择血清抗体滴度高的免疫小鼠，取其脾细胞和Sp2／0骨髓瘤细胞进行细胞融合．经ELISA法筛选阳性克隆和有限稀释法克隆细胞，共获得分泌抗组织蛋白酶B的单克隆抗体杂交瘤细胞3株，分别命名为9D5，100E2和100H6．以ELISA法和Western blotting法对3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了特异性鉴定，其中9D5和100E2能够同时识别两种不同来源的组织蛋白酶B，而100H6只能识别基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B．     

Autophagy Plays a Potential Role in the Process of Sea Cucumber Body Wall ＂Melting＂ Induced by UV Irradiation

The changes of tissue appearances and structures in the process of UV-induced ＂melting＂ for sea cucumber （Stichopus japonicus） body wall were studied. And the localization and determination of acid phosphatase （ACP）, Cathepsin B and Cathepsin L activities were also investigated. The results show that the connective tissue was damaged with many hollows emerging and the regular collagen bundles were broken apart into irregular fragments. Margination of condensed chromatin at the nuclear membrane was observed. Both Golgi＇s body and endoplasmic reticulure swelled, curled, and eventually double- or multi-lamellar vesicles were formed. A number of autophagic vesicles distributed in all through the whole cytoplasm. ACP becomes more active after UV irradiation. The activities of cathepsin B and cathepsin L increased in UV-treated sea cucumbers and both achieved their maximum under certain conditions, It indicates that autophagy plays a potential role in the ＂melting＂ process for sea cucumber body wall induced by UV irradiation.     

拟松材线虫组织蛋白酶基因的RNA干扰及功能研究

【目的】揭示拟松材线虫组织蛋白酶基因bmcath1生物学功能。 【方法】采用dsRNA浸泡法对靶标基因进行基因干扰,观察拟松材线虫在活体和离体情况下的繁殖力、取食速率、性别比例、体积及致病力的变化情况。【结果】组织蛋白酶基因bmcath1被干扰后,拟松材线虫繁殖力增强约75%,取食速率变快,致病力变强,并且拟松材线虫群体的雄、雌成虫比由3:5变为6:13,成虫所占的比例由8%提高至19%。【结论】组织蛋白酶基因bmcath1对拟松材线虫的繁殖力和致病力具有显著调节作用。     

组织蛋白酶B研究进展

组织蛋白酶B(cathepsinB:EC3.4.22.1)是溶酶体内半胱氨酸内切蛋白水解酶,其作用非常广泛,参与机体多种生理、病理过程.尤为重要的是,它能促进肿瘤细胞浸润转移,因此成为目前诊断、治疗恶性肿瘤的研究热点.综述了组织蛋白酶B的生物学特性、基因与蛋白结构特点、表达调控机制,以及应用方面的研究.     

后黄卷叶蛾(Homona magnanima Diaknoff)颗粒体病毒的研究

<正>本文报道了后黄卷叶蛾颗粒体病毒野生型毒株(NJHmGV)形态特征、组织病理、感染试验及人工增殖等方面的研究成果。该病毒包含体为卵形、椭圆形,大小平均为210nm×330nm,病毒粒子为杆状,大小平均为45nm×210nm。主要侵染寄主昆虫的脂肪体和体壁真皮细胞;有较强的致病力,对后黄卷叶蛾3龄幼虫的LC_(50)为3.42×10~(-5)mg·mL~(-1)。     

溶酶体蛋白酶cathepsin B参与介导前列腺癌PC-3细胞凋亡

细胞凋亡是多细胞生物清除多余、损伤或有潜在危险细胞的一种主要生理机制.蛋白水解酶是细胞凋亡研究的重要对象,其中大部分工作都集中在探索caspases的功能和调控上.近年来,越来越多的证据显示一些非caspases蛋白酶如位于溶酶体中的cathepsins特别是cathepsin B(CTSB)参与细胞凋亡过程.溶酶体cathepsins既可以与caspases协同作用,也可以不依赖于caspases独立执行凋亡功能.选取人前列腺癌PC-3细胞株作为研究对象,通过检测PC-3细胞对TNFα、D-sphingosine两种凋亡诱导剂和caspases、cathepsins抑制剂的应答反应,以及细胞凋亡过程中溶酶体、线粒体的结构变化,证实了D-sphingosine引起PC-3细胞死亡的效应主要通过释放溶酶体中蛋白酶CTSB实现,CTSB和caspases均参与介导TNFα诱导的PC-3细胞凋亡过程,并且很可能在不同的凋亡信号通路中发挥作用.     

天津滨海新区法国梧桐展叶期生理生化特性研究

为了了解重盐分胁迫地段植物展叶期的生理生化特性变化,于春季在南开大学滨海学院选择长势较好和长势较差的法国梧桐作为研究对象,从早8:00到晚20:00,每两小时采集植物的根、枝、叶(各3次重复),分别测定分析了水分生理和保护酶活性的变化.结果表明,可溶性糖与组织水势的相关性不显著,可溶性蛋白与组织水势呈显著的线性正相关:SOD活性与组织含水量呈显著的线性正相关,CAT活性与组织含水量呈显著的线性负相关,POD与组织含水量呈相关性不显著,此时较高的组织含水量伴随较高的保护酶活性,这既反映了植物稀盐的抗逆性,又反映了保护酶清除活性氧自由基的耐逆性.分析表明,重盐分地段植物体内保护酶活性不但与盐分胁迫程度有关,而且与植物生长活力有关.     

Tissue-specific expression of glutathione S-transferases induced by 2-tridecanone or quercetin in cotton bollworms, Helicoverpa armigera (Hübner)

The tissue-specific expression of glutathione S-transferases (GSTs) in the cotton bollworm and the expression level induced by 2-tridecanone and quercetin were examined using the methods of biochemistry and the quantitative PCR. The relative expression level of GST mRNA was unanimous with the GSTs activity conjugaging with 1-chloro-2, 4-dimitro-benzene (CDNB) in fat bodies,midguts, heads and integuments of cotton bollworms. The GSTs activity in fat bodies was the highest, then midguts, heads and integuments in turn, which was in consistent with the relative expression level of GST mRNA. The specific activity of GSTs and the relative expression level of GST mRNA could be significantly induced by 2-tridecanone and quercetin, and after the induction the order of the GSTs activity and the relative expression level of GST mRNA in the above four tissues in cotton bollworms was not different from the control.The induction of GSTs by 2-tridecanone was stronger than by quercetin in all four tissues, which was in accordance with the relative expression level of GST mRNA. It suggested that the increase of GSTs activity induced by plant allelochemicals was associated with the elevated expression of GST mRNA in cotton bollworms.