条件免疫反应和支气管哮喘

条件免疫反应是根据经典条件反射或操作式条件反射的训练方式与能够引起机体免疫反应的非条件刺激相结合,经训练强化后,来影响免疫系统的变化,从而发现它们之间的规律性变化,条件免疫反应和支气哮喘的发作有一定联系,越来越多的研究表明神经系统和免疫条件各水平上都存在密切联系。     

哮喘动物模型建立的研究进展

通过对近10年国内,外支气管哮喘动物建模方面实验研究的回顾与整理,总结哮喘动物模型建立及评价方面最新进展,发现过敏性哮喘模型仍是最经典与广泛复制的模型类型,而基于哮喘表型与异质性因素而提出的中性粒细胞哮喘、难治性哮喘模型的复制也取得一定进展。     

重组融合蛋白GST—SLT—ⅡeB表达条件的研究

通过在不同温度，不同诱导时间，不同异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷诱导浓度条件下，对重组大肠杆菌ＰＰＳＬＴ－ⅡｅＢ表达的谷胱甘肽－Ｓ－转移酶与类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体Ｂ亚单位的融合蛋白（ＧＳＴ－ＳＬＴ－ⅡｅＢ）的条件，结果表明：在所试条件中，温度是影响表达的主要因素，重组大肠杆菌在２８℃温度条件下，可以明显表达融合蛋白ＧＳＴ－ＳＬＴ－ⅡｅＢ，在ＩＰＴＧ为１ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１浓度条件下，２ｈ的诱导即可获     

C—反应蛋白在脂单层膜上二维晶体组装及结构…

本文通过特异性结合和非特异性静电吸附两种途径在脂单层膜表面获得了兔Ｃ－反应蛋白的二维晶体。通过对负染样品的电镜观察和图象处理得到蛋白的二维投影密度图，分辨率达到２．２ｎｍ。分析表明，只有Ｃ－反应蛋白的亚单位在膜表面形成了二维晶体，且由于形成二维晶体的原理不同，两种二维晶体中的亚单位的在膜表面的取向是不同的。通过比较我们不仅得到了Ｃ－反应蛋白的亚单位的形状，而且建立了５个亚单位的可能的聚合模型。     

蛋白磷酸酶2C(PP2C)的表达、纯化与催化活性

从小鼠肌肉组织中提取了总RNA,经RT-PCR,扩增出蛋白磷酸酶2C(PP2C)基因,并构建了pUCm-T载体.经核酸序列分析证明PP2C基因序列正确后,将pUCm-T中的PP2C基因插入pET28a载体中,构建了表达载体pET28a-PP2C,并转化到E.coli BL21(DE3)进行表达.经测定,该菌株表达目的蛋白PP2C的最适条件为:诱导物IPTG的终浓度为0.8 mmol/L,37 ℃,诱导时间为20 h.在此条件下,PP2C实现了高效表达,表达的PP2C蛋白约占菌体总蛋白的18.2%,其中在裂解上清液、沉淀中分别占总蛋白的7.1%和11.1%.经SDS-PAGE分析,表达产物分子量约为42 000.应用Ni-NTA柱实现了可溶性PP2C的纯化,收率达80.5%,纯化的PP2C比活力达34.5 U/mg.     

重组拖丝蛋白基因在大肠杆菌中表达条件的优化

对巳构建的重组蜘蛛拖丝蛋白基因表达菌株pNS2，以IPTG为诱导剂，建立最适表达条件．在LB培养基中添加质量分数为0．1％的甘氨酸和丙氨酸，菌体培养至密度A600＝0.5—0．7时加入浓度为0．2mmol/L的IPTG，诱导5h，可得到表达量占可溶性总蛋白质27．2％的较好结果．     

苦荞蛋白磷酸酶2C家族的鉴定及表达分析

为了研究苦荞蛋白磷酸酶2C(PP2C)家族的成员和分类,及后续探究其在苦荞生长发育中的功能,本文利用生物信息学方法对苦荞PP2C家族进行鉴定、分类,并对其基因结构、保守基序、分子进化等进行分析.结果表明,苦荞PP2C家族有81个成员,划分为A-K的11个亚族,并且在同亚族中序列特征相似,而不同亚族间序列特征有一定差异;苦荞PP2C家族有14次基因重复事件.此外,qRT-PCR分析结果表明其A亚族基因在苦荞根、茎、叶、花、果中均有表达,除FtPP2C44外的8个基因在苦荞花、果中表达量较高;在苦荞幼苗中,除FtPP2C08外的8个基因均受ABA诱导表达量上调.上述结果揭示了苦荞PP2C家族的成员组成、序列特征、扩增和其A亚族基因的组织表达模式及受ABA诱导表达情况.     

蛋白磷酸酶2C（PP2C）的表达、 纯化与催化活性

从小鼠肌肉组织中提取了总RNA, 经RT PCR, 扩增出蛋白磷酸酶2C（PP2C）基因, 并构建了pUCm T载体. 经核酸序列分析证明PP2C基因序列正确后, 将pUCm T中的PP2C基因插入pET28a载体中, 构建了表达载体pET28a PP2C, 并转化到E.coli BL21(DE3)进行表达. 经测定, 该菌株表达目的蛋白PP2C的最适条件为： 诱导物IPTG的终浓度为0.8 mmol/L, 37 ℃, 诱导时间为20 h. 在此条件下, PP2C实现了高 效表达, 表达的PP2C蛋白约占菌体总蛋白的18.2%, 其中在裂解上清液、 沉淀中分别占总蛋白的7.1%和11.1%. 经SDS PAGE分析, 表达产物分子量约为42 000. 应用Ni NTA柱实现了可溶性PP2C的纯化, 收率达805%, 纯化的PP2C比活力达34.5 U/mg.     

重组融合蛋白GST-SLT-ⅡeB表达条件的研究

通过在不同温度、不同诱导时间、不同异丙基硫代βD半乳糖苷（IPTG）诱导浓度条件下,对重组大肠杆菌PPSLT-ⅡeB表达的谷胱甘肽S转移酶（GST）与类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体B亚单位（SLT-ⅡeB）的融合蛋白（GST-SLT-ⅡeB）的分析,结果表明在所试条件中,温度是影响表达的主要因素,重组大肠杆菌（PPSLT-ⅡeB）在28℃温度条件下,可以明显表达融合蛋白GST-SLT-ⅡeB. 在IPTG为1mmol     

高湿哮喘动物模型的建立

目的 研究高湿环境对哮喘的影响,建立高湿损伤动物模型和高湿哮喘动物模型。方法 雌性BALB/c小鼠置于人工气候箱中模拟高湿环境,分为对照组(A组)、哮喘组(B组)、高湿组(C组)和高湿哮喘组(D组)。A组置于常温常湿条件下饲养,B组在常温常湿环境下饲养,并通过卵清蛋白(OVA)致敏和激发,C组置于常温高湿环境下饲养,D组在常温高湿环境下饲养,并通过卵清蛋白(OVA)致敏和激发。结果 B、C、D组与A组相比,出现不同程度的粪便稀烂、皮毛暗淡、行为暴躁、体质量减轻、血常规指标异常(P<0.05),B、D组免疫炎症反应、肺泡灌洗液嗜酸性细胞比例、肺部病理变化等情况明显高于A、C组(P<0.05),且D组炎症反应高于B组(P<0.05);结论 高湿环境可以诱导或者加剧哮喘症状,高湿哮喘动物模型可为在高湿环境中研究哮喘的发生、发展奠定基础。     

固本清肺贴膏对豚鼠过敏性哮喘模型的影响

目的通过建立豚鼠过敏性哮喘模型,观察固本清肺贴膏对豚鼠哮喘模型的平喘、抗炎作用。方法采用腹腔注射10%卵蛋白生理盐水致敏,14d后用1%卵蛋白生理盐水激发3次,建立豚鼠过敏性哮喘模型,观察固本清肺贴膏对哮喘豚鼠的引喘潜伏期及支气管肺泡灌洗液中白细胞总数的影响。结果固本清肺贴膏能延长哮喘豚鼠引喘潜伏期、减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞总数。结论固本清肺贴膏对豚鼠过敏性哮喘模型具有平喘和抗炎作用。     

新生大鼠铅损伤动物模型的建立

目的　建立新生大鼠铅损伤动物模型 ,用于研究铅对发育脑的损害。方法　选取 3窝新生Wistar大鼠 ,随机分成正常对照组、低沿组和高铅组。分别于出生 0、2、4、6、8、10、12、14d给予腹腔注射醋酸铅溶液 0 1mL ,注射剂量分别为 0、2 0、6 0mg kg(按出生体重计算 )。各鼠分组不分窝 ,均由母鼠哺乳。结果　第 17d断头处死各鼠 ,检测血铅值分别为 :对照组 3 5± 6 6 μg L、低铅组 4 10 8± 4 6 6 3μg L、高铅组均 >6 5 0 μg L ,正常组在正常范围内 ,低铅组已达中度铅中毒 ,而高铅组已达重度铅中毒。结论　新生大鼠腹腔注射醋酸铅溶液建立动物铅损伤模型是一种简便、可靠、易于控制的方法 ,可用于铅对发育脑损伤的研究     

三聚氰胺对孕鼠毒性作用动物模型的建立

目的为研究三聚氰胺对孕鼠的毒性作用建立动物模型。方法以120、240、360、480、600、720 mg/kg·d剂量的三聚氰胺给孕鼠灌胃,对照组等量蒸馏水灌胃,观察孕鼠的生长及生产情况,采用ELISA检测新生鼠血液和肾脏中的三聚氰胺、检测新生鼠肾脏功能、HE染色观察新生鼠肾组织病理变化。结果灌胃剂量为720 mg/kg·d的实验组出现明显变化：孕鼠体重增长率降低（P〈0.05）;新生鼠产量降低（P〈0.05）;新生鼠血液和肾脏内三聚氰胺浓度高于对照组（P〈0.05）;新生鼠肾脏功能下降;肾脏组织出现明显病理变化。结论灌胃720 mg/kg·d浓度的三聚氰胺对孕鼠产生严重的毒性作用,成功建立了三聚氰胺对孕鼠毒性作用的动物模型。     

萎缩性胃炎实验动物模型的研究状况

从物理、化学因素、免疫法和外科方法及综合法等 5个方面对萎缩性胃炎动物模型制作的现状进行了综述和评价。认为CAG实验动物模型建立的研究应向快速、高成功率、稳定、可靠和经济等方面努力     

大鼠抑郁症模型的建立与评价

目的建立大鼠抑郁症模型并进行评价。方法将40只大鼠随机分为空白对照组、模型组,采用慢性、中等和不可预知应激刺激建立抑郁症模型,观查大鼠行为学指标：大鼠敞箱试验、糖水消耗试验、食物消耗量、去甲肾上腺素（NE）、5-羟色胺（5-HT）和皮质醇（CORT）水平。结果与正常组比较,模型组的水平得分垂直得分、糖水消耗、体重、进食量、NE、5-HT、CORT较空白组有明显差异（P〈0.05或P〈0.01）。结论采用慢性、中等和不可预知应激刺激建立的抑郁症模型符合抑郁症的特征,可作为抑郁症实验模型。     

血虚证动物模型的标准化研究初探

目的建立标准化的血虚证动物模型。方法采用慢性失血法、溶血法和骨髓抑制法制造三种血虚证模型,观察一般情况和与血发生有关的实验室指标,并用四物汤反证造摸效果。结果三种动物模型均符合血虚证表现,同时出现外周血、骨髓有核细胞数目和细胞周期的改变,四物汤对三种动物模型均有一定疗效。结论建立了三种符合标准化的血虚证模型。     

慢性不可预知性应激刺激建立大鼠颞下颌关节紊乱病模型

目的对大鼠进行人工干预下的情绪应激试验,观察大鼠下颌关节结构的变化,尝试建立颞下颌关节紊乱病(TMD)的动物模型。方法雄性Wistar大鼠16只,随机分为两组,分别为实验组和对照组。实验组进行慢性不可预知性应激试验,对照组正常饲养。观察各组大鼠行为学改变,6周后处死,完整解剖分离下颌髁状突及关节盘,扫描电镜观察。结果实验组大鼠行为学指标改变明显,扫描电镜下显示髁状突表面凝胶不完整,胶原纤维紊乱,断裂,暴露深层胶原组织等,关节盘表面凝胶样物质覆盖仍较完整,但沟回排列不规则,回隆起缩窄降低,沟变浅,对照组无此改变。结论慢性不可预见性应激刺激可造成大鼠下颌关节盘、突退行性改变,符合TMD病理改变,认为建立大鼠颞下颌关节紊乱病动物模型成功。